奶牛胚胎分割移植试验研究

用简单方法直接分割7～8日龄新鲜胚胎(一分为二),裸半胚成对移植给66头受体,90d 妊检,移植妊娠率为56.1%(37/66)。除6头流产和尚有5头待产外,已有26头受体产犊35头,其中有9对同卵双胎,双胎率为34.6%(9/26),半胚产犊率为29.2%(35/110)。对影响成对半胚移植妊娠率和半胚产犊率的因素如胚胎质量、胚胎在体外停留时间、胚胎发育阶段、黄体状况、受体牛品种等进行了较系统的研究。此外对冷冻胚胎进行了分割试验,移植妊娠率为45.5%(5/11),产3头犊牛。对快速冷冻和常规冷冻胚胎分割后的移植妊娠率进行了比较,分别为25.0%(1/4)和57.4%(4/7)。     

奶牛胚胎一分为四分割移植试验

1990年7月至1991年3月,以非手术方法采得黑白花奶牛7日龄胚胎。在立体显微镜下,应用徒手简易胚胎分割法,一分为四分割6枚胚胎。将所分割的24枚1/4裸胚,以非手术方法,分别移植给18头受体牛。其中9头妊娠,受体移植妊娠率为50％(9/18),胚胎移植妊娠率为150％(9/6)。得到同胚三犊一组,同胚二胎一组(其中一头产犊,一头流产)和单胎四个(其中两头产犊,两头流产)。     

西德高产奶牛胚胎引进移植试验

解冻西德高产奶牛冻胚16枚,其中可用胚13枚,3枚为部分变性胚。将其分别移植给16头受体牛,3头妊娠产犊,二母一公,犊牛健康活泼,毛皮细薄光亮。     

中国荷斯坦牛冷冻胚胎分割移植试验研究

牛胚胎冷冻的成功，使胚胎移植技术不受时间、地域的限制，并且可以做到对受体进行选择，从而可提高移植妊娠率；牛胚胎分割的成功，是增加胚胎数目和生产同卵双犊或多犊、获得更多牛犊的一个有效方法。如果将胚胎冷冻和胚胎分割技术结合起来，那未就可以达到既增加胚胎数目，降低胚胎移植成本，又利于胚胎移植技术在生产中推广应用的双重目的，为此开展此项研究。将用１０％甘油为冷冻剂，８枚７日龄中国荷斯坦奶牛的冷冻胚胎，在３５℃水浴解冻，用１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液脱除抗冻剂，７枚可用胚胎用简单方法分割成１４枚半胚，将裸半胚成对移植于与胚胎日龄同步的７头受体牛。结果３头妊娠，移植妊娠率为４２．９％（３／７），共产５头牛犊，其中２头产同卵双犊，半胚产犊率为３５．７％（５／１４），按整胚计算产犊率为７１．４％（５／７），较同期未分割的冷冻胚胎的产犊率３７．８％（１７／４５）提高３３．６个百分点。     

利用荷斯坦奶牛性别控制胚胎生产高产奶牛的试验效果

2005年10月,在大理市戒毒所奶牛场开展了性别控制胚胎移植的首次试验,使用进口荷斯坦奶牛性控胚胎体外胚8枚,移植给14～18月龄青年母牛受体7头,2006年7月,产犊3头母牛,妊娠率及产犊率为42.8%,性别控制准确率达100%,出生犊牛系谱清楚,个体质量很高。结果表明,直接使用性控胚胎进行移植是加速良种引进、提高繁殖效率和牛群质量的有效途径。     

南德温牛胚胎移植研究

为了研究适于大型肉牛———南德温牛的超数排卵及胚胎移植技术,选择11头适龄南德温牛为供体牛和9头南阳牛为受体牛,进行CIDR-FSH-PG超数排卵和胚胎移植试验。结果表明,供体牛均按时发情,反应率100%,共采胚99枚,获可用胚胎65枚,平均每头5.91枚,可用胚胎率65.0%,可用胚胎等级A、B、C级分别为38.5%、30.8%、30.7%,共移植受体9头,妊娠6头,受胎率66.67%,共产犊9头,其中产双犊3头,其余胚胎进行了冷冻保存。     

