核桃胚营养代谢盛期总RNA提取方法研究

核桃是21世纪的超级食品.对核桃胚总RNA的提取是开展核桃胚发育和代谢分子生物学研究的基础环节.本试验针对核桃营养代谢盛期胚的特点,通过对改进的CTAB法、常规的CTAB法、TRIZOL法和通用植物总RNA提取试剂盒(Bioteke)四种不同总RNA提取方法的比较与分析,表明采用改良CTAB法提取的总RNA完整性较其他方法好,28 S、18 S、5 S条带清晰无明显降解,OD260/OD280值为1.875,无蛋白质污染,易于进行RT-PCR和cDNA的合成,是核桃胚营养代谢盛期的总RNA提取的有效方法.     

几种提取液对苹果成熟叶片总RNA提取质量的影响

[目的]筛选一种快速有效地提取高质量的苹果成熟叶片总RNA的提取液。[方法]以红富士苹果成熟叶片为材料,用3种不同的提取液提取苹果成熟叶片的总RNA,并通过分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RT-RCR检测RNA质量。[结果]3种试剂中2种可以提取出总RNA。[结论]用RNAiso-mate for Plant Tissu和RNAiso Plus搭配使用和RNAiso for Polysaccharide-rich Plant Tissue单独使用均可提取出质量较好的RNA,前者质量优于后者。     

鸢尾属植物花器官总RNA不同提取方法的比较分析

【目的】为了探索更适合鸢尾属植物花朵总RNA的提取方法。【方法】以新鲜的鸢尾(Iris tectorum Maxim.)和冷冻的西南鸢尾(I. bulleyana Dykes)的花蕾为材料,分别采用Trizol法、Trans Zol Plant试剂盒法和EasyPure Plant RNA Kit试剂盒法等3种方法提取它们的花蕾总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,利用超微量紫外分光系统检测RNA的纯度和浓度,比较3种不同试剂提取得到的总RNA的质量和浓度。【结果】对于冷冻的西南鸢尾花蕾组织,只有Trans Zol Plant试剂盒法可以提取出纯度好、浓度高的RNA。而对于新鲜的鸢尾花蕾,3种方法提取出的RNA均可用于后续试验,但质量和浓度有一定差异,EasyPure Plant RNA Kit试剂盒法提取出的RNA质量最好且产量较高; Trans Zol Plant试剂盒法提取出的RNA质量较好但产量最高; Trizol法提取出的RNA品质较好但产量最低。【结论】综合植物样品材料、RNA纯度和得率及费用等因素,EasyPure Plant RNAKit试剂盒法适合需要获得高质量的RNA和有新鲜的植物材料时使用; TransZol Plant试剂盒法适合在需要大量RNA但对RNA的质量要求不是很高时使用,且较适合应用于冷冻的鸢尾花朵。研究结果为鸢尾属植物的分子生物学深入研究提供一定研究基础,也为其它植物花朵总RNA的提取提供必要的参考。     

玫瑰花柱总RNA提取方法的比较研究

为获得一种玫瑰(Rosa rugosa)花柱总RNA提取的理想方法,为后续相关基因工程研究奠定基础。以玫瑰花柱为材料,用核酸蛋白仪和凝胶电泳法比较了改良CTAB 法、Trizol 法以及EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的玫瑰花柱总RNA的纯度、浓度及完整性,利用RT-PCR反应检测了其反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明：改良CTAB法提取的总RNA纯度、浓度较高,但存在严重降解现象;Trizol 法提取的总RNA纯度和浓度极低;EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的总RNA纯度和浓度较高,条带清晰,且28S 条带亮度是18S 条带亮度的2 倍,将其反转录获得的cDNA用于RT-PCR,能够扩增出清晰的特异性条带。综上所述：EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法从玫瑰花柱中提取的RNA质量最好,完全能够满足后续的玫瑰分子生物学研究要求。     

