烟草黑胫病菌培养性状的研究

【目的】对烟草黑胫病菌的若干培养性状进行研究，进一步了解烟草黑胫病菌的培养特性的稳定性，为烟草黑胫病的相关研究和综合治理提供试验依据。【方法】从安徽10个主要生产烟草的市（县）多点采集发生烟草黑胫病的烟株，采用组织分离法进行病原菌分离，经纯化后获得69个烟草黑胫病菌（Phytophthora nicotianae Breda de Haan var. nicotianae Waterh.）菌株，对其进行游动孢子囊的诱导、配对培养、生长特性测定等进行研究。【结果】烟草黑胫病菌的主要培养性状为：异宗配合，与标准相对交配型菌株配对培养可以产生有性器官；卵孢子球形，满器或不满器，雄器围生，藏卵器小；孢子囊多近球形，乳突明显，有双乳突现象，孢子囊具脱落性，且孢子囊柄短，不对称孢子囊较常见，孢子囊外着生有长短不一的附属丝；菌丝最适生长温度为20～30℃，最高生长温度大于35℃，小于40℃，最低生长温度大于8℃，小于10℃。【结论】供试烟草黑胫病菌的培养性状与前人的研究结论基本一致，初步认为10多年来生态环境和农业措施的变化没有导致烟草黑胫病菌的生长性状发生较大的改变，表明烟草黑胫病菌的培养性状是较为稳定的。     

不同培养条件对烟草黑胫病菌生长和产孢的影响

烟草黑胫病是烟草生产上的毁灭性病害之一,严重影响烟草生产.为了模拟室外不同气象条件下烟草黑胫病的最适发生环境,就不同培养条件对贵州省烟草黑胫病菌生长和产孢的影响进行了研究.结果表明,温度为25～30℃、全黑暗条件最适合烟草黑胫病菌生长,且菌丝浓密;生长旺盛的菌丝块经3次换水,于28～30℃、连续光照、水浸条件下黑胫病菌产孢量达到最大.     

烟草黑胫病菌拮抗放线菌LY18的分离筛选与鉴定

为了寻找对烟草黑胫病具有生防潜力的放线菌,笔者采用平板对峙法,从烟草黑胫病发病烟田健株根际土壤中,分离得到1株对烟草黑胫病菌具有显著拮抗效果的放线菌株LY18,其发酵液的无菌滤液对烟草黑胫病菌菌丝的抑制率达70%以上。电镜观察发现,抑菌圈周围的烟草黑胫病菌丝破裂、瘪陷。通过对LY18的形态观察、培养性状观察、生理生化测定结合16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为Streptomyces rajshahiensis。     

抗烟草黑胫病植物源活性物质的筛选

为筛选对烟草黑胫病有较高抗性的植物源提取物,采用菌丝生长速率法,对苦参、枳壳等45种中药材粗提液对烟草黑胫病病菌的抑制效果及施药方式进行了分析,结果表明:有土黄连、黄柏等19种中药材的提取物对烟草黑胫病病菌菌丝生长有显著的抑制效果,中药材提取物以混合杀菌方式对烟草黑胫病菌丝生长抑制作用效果最好;其中土黄连、黄柏、黄独、厚朴、前胡、雷公藤、苍术、油茶饼、瞿麦、巴戟天等16种中药材的提取物对烟草黑胫病菌丝生长有极显著的抑制效果,具有开发先导化合物的潜力;在大田生产应用上,施用中药材植物源药剂防治烟草黑胫病以灌根的施药方式较好。     

抗烟草黑胫病植物源活性物质的筛选

为筛选对烟草黑胫病有较高抗性的植物源提取物,采用菌丝生长速率法,对苦参、枳壳等45种中药材粗提液对烟草黑胫病病菌的抑制效果及施药方式进行了分析,结果表明:有土黄连、黄柏等19种中药材的提取物对烟草黑胫病病菌菌丝生长有显著的抑制效果,中药材提取物以混合杀菌方式对烟草黑胫病菌丝生长抑制作用效果最好;其中土黄连、黄柏、黄独、厚朴、前胡、雷公藤、苍术、油茶饼、瞿麦、巴戟天等16种中药材的提取物对烟草黑胫病菌丝生长有极显著的抑制效果,具有开发先导化合物的潜力;在大田生产应用上,施用中药材植物源药剂防治烟草黑胫病以灌根的施药方式较好。     

