半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞c-Myc、Bcl-2及PCNA表达的抑制作用

目的：研究蕨类植物半边旗提取物6F对HL—60细胞内c—Myc、Bcl—2及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响，探讨其抗肿瘤作用机制。方法：异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗体与细胞反应后在流式细胞仪上检测上述三种蛋白的表达水平。结果：58—231nmol/L 6F作用HL-60细12h后，c—Myc、Bcl—2及PCNA蛋白表达水平明显下降，并呈剂量效应关系。结论：化合物6F可下调HL—60细胞c—Myc、Bcl—2及PCNA的表达水平，推测这是6F对HL—60细胞具有强烈细胞毒作用并诱导其细胞凋亡的机制之一。     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞的 DNA、RNA及蛋白质生物合成的抑制作用

目的：从DNA、RNA及蛋白质生物合成的角度探讨半边旗有效成分6F抗肿瘤的作用机理。方法：用台盼蓝拒染法测定细胞成活率；[^3H]—TdR，[^3H]—UTP和[^3H]—Leu参入法分别测定细胞DNA、RNA及蛋白质生物合成的水平。结果：6F对HL—60细胞生长有强烈的抑制作用，且具明显的时间和剂量效应关系。6F明显抑制HL—60细胞DNA、RNA及蛋白质生物合成，呈剂量依赖关系。6F对蛋白质合成的抑制作用最强。结论：6F对HL—60细胞生长有强烈的抑制作用，抑制细胞DNA、RNA，特别是蛋白质的生物合成是6F抗肿瘤作用的可能机制之一。     

氧化应激对离体大鼠小肠上皮细胞的损伤及抗氧化研究

为了探讨氧化应激对动物小肠上皮细胞内抗氧化酶活性、细胞通透性和细胞增值的影响,并进一步研究GSH对离体小肠上皮细胞诱导型氧化损伤的保护作用。通过建立大鼠小肠上皮细胞X/XO体外氧化损伤模型,培养细胞随机分为7组,18个重复:对照组A加入蒸馏水,氧化损伤B、C、D各组加入黄嘌呤X(10μmol/L),并分别加入黄嘌呤氧化酶XO,(10,40,70 U/L),抗氧化E、F、G各组加入X(10μmol/L)和谷胱甘肽GSH(1.5μmol/ml),并分别加入XO(10,40,70U/L),应激培养24 h。研究发现:不同剂量的X/XO均可导致离体大鼠小肠上皮细胞氧化应激的发生。与对照组比较,显著降低了IEC增殖和CAT的活性,明显提高细胞内Ca2+浓度(P<0.05)。低活性XO(10U/L)提高了SOD活性(P>0.05),然而高活性XO(40,70 U/L)显著降低了细胞内SOD的活性(P<0.05),添加谷胱甘肽提高了抗氧化酶的活性和细胞增殖,显著降低了细胞内的Ca2+浓度。     

镉诱导锦鲤肾脏氧化性DNA损伤及谷胱甘肽抗氧化系统改变

研究镉(Cd)暴露对锦鲤(Carassius auratus L.)肾脏氧化应激、氧化性DNA损伤、谷胱甘肽抗氧化系统的影响。试验采用静水生物养殖法,将40尾锦鲤随机分为4组,每组10尾,分别暴露于0、5、10、20 mg/L的Cd Cl2水溶液中,持续96 h。观察锦鲤的行为变化,测定肾脏丙二醛(MDA)含量、氧化性DNA指标8-羟基鸟嘌呤(8-OHd G)水平、还原型谷胱甘肽(GSH)水平,并检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)的活性。结果表明,Cd暴露使锦鲤发生明显改变,MDA、8-OHd G、GSH水平均升高,并改变了谷胱甘肽抗氧化酶系统。     