岩白菜幼叶总RNA的提取方法研究

为了筛选出提取岩白菜幼叶总RNA的最佳方法,为岩白菜的转录组测序提供技术支撑,本文采用6种试剂盒法提取岩白菜幼叶的总RNA,通过凝胶电泳和BIO-RAD核酸蛋白检测仪检测提取的RNA样品的质量和纯度,并对提取效果进行了分析。结果表明:用Trizol Kit、Trizol A~+Kit、Transzol Up Kit提取的幼叶总RNA没有28S rRNA和18S rRNA条带;用inun PREP Plant RNA Kit提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA条带,但条带模糊、含量低;用Transzol Plant Kit和Easy Pure Plant RNA Kit提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA这2条清晰的条带,但后者提取的总RNA的得率和纯度更高。综合考虑后认为Easy Pure Plant RNA Kit法是快速提取岩白菜幼叶总RNA的最佳方法。     

骆驼蓬总RNA的4种提取方法比较

以骆驼蓬(Peganum harmala L.)为材料,采用植物总RNA提取试剂盒法(TIANGEN)、TRIZOL试剂盒法(TIANGEN)、SDS-异丙醇法、CTAB-LiCl法提取总RNA,比较4种方法提取总RNA的得率和纯度.结果表明:CTAB-LiCl法效果最好,电泳条带清晰,RNA完整性好,28S条带亮度约是18S的2倍,所提RNA的OD260/OD280的值在1.80～2.0之间.经RT-PCR获得了600bp大小的特异条带,说明利用改良的CTAB-LiCl法从骆驼蓬中提取到的RNA质量高、完整性好,完全适合于进一步的分子生物学研究.     

仙人掌总RNA 提取方法的改进与分析

利用亚硫酸钠分别与TRIzol试剂、RNA plant plus Reagent试剂、BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂、艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂和OMEGA Plant RNA试剂结合的方法,均可获得高质量的仙人掌茎总RNA。反转录成cDNA,RT-PCR结果显示,5种方法提取的总RNA反转录后均能特异性扩增到matK基因。使用TRIzol试剂盒、RNA plant plus Reagent试剂盒和艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取RNA质量相对较高,在cDNA以1∶100稀释时能检测到matK基因;而使用BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂盒或OMEGA Plant RNA试剂盒时,灵敏度稍低,在cDNA以1∶10稀释时,能检测到目的基因。利用亚硫酸钠结合不同植物总RNA提取试剂盒进行比较研究,为后续制备仙人掌茎高质量cDNA文库及其分子生物学研究奠定基础。     

适合于全长cDNA文库构建的猪苓菌核及菌丝体总RNA提取方法比较

[目的]筛选出适合于c DNA文库构建的猪苓菌核及菌丝体总RNA的提取方法。[方法]采用Trizol改良法和EASY Spin植物快速提取试剂盒法(简称试剂盒法)对猪苓菌丝及菌核的总RNA进行提取。[结果]经紫外分光光度计对所得总RNA的均一性及1%琼脂糖凝胶电泳对所得总RNA的完整性检测后发现,2种方法均可提出完整的总RNA,试剂盒法相较于Trizol改良法其所提取的总RNA质量和纯度都较好,但Trizol改良法所提取的总RNA产率比较高。[结论]LD-PCR成功合成了猪苓菌核和菌丝体的c DNA产物,呈弥散状分布在1 0005 000 bp和7502 500 bp,满足c DNA建库的要求。     

一种适合香蕉根系总RNA提取的方法

利用改良SDS法、改良CTAB法、SDS法和QIAGENR Neasy Plant Mini试剂盒提取法分别提取香蕉幼根和老根的总RNA,并对提取的总RNA的完整性、纯度等进行比较。结果表明：改良的SDS法提取的总RNA在清晰度、纯度、完整性和回收率上均高于其他3种方法所提取的。     