大蒜提取液对烟草黑胫病和青枯病的防治效果初探

研究了大蒜提取液对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var nicotianae)和青枯病菌(Ralstonia solanacearum)的抑制作用,并进一步测定了大蒜提取液防治烟草黑胫病的效果.结果表明,浓度大于1.5%的大蒜提取液对于烟草青枯病菌的抑菌半径与5000倍72%农用链霉素相当,浓度大于1.5%的大蒜提取液对烟草黑胫病菌的抑菌效果显著;而盆栽试验表明,只有稀释倍数小于10倍的大蒜提取液才对烟草黑胫病具有防治效果,而稀释倍数大于10倍的大蒜提取液对烟草黑胫病基本没有防治效果.     

烟草黑胫病菌拮抗放线菌LY18的分离筛选与鉴定

为了寻找对烟草黑胫病具有生防潜力的放线菌,笔者采用平板对峙法,从烟草黑胫病发病烟田健株根际土壤中,分离得到1株对烟草黑胫病菌具有显著拮抗效果的放线菌株LY18,其发酵液的无菌滤液对烟草黑胫病菌菌丝的抑制率达70%以上。电镜观察发现,抑菌圈周围的烟草黑胫病菌丝破裂、瘪陷。通过对LY18的形态观察、培养性状观察、生理生化测定结合16S rDNA序列分析,将该菌株为鉴定Streptomyces rajshahiensis。     

烟草内生细菌Itb295对黑胫病菌的抑制及其鉴定

[目的]确定分离自健康烟草植株的内生细菌Itb295的分类地位和生防潜能。[方法]通过平板对峙培养法测定菌株Itb295对烟草黑胫病菌的抑制作用,并结合菌株形态、生理生化特性和16S rDNA序列(GenBank登录号JF496206)比对分析确定该菌株的分类地位。[结果]鉴定Itb295菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。菌株Itb295对黑胫病菌菌丝生长抑制率为34.64%,受抑制的黑胫病菌菌丝膨大、扭曲、分支增多,不能正常生长,抑菌效果的可逆性分析显示受抑制的菌丝在OA培养基上能够正常生长。[结论]为烟草黑胫病的防治及内生细菌Itb295的进一步研究提供了理论依据。     

贵州省烟草黑胫病菌的交配型及其分布初探

采用培养皿配对培养的方法,对分离自贵州省8个地区(州、市)的烟草黑胫病菌(Phytophthora nicotianae var.nicotianae)的交配型进行测定.结果表明:来自贵州省主要产烟区的42株烟草黑胫病菌菌株均属A2交配型,未检测到其他交配型.据研究结果可初步认定,贵州省烟草黑胫病菌的交配型符合烟草疫霉...     

云南省烟草黑胫病菌致病力分化的研究

将分离自云南省不同地区的２１株黑胫病菌（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅＢｒｅｄａｄｅＨａａｎ）接种烟草品种Ｋ３２６、Ｇ２８和红大，测定其对不同烟草品种的致病力。经统计分析，发现其对烟草的致病力有差异。采用菌丝块创伤和不创伤两种接种方法测定致病力的结果不同。对不同地区的黑胫病菌间的致病力以及由烟草和非烟草寄主上获得的烟草疫霉菌株的致病力进行了比较，结果表明，云南省黑胫病菌的致病力较强，由烟草上获得的烟草疫霉菌株对烟草的致病力强于非烟草菌株。实验结果还发现，供试的３个烟草品种，以Ｋ３２６对云南省烟草黑胫病菌的抗病性最强，红大品种较感病。     

烟草两种病害抗药性形成和发展的影响因素*

 为合理防治烟草黑胫病和野火病,减少抗药性产生,减少农药残留,本文就云南省烟草黑胫病菌对甲霜灵的抗药性,烟草野火病菌对农用链霉素的抗药性形成和发展的影响因素进行了研究。结果表明施药次数的增加与药剂施用浓度的增高,可明显提高烟草黑胫病对甲霜灵抗药性水平。喷药次数的多少与喷药间隔时期可明显影响烟草野火病菌对农用链霉素的抗药性。     

烟草黑胫病菌产孢性状的研究

研究了湖南烟区烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica Var nicotianae)分离菌株的产孢性状。结果表明，Py96-1和Py96-2两菌株用燕麦片培养基，在25～28℃温度下，培养21-28d，产孢菌丝生长最好，菌丝茂密，产生孢子囊多。     

