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Ⅱ型猪圆环病毒(porcine circovirus type 2,PCV-2)为近年来引起多种综合征的重要病原[1-3],且经常与猪呼吸与繁殖障碍综合症、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流感病毒发生混合感染[4-5]。建立对于该病毒的快速检测及准确定量的方法,无疑对于病原诊断及病因学研究具有重要的意义。实时荧光定量PCR具有敏感性高、重复性好、速度快、操作简便和污染少等优点[6]。本试验应用SyReTi-PCR方法,建立了标准曲线,并进一步的通过对该方法敏感性、特异性及重复性的检测证明,所建立的SyReTi-PCR检测PCV-2的方法具有良好的特异性、敏感性和稳定… 相似文献
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根据产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99菌毛蛋白的全基因序列设计产肠毒素大肠杆菌主要菌毛K99的一对引物。PCR扩增K99菌毛蛋白的全基因序列大小为546bp。将PCR扩增的目的片断克隆于pMD18-T载体、pET-32a载体中,分别转化大肠杆菌,经酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列分析,筛选出阳性克隆。经过序列比对,所克隆的外源基因与报道的K99菌毛蛋白结构基因序列同源性达99.3%。成功克隆分离到的产肠毒素大肠杆菌菌毛的K99基因,为当地产肠毒素性大肠杆菌病疫苗的选择及基因疫苗的研制提供了坚实的理论基础,为产肠毒素性大肠杆菌病检测、预防及基因工程疫苗的研制开辟新的途径。 相似文献
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根据PCV2-871病毒株的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去核定位信号的Cap基因（ORF2）。通过BamHⅠ/HindⅢ双酶切位点将其克隆到表达载体pQE-32中,转化大肠杆菌M15。经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定,表明去核定位信号的Cap蛋白可以大量表达。Western blot、ELISA鉴定蛋白活性。继而。以重组蛋白为抗原包被ELISA板,对28份临床样品进行检测。结果表明,该蛋白具有良好的抗原活性,可以作为抗原应用于临床样品的检测。 相似文献
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随着人们对生命活动本质认识的不断深入,特别是人类基因组计划的完成,生命科学领域的研究又面临着新的挑战,即开发出能同时大规模处理生物样品和解析生物信息的新技术-基因芯片技术。在学科交叉不断深入的基础上诞生的基因芯片技术目前已成为国际上的前沿研究领域和研究热点。生物芯片是Fodor等人于1991年在著名的Science上提出来的。而基因芯片是生物芯片的一种,也是当前应用最为广泛的一种生物芯片。随着对基因芯片技术及其功能研究的不断深入,人们已经意识到基因芯片技术将对生物界乃至整个医学界的疾病诊断及治疗具有重要的意义并将产… 相似文献
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