马尾藻多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖及氧化应激影响的实验观察

马尾藻具有很高的食用和药用价值,分离提取马尾藻多糖(Sargassum polysaccharides,SP),对其理化性质进行分析;研究马尾藻多糖对氧化应激态鸡脾脏淋巴细胞内谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮(NO)分泌水平及淋巴细胞体外增殖的影响.结果表明:马尾藻多糖提取率为152.8 g/L;马尾藻多糖浓度为100、200、400 mg/L时,能显著促进体外培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖;H2O2浓度为50 μmol/L时,能诱导体外培养的鸡脾脏淋巴细胞处于氧化应激状态.马尾藻多糖浓度为400 mg/L,与细胞共孵育4h或12h,能显著增加氧化应激态细胞内GSH含量;共孵育培养8h,能显著降低氧化应激态细胞的NO水平.马尾藻多糖能促进鸡脾脏淋巴细胞增殖,并通过调节细胞内GSH和NO水平,提高免疫细胞的抗氧化能力,发挥免疫调节作用.     

硝酸盐对小麦幼苗根系早期生长和抗氧化特性的影响

以小麦(Triticum aestivum L.)秋乐2122作为供试材料,以不含硝酸盐的Hoagland溶液为对照,研究不同浓度硝酸盐对小麦根系发育的影响。利用分光光度计和组化染色法检测根尖细胞中O_2~-·和H_2O_2含量,并测定细胞内相关氧化还原酶活性与还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果表明,硝酸盐能够显著增加小麦根尖细胞中O_2~-·而不是H_2O_2含量;高浓度硝酸盐(60 mmol/L)处理O_2~-·含量显著高于低浓度硝酸盐(10 mmol/L)处理。低浓度硝酸盐显著降低SOD酶活性和GSH含量,提高POD、谷胱甘肽还原酶(GR)和GSH-PX酶活性,使根部细胞具有良好的抗氧化能力,促进小麦根系生长。高浓度硝酸盐抑制小麦幼苗根系生长,是由于降低SOD与GSH-PX酶活性;虽然增加POD和GR酶活性,但是仍无法缓解根部细胞O_2~-·过量积累而造成的氧化损伤。所以不同浓度硝酸盐通过调节胞内O_2~-·含量,实现对小麦根系生长的调控。     

α-三联噻吩致斜纹夜蛾SL细胞氧化损伤的研究

 【目的】研究光敏剂α-三联噻吩（α-terthienyl，α-T）对斜纹夜蛾（Spodoptera litura，SL）细胞的毒杀活性及其机理。【方法】MTT法测定α-T对离体培养的SL细胞的细胞毒力，并与鱼藤酮进行比较。用硫代巴比妥酸（TBA）法测定细胞内丙二醛（MDA）的生成量，5,5′-二硫代双-（2-硝基）苯甲酸（DTNB）法测定细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）的相对含量，通过透射电子显微镜观察α-T对SL生物膜及细胞器的影响。【结果】光活化后的α-T对SL细胞48h的IC50值为0.21μg•ml-1，而鱼藤酮为12.25μg•ml-1。同时发现α-T光照处理后细胞内MDA生成量与药剂浓度呈正相关，表明细胞受到α-T的氧化损伤，而GSH相对含量与α-T浓度呈负相关。透射电镜显示，α-T光照处理后SL细胞膜和核膜缺损、肿胀，内容物外泻，胞内出现不明深色颗粒，线粒体膨大，膜和亚细胞器结构受到严重破坏。【结论】SL细胞受到α-T的氧化损伤后，MDA生成量显著增加，GSH含量下降，细胞的抗氧化能力减弱，透射电镜结果显示SL细胞在α-T的试验剂量下受到了严重的氧化损伤。     