黑穗醋栗花中RNA提取方法的比较研究

以黑穗醋栗花为试验材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较了Trizol法、硼砂-SDS法、CTAB法、植物RNA提取试剂盒等4种方法提取总RNA的质量和纯度。结果表明,利用硼砂-SDS法提取的RNA,28S和18S两条带型清楚,两条带之间无弥散现象,且纯度最高,D260/D280达到2.06,经计算得出总RNA产率达61.60μg·g-1,反转录条件下可得500～1000bp之间的弥散cDNA条带,进一步证明硼砂-SDS法提取得到的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的需要。     

鱼腥草叶片总RNA提取方法研究

[目的]筛选出适合鱼腥草（Houttuynia cordata）叶片RNA提取的方法。[方法]以鱼腥草叶片为材料,比较了经典RNA提取试剂盒、Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B以及富含多糖类材料RNA提取试剂盒提取鱼腥草RNA的效果。[结果]Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B和经典RNA提取试剂盒难以提取出高质量的RNA,而富含多糖类材料RNA提取试剂盒提出的RNA质量高,完整性好,可以满足进一步分子生物学研究的要求。[结论]普通RNA提取试剂盒难以提取出鱼腥草叶片的RNA。     

3种芹菜茎组织总RNA提取方法的比较研究

[目的]为了获得质量较好的芹菜茎的总RNA,为后续分子生物学试验提供基础。[方法]试验对1种RNA提取方法(Trizol法)和2种RNA提取试剂盒(RNA prep Pure Plant Kit法、RNA simple Total RNA Kit法)方法进行比较研究。[结果]RNA prepPure Plant Kit方法得率低,且OD260/OD280值低于1.8,Trizol法OD260/OD230高于2.0,且得率低于RNA simple Total RNA kit法。只有RNA simple Total RNA kit法提取的RNA质量最好,得率最高。[结论]与Trizol法和RNA prep Pure Plant Kit法相比,RNA simple Total RNA Kit法提取的芹菜茎总RNA得率高,完整性好,凝胶电泳泳道无杂质,可以满足半定量RT-PCR的试验需要。     

三种梨果皮总RNA提取方法的比较研究

以西洋梨品种‘早红考密斯’、‘香红蜜’和白梨品种‘华酥’成熟果实为试材,采用Plantol总RNA提取试剂盒法、改良CTAB法和SDS法提取果皮中总RNA,并通过凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT-PCR检测所提取总RNA样品的质量.结果表明,Plantol试剂盒法和改良CTAB法提取的RNA,经RT-PCR后得到的条带清晰,与目的片段大小一致,可以满足基因表达分析等试验的要求;而SDS法所提取的部分RNA,RT-PCR扩增不到目的片段,难以达到进一步试验的要求.     

花生子叶RNA提取方法比较与分析

以HY22组培苗为材料,比较改良胍酸酚抽提法、改良CTAB法及离心柱式试剂盒法提取RNA的效果,以筛选出适合花生子叶RNA提取的方法。结果表明：试剂盒法由于样品在通过离心柱时会出现阻塞现象,易使RNA提取结果受到较大影响,而改进后的胍酸酚抽提法与改良CTAB法则能避免该情况且更节约成本;经紫外分光光度法与电泳检测,改进后的两种方法的RNA提取效果均较好;RT—PCR结果表明,提取的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。     

改良RNA提取法及樱桃PDV和PNRSV的RT-PCR检测

介绍了一种从木本植物组织中获得高质量RNA的快速、简单和高效的核酸提取方法。该方法是基于核酸的二氧化硅捕获,避免了使用苯酚、氯仿等有机溶剂。利用该方法从樱桃组织中提取的总RNA用RT-PCR技术检测PDV,PNRSV均获得成功。从感病植株的一年生枝的叶片、韧皮部及芽组织中扩增出了预期的目的片段,即172和449bp,而健康组织中无此扩增带。该法提取的总RNA用于RT-PCR技术检测,其敏感性至少与商业出售的QiagenRNeasy提取试剂盒相当,但简单经济。     