毕节地区烟草黑胫病菌对甲霜灵抗药性的初步检测

为了解烟草黑胫病菌对甲霜灵产生的抗药性,采用菌落生长测定法,对从贵州省毕节地区5个县分离的9株烟草黑胫病菌进行了抗性测定.结果表明:烟草黑胫病菌菌丝生长对甲霜灵均存在不同程度的敏感性,EC50值平均为0.7 158μg/mL,其中,CGch-2的耐药性最强,EC50值为1.225 3 μg/mL.毕节地区的烟草黑胫病菌...     

寡雄腐霉发酵参数优化及发酵液的生防效应

【目的】优化寡雄腐霉（Pythium oligandrum）发酵条件,为烟草黑胫病的生物防治奠定基础。【方法】采用单因素和正交试验研究寡雄腐霉的发酵参数及优化组合,并利用烟草黑胫病菌（Phytophthora nicotiana）、离体烟叶和盆栽烟苗验证发酵液的生防效应。【结果】随培养时间的延长,寡雄腐霉菌丝生物量持续增加,但发酵液对烟草黑胫病菌的抑制作用增加至峰值后降低。在不同培养基、温度、pH值和光照等条件下,寡雄腐霉的生物量越大,发酵液对烟草黑胫病菌的抑制作用愈强,二者的相关系数r =0.77**（n=16）。以黄豆饼粉为培养原料,初始pH值6.0、培养温度30℃、持续光照培养6 d所得的寡雄腐霉菌丝生物量最高,其发酵液对烟草黑胫病菌抑制率分别达到78.8%（菌丝生长）和52.9%（孢子萌发）。此外,寡雄腐霉发酵液显著降低离体烟叶和盆栽烟苗黑胫病的发病率和病情指数,对离体烟叶黑胫病的防效为69.3%—75.3%;对盆栽烟苗黑胫病的防效为55.0%—61.3%。【结论】在寡雄腐霉发酵过程中,选用适宜的培养基、pH值、温度、光照和发酵时间组合,可使发酵液抑制烟草黑胫病的效果达到最佳。     

烟草黑胫病菌培养特性的研究简

研究了采自攀西地区的烟草黑胫病菌在不同培养基、不同温度及不同pH值等条件下培养特性。结果表明：烟草黑胫病菌最适合在燕麦培养基上生长,菌丝生长快：菌丝在2,0,36℃都能生长,28℃生长最佳。在不同pH值的培养基培养下,菌丝最适合在pH值为5．5的培养基上生长。     

短小芽孢杆菌AR03挥发性有机物的抑菌活性及其组分分析

【目的】对分离自烟草根际土壤中的一株短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)AR03菌株产生的挥发性有机物进行抑菌活性测定和组分分析。【方法】采用培养皿对扣熏蒸法和凹玻片孢子萌发法测定挥发性有机物对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)和赤星病菌(Alternaria alternata)菌落、菌丝生长以及孢子萌发的影响,采用离体叶片接种法测定挥发性有机物对烟草黑胫病和赤星病的防治效果;采用顶空加热法收集抑菌挥发性有机物,对其进行气相色谱-质谱(GC-MS)检测,并结合保留指数(retention index,RI)和内标(internal standard,IS)1-十五烯对其组分进行定性和定量分析。【结果】短小芽孢杆菌AR03菌株分泌的挥发性有机物对供试的两种病原真菌均具有一定的抑制作用,表现为经处理后的烟草黑胫病菌菌丝生长稀疏缓慢变粗、分支增多且扭曲、断裂;赤星病菌菌丝生长畸形,其上不产生分生孢子梗,内含物大部分聚集成团导致菌丝干瘪、缢缩。对峙培养2、4、6和8 d时,挥发物对黑胫病菌和赤星病菌菌丝生长的抑制率分别为56.21%和59.23%、64.75%和59.86%、66.13%和61.10%、67.04%和70.00%;对黑胫病菌游动孢子和赤星病菌分生孢子的抑制作用表现为延迟萌发且萌发后的芽管生长缓慢;黑胫病菌产生孢子囊数明显减少,赤星病菌分生孢子各分隔处的细胞畸形肿胀成泡状。离体叶片抗病测定结果显示,挥发性有机物抑制黑胫病菌和赤星病菌病斑在叶片的扩展,对峙熏蒸40 h时,对照叶片黑胫病的发病率为92.50%,圆形坏死病斑直径是25.10 mm,经挥发物处理后叶片发病率为70.83%,病斑直径为9.45 mm,对黑胫病斑扩散的抑制率为62.35%;对峙熏蒸80 h时,对照叶片赤星病的发病率为88.33%,病斑扩散为近圆形的褐色坏死斑,平均直径为8.32 mm,经挥发物处理后赤星病的发病率为60.80%,病斑扩展较慢,平均直径为2.85 mm,挥发物对赤星病斑扩散的抑制率为65.75%。SPME GC-MS分析表明,AR03菌株胞外分泌7种组分挥发性物质,均为C15H24结构的倍半萜烯类化合物,分别是二氢姜黄烯、(E)-β-金合欢烯、γ-姜黄烯、α-姜烯、π-红没药烯、β-倍半萜水芹烯和γ-E-红没药烯;AR03培养1 d后,其中β-倍半萜水芹烯相对含量最高,为80.64%,其次为(E)-β-金合欢烯和α-姜烯,相对含量分别为7.20%和6.67%;随着AR03培养时间的延长,各组分种类相同,但相对含量差异较大,除二氢姜黄烯含量保持基本不变外,其他组分含量呈递减趋势,培养至第6天时,各组分含量下降超过50%。【结论】短小芽孢杆菌AR03菌株能够产生具有较强抑菌活性的挥发性有机物,有潜力作为开发抗真菌代谢物和新药物的重要微生物资源。     