低温胁迫对不同品系甘蓝幼叶AsA-GSH 循环代谢的影响

[目的]分析低温(4℃)胁迫下甘蓝(Brassica oleracea L.)幼叶中还原型抗坏血酸—还原型谷胱甘肽(AsA-GSH)循环代谢的变化,为选育和推广抗寒甘蓝品种提供参考依据.[方法]以4个不同耐寒性甘蓝品系为试验材料,测定分析低温胁迫下其过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)、AsA、GSH、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、氧化型抗坏血酸(DHA)含量和AsA/DHA、GSH/GSSG及抗坏血酸过氧化物酶(APX)、谷胱甘肽还原酶(GR)和单脱氢抗坏血酸还原酶(MDAR)活性的变化情况.[结果]随低温胁迫时间的延长,4个甘蓝品系幼叶的H2O2和MDA含量均明显增加;耐寒甘蓝品系231和235的AsA、GSH和GSSG含量显著增加(P<0.05,下同),不耐寒甘蓝品系161和163的AsA、GSH和GSSG含量则呈先增加后减少的变化趋势;DHA含量均呈增加趋势,AsA/DHA和GSH/GSSG均呈先增加后减少的变化趋势,但不同耐寒性甘蓝品系间存在差异;AsA-GSH循环中的APX、GR和MDAR活性在低温胁迫期间均呈上升趋势,而脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性呈先升高后降低的变化趋势.[结论]耐寒甘蓝品系231和235能更迅速响应低温胁迫,可有效清除H2O2,减轻氧化应激损伤,维持甘蓝体内的氧化还原平衡.     

霉菌毒素OTA和α-ZOL对Hep G2细胞增殖及氧化损伤的影响

为了研究不同剂量赭曲霉毒素A(OTA)和α-玉米赤霉烯醇(α-ZOL)联合作用对Hep G2细胞毒性的交互作用及其可能机制,试验采用3×3析因试验设计,设OTA浓度和α-ZOL浓度2个因素,OTA浓度水平分别为0、6和12μmol/L,α-ZOL浓度水平分别为0、15和30μmol/L,全组合后共组成9个水平组合.毒素作用时间为48h.用边际均数轮廓图判断细胞毒性和氧化损伤的交互作用,结果发现OTA和α-ZOL联合作用时,细胞毒性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和谷胱甘肽(GSH)含量的交互作用一致,均表现为拮抗效应;且细胞活力的变化与SOD活性、MDA含量、GSH-PX活性和GSH含量的变化表现为显著性相关(P0.05).结果表明细胞毒性的交互作用为拮抗效应,且氧化损伤是毒素诱发细胞毒性的主要途径之一.     

猪苓多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成、iNOS活性和细胞内还原型谷胱甘肽含量的影响

目的 :观察猪苓多糖 (PPS)对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮 (NO)生成及其免疫调节作用和抗肿瘤作用机制。方法 :采用Griess反应、荧光法和DTNB比色法分别测定不同剂量的PPS作用小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)活性及细胞内还原性谷胱甘肽 (GSH)含量的变化。结果 :PPS能使小鼠腹腔巨噬细胞NO生成增加 ,i NOS活性增高 ,并呈作用剂量依赖关系 ;PPS在刺激小鼠腹腔巨噬细胞NO合成同时 ,伴有细胞内GSH水平的降低 ,呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论 :PPS能提高小鼠腹腔巨噬细胞iNOS活性 ,增加NO合成 ,消耗细胞内的GSH。提示细胞内GSH可能起到调节巨噬细胞NO生成和保护宿主细胞免受NO介导的细胞毒作用     

梁金菇多糖诱导白血病细胞株HL-60凋亡的研究

目的：观察梁金菇多糖对自血病细胞株HL-60凋亡的影响。方法：HL-60细胞与不同浓度的梁金菇多糖共同孵育5d后，采用荧光显微镜与透射电镜观察细胞形态及结构、DNA凝胶电泳观察“阶梯状”条带、流式细胞仪测定凋亡率。结果：细胞出现核碎裂、核溶解，凋亡小体形成等典型的凋亡形态学变化。结论；梁金菇多糖能诱导HL-60细胞发生典型凋亡。     