棉纤维总RNA提取方法的比较与分析

【目的】筛选适合棉纤维总RNA的提取方法,并对其进行改良,以满足转录组和表达谱测序要求。【方法】采用三种方法提取棉纤维总RNA,即改良的热硼酸法、Trizol法和离心柱试剂盒法。【结果】改良的热硼酸法提取的棉纤维总RNA质量最好,同时对该方法的改良更适合不同时期相同棉花品种和相同时期不同棉花品种棉纤维总RNA的提取。【结论】通过比较棉纤维总RNA的提取方法,发现改良的热硼酸法提取棉纤维总RNA质量最好,且对该方法的改良提取的总RNA更能够满足转录组和表达谱测序的要求。     

不同方法提取狗脊蕨叶片总RNA的比较分析

[目的]为构建狗脊蕨叶cDNA文库,保存珍贵基因资源,克隆和研究与有效成分合成相关的基因等提供技术参考。[方法]以狗脊蕨叶片为材料,采用CTAB法、一步法、酚-SDS法和RNA试剂盒提取分离法提取总RNA,通过比较分析确定最优方法。[结果]这4种方法都能提取出182、8 S的RNA,但CTAB法和试剂盒提取分离法的总RNA质量较高,CTAB法还提取出清晰的5S RNA。一步法和SDS法带型模糊,有降解现象。CTAB法提取的狗脊蕨叶片总RNA质量较好,28S1、8S和5S条带清晰,且无明显降解。CTAB提取法OD260/OD280的值在1.93~2.06,试验中其OD260/OD280值为2.012,接近2.0,纯度较高。一步法和SDS法OD260/OD280>2.0,试剂盒法OD260/OD280<2.0。[结论]CTAB法适合提取的狗脊蕨叶片总RNA,质量较好,可用于cDNA合成、文库构建等后续分子生物学试验。     

适用于转录组测序的大豆根总RNA的提取方法研究

[目的]获得高质量、高产量并能满足转录组测序要求的大豆根总RNA。[方法]比较分析了Trizol法、CTAB-Li Cl法和试剂盒法的提取效果。[结果]3种方法均能从大豆根中提取出总RNA。但与Trizol法、CTAB法相比,试剂盒法提取的大豆根总RNA纯度高、完整性好,平均浓度达413.9 ng/μL,A260/A280≈2.14,A260/A230≈2.10,方法可重复性好。[结论]试剂盒法提取的RNA满足转录组测序的质量要求,可进行后续的转录组测序和其他分子生物学相关研究工作。     

甘蔗茎RNA提取方法研究（摘要）（英文）

[目的]找出提取甘蔗茎RNA的适宜方法。[方法]采用SDS法、试剂盒法、GHCL法3种方法提取甘蔗茎基因组RNA,并对提取的RNA进行质量比较。[结果]试剂盒法提取的RNA产率高,电泳条带清晰,RNA完整性好,无明显降解,OD260/OD280比值较好。试验操作要点：在RNA的提取过程中必须使操作温度保持在4℃左右（操作时温度可以通过垫加冰块来实现）,从而充分抑制RNase的活性;植物组织称取要适量,将植物组织在液氮中充分研磨后,应在液氮还未充分挥发前将研磨物加入Eppendorf管中,样品要充分研磨,通过加大提取液中变性剂的量防止在此过程中内源RNase将植物组织中RNA降解;在用酚/氯仿/异戊醇抽提及氯仿/异戊醇抽提过程中,吸取上清液时,应尽量小心,不要吸取中间层从而防止酚类、蛋白质类的干扰。此外,提取的RNA还应及时保存于-70℃低温下,避免频繁冻融影响其质量以及RNA的降解。[结论]试剂盒法是有效提取甘蔗茎RNA的方法。该研究为甘蔗的分子生物学研究奠定了基础。