采用国产药械对奶牛胚胎冷冻保存及移植研究

试验采用国产药械,对奶牛进行超数排卵、胚胎采集。在鲜胚移植成功的基础上,对胚胎进行冷冻保存和移植黄牛等项研究均获成功。其超排成功率达86％,采胚成功率达90.7％,产胚牛平均产胚8.97枚,有效胚7.25枚.冷冻保存45天以上解冻成活率88.7％,移植黄牛及改良牛112头次,妊娠产犊33头,冷冻移植成功率29.6％,其中成功率最高的试验基点达37.5％。可见采用价格低廉的国产药械。进行奶牛胚胎的冷冻移植是完全可行的。     

牛胚胎直接投入液氮快速冷冻技术的研究

取超排获得的优质桑葚期和早囊期，胚胎４３枚，经过玻璃化液处理，液氮中保存５－９８天后进行解冻，有２４枚完好，其中７枚胚胎经ＣＯ２培养箱中培养２４小时，有４枚继续发育（５７％）。移植奶牛４头（单胚），１头受胎产犊；移植黄牛６头（双胚），１头受产犊；另１头早期流产。     

影响牛胚胎移植受精率因素探讨

本文论述了太原市和全省各地在牛胚胎引进项目期间,对影响牛胚胎移植成功率的受体牛选择、受体牛饲养管理、受体牛发情鉴定、气候条件、胚胎质量、胚胎解冻操作技术、受体牛移植操作技术等七个因素进行了有益的探讨,取得可喜成果。累计移植受体牛235头,移植妊娠112头,移植妊娠受胎率47.7%,移植受体牛产犊成活率达到94%,为我省全面推广奶牛胚胎生物移植工程技术奠定了坚实基础。     

牛胚胎分割及半胚移植研究

对来自黑白花及西门塔尔超排母牛的７～８日龄胚胎，采用手持微玻璃针，在普通解剖镜下进行分割。通过非手术法将裸半胚移入发情后７天的受体牛黄体侧子宫角。在太原市郊奶牛场及太行山区农民户养牛中，共移植受体牛４５头，结果妊娠产犊２５头，移植成功率为５５．６％。     

油菜波里马细胞质雄性不育恢复基因的筛选与遗传

通过大量的筛选,在白菜型、芥菜型和甘蓝型油菜中分别新发现了4个、3个和3个恢复系,并将已筛选到的白菜型和芥菜型油菜恢复基因转移到甘蓝型油菜中。遗传研究表明,这些不同来源的恢复基因均为一对主效基因,并与原波里马细胞质雄性不育的恢复基因等位。     

基于高副低代方法的平面凸轮设计

基于高副低代原理，将平面凸轮机构代换为平面连杆机构，运用圆向量函数建立代换机构的位移、速度、加速度矢量方程式，通过计算虚拟连杆的杆长和方向，求得凸轮实际廓线、曲率半径和压力角的表达式。并给出用圆形刀具加工凸轮时刀具中心的轨迹方程。运用该方法详细分析了滚子直动和滚子摆动从动件盘形凸轮机构中的凸轮设计问题，并对平面凸轮进行了设计，结果表明，该方法正确可行。     

刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3的克隆与原核表达

根据Genbank中编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术对刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3进行克隆、表达及鉴定.结果表明:克隆的MIC3基因的开放阅读框与Genbank收录的MIC3基因在核菌酸和氨基酸水平上高度一致,说明弓形虫MIC3蛋白的高度保守性;构建的原核细胞表达质粒PET-MIC3表达产物分子量为46 ku,且经Western-blot显示可被猪抗弓形虫免疫血清识别.     

产气荚膜梭菌肠毒素基因原核表达载体的构建

以含C型产气荚膜梭菌分离株(CP2)肠毒素基因的克隆载体pMD18-T-cpe为材料,根据产气荚膜梭菌开放阅读框设计合成一对特异性引物,采用PCR技术对其进行扩增,经BamHI和EcoRI双酶切后,从胶上回收目的基因,与经过相同两种内切酶处理的原核表达栽体pET32a连接,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞后,提取质粒进行PCR和BamHI/EcoRI双酶切鉴定后测序.结果表明,肠毒素基因已成功地克隆到原核表达栽体上(重组质粒命名为pET32a-cpe),从而构建了产气荚膜梭菌肠毒素基因的原核表达质粒.     