谷光甘肽对冷藏枇杷果实木质化相关生理指标的影响*

  以“解放钟”枇杷(Eriobotrya japonica LindlcvJiefangzhong)为试材, 研究外源还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)对6 ℃冷藏枇杷果实苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase, PAL)、多酚氧化酶(polyphenol oxidase , PPO)、4-香豆酸辅酶A连接酶(4 coumarate coenzyme A ligase, 4 CL)、肉桂醇脱氢酶(cinnamyl alcohol dehydrogenase, CAD)、过氧化物酶(peroxidase, POD)和多胺氧化酶(polyamine oxidase, PAO)活性以及可溶性糖含量变化与果实木质化的关系。结果表明, 外源GSH处理通过抑制冷藏枇杷果实中PAL,POD和PAO活性上升, 从而抑制果实木质素的形成,并延缓可溶性糖的下降; 但GSH处理对果实PPO,CAD和4 CL酶活力影响较小, 它们可能在枇杷果实木质化中不起主要作用。GSH具有减缓冷藏枇杷果实木质化的作用, 其中以10g/L和15g/L的GSH所处理的枇杷果实木质化程度较低。关键词：枇杷; 木质化; 谷胱甘肽(GSH); 苯丙氨酸解氨酶(PAL); 过氧化物酶(POD); 多胺氧化酶(PAO)100, China     

普洱茶预防SD大鼠高脂血症及抗氧化、保护血管内皮的研究

 研究普洱茶预防SD大鼠高脂血症及抗氧化、保护血管内皮的作用及机制。SD大鼠高脂饲料造模的同时给予不同剂量普洱茶35d,检测体重及血脂水平;血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-PX）、微量丙二醛（malondialchehyche,MDA）;血浆6-酮-前列腺素F1a（6-keto-prostaglandin F1a, 6 keto PGF1a）、血栓素B2 (thromboxane B2, TXB2)。进行主动脉病理组织学检查。结果显示：普洱生茶及熟茶组与模型组相比：体重明显减轻。血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglycerides, TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol, LDL C）明显降低。血清MDA生成减少,SOD,GSH PX活性增强,其中熟茶组的作用更明显。血浆6 keto PGF1a浓度增加,TXB2浓度降低。主动脉血管壁内皮细胞损伤减轻。普洱茶能够预防高脂饲料模型所致SD大鼠高脂血症,熟茶的作用更显著。普洱茶具有保护血管内皮的作用,其作用机制可能与其抗氧化,促进PGI2合成,抑制TXA2合成有关。     

耐草甘膦转EPSPS/GAT大豆多重PCR检测体系的建立及应用

【目的】建立一种精准、高效的草甘膦抗性基因G2-EPSPS和GAT的检测方法,为转基因大豆新品系ZH10-6的广泛应用提供技术支持。【方法】根据抗草甘膦大豆ZH10-6和受体中黄10的分子特征,设计大豆内源参考基因（Actin）、外源基因（G2-EPSPS和GAT）以及侧翼序列（G2EPSPS-2/ZH10P2和ZH10P1/GAT-2）的特异性引物,通过PCR扩增测试引物的特异性和适用性。调整引物配比、DNA模板量、dNTP含量、退火温度和延伸温度等,筛选该多重PCR体系的最适扩增条件。将转基因大豆ZH10-6和受体中黄10的基因组DNA按质量比混合,制备成100%、50%、10%、5%、1%、0.5%、0.1%和0的DNA样品,进行灵敏度检测。运用建立的多重PCR体系检测转基因大豆ZH10-6不同地理来源的11份衍生品系,并根据鉴定结果对该体系的应用性进行评价。【结果】建立的多重PCR方法中引物GmActin11 F/R、G2-EPSPS F/R、GAT F/R、ZH10P1/GAT和G2/ZH10P2可分别扩增出转基因大豆ZH10-6大小为126、430、338、810和1 626 bp的特异性目标条带。用该方法扩增受体中黄10时,除了GmActin11 F/R可以扩增出126 bp目标条带,侧翼序列上游引物ZH10P1和下游引物ZH10P2也可以扩增出632 bp目标条带。多重PCR最适扩增体系为DNA模板量100 ng、5 U·μL^-1 Ex Taq 0.2 μL、10×ExTaq Buffer 2.5 μL、2.5 mmol·L^-1 dNTP 2 μL、10 μmol·L^-1引物（GmActin11 F/R 0.4 μL、G2-EPSPS F/R 0.6 μL、GAT F/R 0.4 μL、ZH10P1/GAT 0.6 μL和G2/ZH10P2 0.6 μL）,ddH₂O补足25 μL。多重PCR扩增最适程序为95℃ 5 min;95℃ 30 s,60℃ 30 s,68℃ 1 min 20 s,35个循环;72℃ 12 min。该多重PCR体系灵敏度为0.5%,符合欧盟有关转基因产品标识的要求。该多重PCR方法特异性很强,可以成功检测受体中黄10、转基因大豆ZH10-6及ZH10-6不同地理来源的11个衍生品系。【结论】建立的转EPSPS/GAT大豆多重PCR检测体系具有高通量、特异性强、操作简便和应用广泛的优点,并且能够快速、准确地检测转基因大豆ZH10-6及其衍生品系。     

