不同保存方法对天山樱桃总DNA提取效果的影响

[目的]寻找天山樱桃叶片样品较适合的保存方法,比较研究不同保存方法对天山樱桃总DNA提取效果的影响.[方法]以天山樱桃幼嫩叶片为试验材料,分别采用液氮保存、冷冻保存、干燥保存和微波不同时间处理后硅胶干燥保存等保存方法,比较分析各保存方法对所提取样品总DNA质量的影响.[结果]通过-70℃冷冻保存、室温保存、硅胶干燥保存、微波干燥2min保存的样品所提取总DNA的纯度较高,液氮保存的样品所提取总DNA的完整性好;干燥保存法保存的样品所提取的总DNA扩增效果较好.[结论]考虑到野外采样受到多方面因素的限制,适合天山樱桃分子生物学研究的保存方法为硅胶干燥保存.     

不同保存条件下云杉八齿小蠹总DNA提取方法的比较分析

[目的]探讨云杉八齿小蠹总DNA的提取方法。[方法]将野外采集的云杉八齿小蠹分别保存在95％的酒精浸泡、自然风干和-40℃条件下,采用改良CTAB法、KAc法、盐析法和SDS法对不同保存条件下样品材料总DNA进行提取。[结果]结果表明,4种方法均可从95％酒精浸泡标本和-40℃冻存样品中提取出高质量的总DNA,相比之下改良CTAB法最为简单、高效、经济。以COI的通用引物对所提取的总DNA进行扩增检测,结果表明,采用改良的CTAB法可以从95％的酒精浸泡样品和-40℃冰存样品DNA中扩增出清晰的单一条带,片段大小700bp,经与已知昆虫的COI片段分子量对比,可以初步断定其为COI片段。[结论]该研究结果为今后小蠹类的分子系统学研究奠定基础。     

不同保存方法对胡杨、灰叶胡杨叶片总DNA质量的影响

针对胡杨、灰叶胡杨分布偏远、新鲜叶片褐化快等特点,探索了新鲜叶片、硅胶干燥后-70℃保存3个月的叶片、硅胶干燥后常温保存15个月的叶片、自然晾干3天的叶片、3个月标本的叶片、15个月的标本的叶片等六种采集保存方法对胡杨、灰叶胡杨总DNA提取质量的影响,并利用分子系统学研究的常用的核糖体RNA基因、线粒体基因、叶绿体基因的保守引物对所提的DNA进行PCR扩增,结果表明：硅胶干燥-70℃保存3个月的叶片和自然晾干3天的叶片均能得到与新鲜叶片相当质量的DNA。考虑到野外样品采集条件的限制,认为野外采集大量样品进行胡杨、灰叶胡杨分子系统学研究的最佳方法为采样后硅胶干燥-70℃长期保存。     

血水草基因组DNA提取方法的优化

[目的]优化血水草（Eomecon chionantha Hance）基因组DNA提取方法。[方法]采用常规CTAB法和改良CTAB法提取血水草基因组DNA。[结果]常规CTAB法提取的DNA含杂质多、难溶解、易降解;而改良的CTAB方法适合血水草基因组DNA的提取,采用鲜嫩叶样品和-80℃硅胶干燥嫩叶样品均可能获得完整性较好、纯度较高的基因组DNA。[结论]为血水草遗传多样性研究奠定了基础。     

样品不同保存方法对猕猴桃总DNA提取效果的影响

以美味猕猴桃幼叶为试材，采用改良的CTAB法对-20℃、-70℃和硅胶脱水干燥保存的猕猴桃叶样中总DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明，3种不同方法保存的样品所提DNA的完整性与纯度均较好，其OD260／OD280值为1．8以上，能完全被EcoR I酶切消化．1％琼脂糖凝胶电泳谱带明亮清晰，并获得条带清晰、多态性好的PCR扩增图谱。鉴于野外远距离采样的操作方便，硅胶脱水干样保存法较为理想。     

硅胶干燥对棕榈科植物DNA提取效果的影响

应用硅胶干燥法对棕榈科3个不同属作物椰子、油棕和槟榔的叶片经干燥处理后置于不同温度条件下保存3个月,以新鲜叶片为对照,采用简易十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取基因组DNA,分析硅胶干燥处理后对DNA提取效果的影响。研究结果表明,硅胶干燥法处理的叶片提取的基因组DNA质量较好,与对照无明显差异,完全可以应用于后续的分子生物学研究。硅胶干燥法处理的叶片在常温条件下保存即可达到后续试验的要求,这为今后棕榈科植物试验材料的中短期保存提供了新的途径。     

云南松成熟针叶DNA提取方法的比较研究

研究了不同裂解液(SDS、4×CTAB和2×CTAB)和不同保存方式(4℃低温冷藏保存、硅胶干燥保存、室温保存)对云南松成熟针叶基因组总DNA提取质量的影响.结果表明,硅胶干燥保存及4×CTAB裂解液适用于云南松成熟针叶DNA的提取.该结果可为开展云南松分子生物学的研究奠定基础.     