烟草黑胫病菌培养特性的研究

研究了采自攀西地区的烟草黑胫病菌在不同培养基、不同温度及不同pH值等条件下培养特性。结果表明:烟草黑胫病菌最适合在燕麦培养基上生长,菌丝生长快。菌丝在20³6℃都能生长,28℃生长最佳。在不同pH值的培养基培养下,菌丝最适合在pH值为5.5的培养基上生长。     

病圃中烟草疫霉生理小种的鉴定

 烟草疫霉（Phytophthora nicotianae）引起的烟草黑胫病是烟草生产上的毁灭性病害之一,其生理小种的分布与种植品种影响着病害的发生程度, 研究疫霉病菌的生理小种十分重要。本文采用鉴别寄主在田间的抗病反应与采集菌株在TTC固体培养基平板上的颜色变化相结合的方法,对病圃中烟草黑胫病菌小种进行了鉴定。田间抗性鉴定结果表明,鉴别寄主Nicotiana nudicaulis, L8, NC1071,N. plumbaginifolia, MD609, NC95对烟草黑胫病菌表现为抗,N. stocktoii表现为中抗,Barley 21表现感病,结合已报道的8个小种的寄主反应,判断该田块黑胫病菌为0号生理小种,从该大田中随机采集的4个烟草品种潘圆黄、BL-921,CV78-5,K326上的烟草黑胫病菌,根据培养物引起TTC固体培养基颜色变化的情况,分离纯化的4个菌株均显示0号和1号小种的特征,故所鉴定病圃中烟草黑胫病病原为0号生理小种。     

湖北省不同白肋烟品种(系)黑胫病抗性鉴定

采用田间人工接种烟草黑胫病(Phytophthora parasitica)病菌0号和1号生理小种,对13份白肋烟资源连续两年进行烟草黑胫病田间抗性鉴定。结果表明,在参试13份白肋烟品种(系)中,对0号生理小种表现为抗的品种(系)有27018、27011、2619、2937、27123、2902、鄂烟1号等7份材料;对1号生理小种表现为抗的品种(系)有27018、27011、2619、2937、B0833、27015、27123、2902、鄂烟1号等9份材料。     

烟草黑胫病菌对不同杀菌剂的抗药性初探（英文）

为了解烟草黑胫病菌对不同杀菌剂产生的抗药性,在室内培养条件下,采用菌落生长测定法,对从黔东南州镇远县分离的烟草黑胫病菌进行了抗性测定。结果表明:烟草黑胫病菌对不同杀菌剂均存在不同程度的抗药性,其中对烯酰吗啉的抗药性最强,EC50值为1.19μg/ml。因此,在镇远烟区,长期单一使用烯酰吗啉防治黑胫病存在抗性风险。