4种杀虫剂对番茄叶片GSH-ASA抗氧化系统的影响

为揭示杀虫剂对番茄叶片谷胱甘肽-抗坏血酸(GSH-ASA)氧化还原系统的影响,以粉番一号番茄为试验材料,采用田间试验方法,设定噻虫嗪、毒死蜱、苏云金杆菌、氯虫苯甲酰胺4种不同类型杀虫剂处理,以清水处理为对照,并针对处理后的番茄叶片组织内GR酶活性、GSH含量、ASA含量、GSH/GSSG、ASA/DHA在一段时间内的变化进行检测与分析。结果表明:4种杀虫剂处理后,番茄植株体内GSH-ASA抗氧化系统中的各物质含量及GR酶活性与对照植株之间均存在显著性差异,其中苏云金杆菌、毒死蜱和氯虫苯甲酰胺处理12h后植株组织内GR酶活性分别为0.185U/(g·min)、0.162U/(g·min)、0.162U/(g·min),而噻虫嗪处理在24h时植株组织内GR酶活性达最大值0.155U/(g·min)。尤其是在6~24h变化最显著,随着时间的延长,差异减小,在杀虫剂处理后168h基本恢复到对照水平,说明杀虫剂处理后,番茄植株体通过谷胱甘肽-抗坏血酸氧化还原系统对外源杀虫剂处理做出响应,但是植株对不同杀虫剂的响应有所不同,相对而言,在常用剂量的4种杀虫剂中,苏云金杆菌处理对番茄叶片抗氧化系统的影响作用最小。     

水分胁迫对小麦幼苗抗氧化物质含量的影响及其与抗旱性的关系

水分胁迫下,抗旱性强的小麦品种陕合6号在一定干旱限度内能维持其叶片抗氧化物质GSH和Vc含量水平稳定,从而保护了细胞,其膜脂过氧化水平较低,膜受伤害较轻;而对干旱敏感的品种郑引1号在轻度干旱条件下叶片GSH和Vc含量就显著降低,其膜脂过氧化水平较高,质膜透性增加较大,膜损伤严重。在正常生长条件下,陕合6号Vc和GSH含量高于郑引1号。因此,GSH和Vc在作物抗旱性方面有积极作用。     