叶片不同保存方法对杨树基因组DNA提取效果的影响

以杨树叶片为试验材料,采用改良SDS法提取基因组DNA,分析5种不同保存方法对样品提取效果的影响.通过A260 /A280、琼脂糖凝胶电泳、ISSR-PCR扩增分析对提取的基因组DNA进行鉴定,结果表明,低温保存杨树叶片是比较理想的方法,而在远距离野外资源调查收集时,采用硅胶干燥保存样品是比较可行的.     

马鹿粪便样品保存方法对DNA提取质量的影响

采用冷冻法采集、保存马鹿粪便DNA样品,并将冷冻保存、乙醇浸泡保存和干燥后保存的样品进行DNA提取测试、比较分析。结果表明,采用冷冻保存法保存的马鹿粪便样品DNA提取的质量明显优于酒精浸泡和干燥保存方法,此方法采集和保存简单,试验省时、经济,可应用于寒冷地区冬季各种动物的粪便取样。     

野外保存对益智叶片基因组DNA的影响

为获得高质量的益智基因组DNA寻找一种简单可行的野外益智鲜叶保存方法,利用植物基因组提取试剂盒法提取益智基因组DNA,以新鲜叶片为对照及DNA的纯度、浓度、琼脂糖凝胶电泳和ITSPCR扩增效果为评价指标,比较室温阴干、室外晒干、硅胶干燥和液氮保存4种鲜叶保存方法对提取益智基因组DNA效果的影响。结果表明:4种保存方法均可获得益智基因组DNA且ITS-PCR均获得约700bp的PCR产物,其中液氮保存5d的叶片提取DNA条带清晰明亮,室温阴干、硅胶干燥和室外晒干保存方法提取的基因组DNA分别在4d、3d和2d后开始发生降解,不同保存方法效果依次是液氮保存室温阴干硅胶保存室外晒干。在远距离野外资源调查和收集时,采用室温阴干保存新鲜益智叶片是经济简单可行的野外保存方法。     

两种无冷冻保护剂冷冻精子方法的比较

小鼠卵胞浆内单精子注射(ICSI)的开展使解冻后的精子无需具有活动能力就可以使卵子受精和发育,因此多种简单的精子冻存方法被开发。从复苏后精子受精和支持胚胎发育的能力,以及DNA甲基化方面研究比较无冷冻保护剂的条件下-20℃和-196℃冻存的两种方法。结果表明,两种方法都不改变胚胎DNA甲基化状态,-196℃保存的精子的受精率和胚胎发育率降低,但是通过卵子激活可以修复受精和胚胎发育的能力。-20℃保存精子1个月不影响受精和胚胎发育能力,冻存6个月降低精子的受精和胚胎发育潜能。因此,-20℃短期保存精子是一种简单、有效且安全的方法。     

不同贮藏条件下棉花叶片DNA提取效果分析

针对棉叶贮藏方法不恰当导致DNA提取得率及纯度较差的问题,本研究以新鲜棉叶为对照,比较了5种贮藏条件下的棉叶DNA提取效果,以期筛选出一种棉叶贮藏的较优模式,从而提高DNA的提取得率及纯度。结果表明,-20℃冷冻3 d的棉叶DNA得率最高且纯度较好,甚至比新鲜叶片的DNA得率高51.4%;3 d冷冻贮藏的DNA得率明显高于3 d冷鲜贮藏的;7 d液氮冷冻贮藏的DNA得率明显优于7 d硅胶干燥贮藏的和冷冻贮藏的;7 d液氮速冻贮藏的DNA纯度与7 d硅胶干燥贮藏的相近。综上所述,短期贮藏可采用-20℃冷冻保存的方法;较长时间的保存建议采用液氮速冻的贮藏方式。     

高质量鸭肝脏组织总RNA的提取及稳定性测试

为获得高质量的鸭肝组织RNA样本,通过优化提取方案,从1 g超低温(-80℃)的冻存组织中提取RNA,以紫外分光光度计对RNA的含量进行了测定,并对其纯度进行了分析;通过琼脂糖凝胶电泳对RNA的完整性进行了检测,并对所得样本的稳定性进行了测试.结果表明:试验得到了1 528 μg RNA,样品OD260/OD280＝1.93,电泳得到的28 s和18 s RNA条带清晰可见,没有发生降解,样品在室温条件可保存24 h以上,在-20℃可保存8 d以上.提取的RNA质量较高.     