牛分枝杆菌广西分离株ESAT-6基因鉴定及遗传进化分析

根据GenBank中牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis,M.bovis）的ESAT-6基因序列（No：BX248347）设计1对引物,PCR扩增获得2株牛分枝杆菌广西分离株（mt359、mt370）,纯化产物与pMD18-T载体连接后转化大肠杆菌DH5α,对经双酶切和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序及同源性比较分析。结果表明,牛分枝杆菌广西分离株mt359、mt370与GenBank中已发表的6株毒株（5株结核分枝杆菌和1株牛分枝杆菌）的核苷酸同源性及推导的氨基酸同源性均为100.0%,与牛分枝杆菌标准株C680001的核苷酸同源性及推导的氨基酸同源性均为96.6%。说明致病性牛分枝杆菌的ESAT-6基因十分保守,不存在种间差异。     

大肠杆菌野生株K99菌毛蛋白结构基因的克隆与序列分析

根据产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99菌毛蛋白的全基因序列设计产肠毒素大肠杆菌主要菌毛K99的一对引物。PCR扩增K99菌毛蛋白的全基因序列大小为546bp。将PCR扩增的目的片断克隆于pMD18-T载体、pET-32a载体中,分别转化大肠杆菌,经酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列分析,筛选出阳性克隆。经过序列比对,所克隆的外源基因与报道的K99菌毛蛋白结构基因序列同源性达99.3%。成功克隆分离到的产肠毒素大肠杆菌菌毛的K99基因,为当地产肠毒素性大肠杆菌病疫苗的选择及基因疫苗的研制提供了坚实的理论基础,为产肠毒素性大肠杆菌病检测、预防及基因工程疫苗的研制开辟新的途径。     

鸡IL-2基因克隆及其重组质粒的构建与表达

利用一对自行设计的引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从ConA诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素2(IL-2)基因片段,其长度为439 bp,经酶切鉴定,初步确定为鸡IL-2基因.再将该IL-2基因片段定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经DNA序列鉴定,表明构建的重组质粒含有IL-2基因,该基因的cDNA序列与Sundick报道的结果基本一致.然后,将IL-2基因片段插入原核表达载体pGEX-4T-1,并导入菌株BL21, 经诱导培养、蛋白提取和SDS-PAGE,获得分子量约为42 000的蛋白条带,表明所克隆的鸡IL-2基因在原核细胞中得到表达.     

苜蓿转LEA_3基因研究

以苜蓿(Medicago sativa)品种中苜一号为试材,进行愈伤组织的诱导。通过基因枪法将来源于大麦的胚胎发生丰富蛋白基因lea3导入愈伤组织细胞,于8 mg/L PPT的选择压力下筛选2个月,获得了抗性愈伤组织及再生植株,并将再生植株再次转入含有PPT的诱导继代培养基中进行筛选。通过PCR检测,在21株再生植株中有2株扩增出了目的基因片段。证实lea3基因已导入了苜蓿细胞中,并表达。     

安格斯（Angus）牛冻胚洲际间引种试验

用安格斯牛７日龄冻胚１６枚，在液氮中保存８９４ｄ后，用３６℃水浴解冻（２５Ｓ），全部回收。在室温２７℃条件下，用１０％蔗糖一步脱除抗冻剂（甘油）１０ｍｉｎ后，移入２０％犊牛血清ＰＢＳ１０ｍｉｎ，再移人同样浓度的犊牛血清ＰＢＳ中１０ｍｉｎ，按常规形态鉴定方法．对胚胎评级，１０枚为可用胚胎，解冻后胚胎可用率为６２．５％，将１０枚可用胚胎用非手术法，移入发情周期与胚胎发育期同步的５头受体牛，结果２头妊娠，移植妊娠率为４０％。妊娠足月后，２头受体牛各产公犊１头，试验结果表明，在液氮中保存８９４ｄ之久的安格斯牛冻胚，进行洲际间引种能够成功，这也是安格斯牛冻胚洲际间引种，在我国首次获得成功。