根际pH调控下景天三七对铅积累及铅胁迫的生理响应

为探索不同根际pH下,景天三七对重金属铅的忍耐指数和植株各个部位铅含量的积累规律,并找到提高植株对Pb²⁺耐受性的pH值。在不同根际pH(5、6、7、8)条件下,采用水培试验,研究景天三七在不同铅浓度(0、20、60、100、140 mg·L^-1)下对铅积累与铅胁迫的生理响应。结果表明:1)在相同pH条件下,随着铅浓度的增加,景天三七根长、株高和干质量均逐渐减小,生长受到抑制,忍耐指数逐渐下降;叶绿素含量呈现先增加后降低的趋势,谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性逐渐降低,MDA含量逐渐增加;根、茎、叶中铅含量随着铅浓度的增加而逐渐增加,且铅积累量表现为根>茎>叶。2)在相同Pb²⁺浓度条件下,随着pH的增加,根长、株高和干质量表现为先增加后降低的趋势;当pH=6时,植株生长较好,忍耐指数最高;忍耐指数、叶绿素含量、GSH含量和SOD、POD、CAT活性均表现出先增加后降低的趋势,且pH=6时达最大值;MDA含量变化则相反,pH=6时达最小值;根、茎、叶的铅含量逐渐降低。综上,景天三七生长受pH及Pb²⁺浓度的影响,pH影响Pb²⁺的吸收,根际pH为6时能提高植物对铅的耐受性,且Pb²⁺为20 mg·L^-1时,对铅的耐受性最强。     

新疆苜蓿愈伤组织再生体系建立的研究

以新牧1号、新疆大叶苜蓿和新疆野生黄花苜蓿无菌苗下胚轴为外植体,研究了两种诱导培养基对愈伤组织诱导、生长的影响,以及增殖培养基中附加GSH和ABA对愈伤组织增殖、分化及再生的影响.结果表明,MS+2,4-D 2mg/L+NAA 2mg/L+KT 1mg/L为较佳诱导培养基;增殖培养基中附加GSH 15mg/L有利于分化及植株再生;增殖培养基中附加GSH 15mg/L+ABA 3 mg/L有利于提高新牧1号和新疆大叶苜蓿体胚分化能力,附加GSH 15mg/L+ABA 6mg/L有利于新疆野生黄花苜蓿体胚分化频率;实验共筛选出新牧1号、新疆大叶苜蓿、新疆野生黄花苜蓿高分化能力基因型分别为5、6和5个.     

饲粮能量、蛋白质水平及赖能比对早期断奶仔猪生产性能的影响

采用三因素二次回归正交组合设计,研究了能量（ＤＥ：３－０ ～３－８Ｍｃａｌ／ｋｇ） ,粗蛋白质水平（ＣＰ：１５％ ～２５％ ） 与赖能比［（Ｌｙｓ∶ＤＥ） ：０－６ ～１－２（ｇ．Ｌｙｓ）／（ ＭＪ．ＤＥ）］ 对２８ 日龄断奶仔猪（ 长白×汉梅） 的日增重（ＡＤＧ） ,饲料转化率（Ｆ／Ｇ） 、日采食量（ＡＤＦＩ） ,血浆尿素氮（ＰＵＮ） 及血浆游离赖氨酸的影响,试验期４２ｄ。结果表明：能量、蛋白质水平及赖能比对仔猪生产性能均有影响（ Ｐ＜ ０－０１ ） ,其中以赖能比的作用最重要。仔猪２８ ～６０ 日龄（５ ～１５ｋｇ） 与６０ ～７０ 日龄（１５～２０ｋｇ）的ＡＤＧ、ＡＤＦＩ、Ｆ／Ｇ 及７０ 日龄的ＰＵＮ 均随能量、蛋白质水平及赖能比的改变呈显著二次曲线变化。２８～６０ 日龄,随能量、蛋白质水平及赖能比增加,ＡＤＧ 和Ｆ／Ｇ 改善;６０～７０ 日龄能量水平为３－４ Ｍｃａｌ／ｋｇ 左右,ＡＤＧ 和Ｆ／Ｇ 达最佳,高于此水平ＡＤＧ 和ＡＤＦＩ下降,Ｆ／Ｇ 增大。在试验条件下,根据影响规律将仔猪营养需要划分为２８～６０ 日龄与６０ ～７０ 日龄两阶段,２８ ～６０ 日龄与６０～７０ 日龄获得最佳生产性能的能量、蛋白质水平及赖能比（ 赖氨酸） 需要量分别为：