2种CTAB法对干燥方法不同的平邑甜茶叶片DNA的提取

分别采用S.Wilkie的CTAB提取方法及在此基础上进行了改良的CTAB法,以硅胶干燥、标本干燥和新鲜的平邑甜茶叶片为材料,提取出平邑甜茶基因组DNA,并进行DNA质量的检测。结果表明,利用改良的CTAB法能够获得较高质量的DNA,新鲜叶片中提取的DNA量最多,经过硅胶干燥的叶片提取的DNA比标本干燥的叶片多。     

2种绿藻的玻璃化冻存研究

收集对数生长后期细胞,采用不同配方及浓度的玻璃化冻存液以及不同的冻存步骤对胶网藻HE01和小球藻HE07进行冷冻保存试验,通过复苏后的细胞存活率判断适合的冻存液和冻存步骤。结果发现,不同的微藻所需的冻存液不同。对HE01和HE07海洋微藻分别使用5%DMSO+15%乙二醇+25%蔗糖溶液和15%DMSO+15%乙二醇+25%蔗糖溶液做为冻存剂,4℃条件下30 min后,转入-20℃预冻存2 h,再-80℃过夜后投入液氮中保存,胶网藻HE01和小球藻HE07的冻存率分别为70.2%、70.59%。复苏后微藻生长状况良好。     

长期直接冻存猪肉样中基因组DNA提取方法的改进与PCR分析

以新鲜猪耳组织作为对照 ,比较了用经典方法从新鲜猪耳组织和长期直接冻存猪肉样中提取的DNA ,提出了从长期直接冻存肉样中提取高质量DNA的改进方法。结果表明 ,采用改进方法可得到大量的、较完整的基因组DNA ,即对于基因组DNA降解较严重的样品是行之有效的方法。对提取到的DNA进行扩增 ,并分析了影响PCR反应的因素。     

山羊抑制素α前体基因5’侧翼区及外显子的克隆和序列分析

1材料与方法 1．1材料10只海门山羊母羊血样采白海门山羊保种基地（江苏省南通市）;10只安徽白山羊母羊血样采自安徽省芜湖市。颈静脉采血,所采血样均为10ml／只,用ACD抗凝,-20℃冻存。用酚氯仿抽提法提取基因组DNA,溶于TE,4℃保存。     

不同方法处理对椰子花粉扫描电镜观察结果的影响

分别用冻干、常温干燥器干燥、36℃烘干、液氮冷冻、-80℃冷冻等5种方法对海南高种椰子花粉的电子扫描显微镜观察样品进行预处理。结果表明:以冻干法的效果最好;常温干燥器干燥与36℃烘干法制备的花粉样品在扫描电镜下观察呈现塌陷、变形状;-80℃冷冻与液氮冷冻处理的雄花外壁呈褐色,花药、花丝潮湿,电镜观察视野中的杂质、碎片较多。     

部分枣属植物硅胶干燥叶片DNA提取方法的比较

以硅胶干燥15 D和半年的3种野生枣属植物叶片为试材,分别采用简易CTAB法、高盐沉淀法和高盐低PH法3种方法提取基因组总DNA,通过A260/A280、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增分析对提取的基因组DNA进行了鉴定。半年内不同保存时期的材料对于DNA提取没有明显差异;高盐沉淀法所得DNA纯度最高。     

不同保存方法对中麻黄基因组DNA提取效果的影响

通过对不同方法采集和保存的中麻黄样品基因组DNA提取效果进行比较,确定中麻黄的最佳采集和保存方法。应用改良CTAB法提取中麻黄基因组DNA,并采用琼脂糖凝胶电泳检测其完整性,利用紫外分光光度计法测定其浓度和纯度。结果表明,新鲜样品采集后立即冷冻保存或置于液氮和硅胶后冷冻保存,均能提取出高质量的基因组DNA;鲜样阴干几天后冷冻保存会导致基因组DNA降解;阴干后在室温下保存则降解更严重。采集的中麻黄鲜样采取不同方法带回实验室均不影响基因组DNA的提取效果,但应在低温环境中保存才能有效防止基因组DNA的降解。