烟草叶片总RNA提取方法的比较

[目的]研究提取烟草叶片总RNA的最佳方法。[方法]利用CTAB法、酚-SDS法和Trizol法等从烟草叶片中提取总RNA。[结果]通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测,结果表明,CTAB法、Trizol法、RNAiso法均能得到质量较高的RNA。RNAiso法提取RNA操作步骤简单,所提取的RNA纯度好、质量高且无污染,可以进行下一步的分子生物学研究。[结论]RNAiso法最适用于烟草叶片总RNA的提取。     

杜仲树皮总RNA提取方法的比较

[目的]从杜仲树皮中获得高质量的总RNA。为开展杜仲后续mRNA分离、杜仲抗真菌蛋白基因克隆、及杜仲树皮cDNA文库构建等研究奠定基础。[方法]以杜仲树皮为材料,分别采用改良CTAB-LiCl法、RNApure Plant Kit法和RNAiso Plus法进行总RNA提取,用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,用紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率。[结果]改良CTAB-LiCl法和RNA-pure PlantKit法提取的杜仲树皮总RNA纯度和完整性较高,A260/A280值均在1.800~2.000,28和18 SrRNA条带清晰,RNA得率较高;而RNAiso Plus法提取的杜仲树皮总RNA的纯度和完整性较低,A260/A280值为1.652,28S和18S rRNA条带存在降解和弥散现象,RNA得率低。[结论]改良CTAB-LiCl法和RNApure Plant Kit法抽提获得的杜仲树皮总RNA质量较高,能满足后续RT-PCR和RACE等试验的要求,这为成功克隆杜仲相关基因奠定了基础。关键词杜仲树皮;RNA提取;方法;比较     

3种杜仲枝叶总RNA提取方法的比较

采用改良过的CTAB - LiCl法、RNApure Plant Kit法和RNAiso Plus法分别提取杜仲枝叶总RNA,以期筛选出适于杜仲枝叶高质量总RNA提取方法;用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,以紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率.结果表明,改良过的CTAB - LiCl法和RNApurePlant Kit法提取的RNA完整性好,纯度高,RT - PCR可获得目的基因cDNA片段;RNAiso Plus法得到的RNA降解严重,纯度低.改良过的CTAB - LiCl法和RNADure Plant Kit法提取杜仲枝叶总RNA完全能满足后续的RT - PCR和RACE等分子生物学研究.     

草石蚕块茎总RNA提取及质量分析

采用3种方法提取草石蚕块茎的总RNA,以期筛选出适合草石蚕块茎总RNA提取的最佳方法。结果表明,RNAiso Reagent法提取草石蚕块茎总RNA的28S和18S条带清晰明亮,RNA无降解,无DNA污染,质量较好。王艳红法和TRIzolR Reagent一步提取法提取总RNA的28S和18S条带较暗,提取的总RNA有降解现象。根据紫外分光光度计检测结果分析,3种方法提取草石蚕块茎总RNA的纯度都较好。从提取RNA的产量来看,RNAiso Reagent法提取总RNA的浓度最高,为1112μg/mL,王艳红法次之,TRIzolR Reagent一步提取法最低。因此,RNAiso Reagent法是草石蚕块茎总RNA提取的最佳方法。     

3种芹菜茎组织总RNA提取方法的比较研究

[目的]为了获得质量较好的芹菜茎的总RNA,为后续分子生物学试验提供基础。[方法]试验对1种RNA提取方法(Trizol法)和2种RNA提取试剂盒(RNA prep Pure Plant Kit法、RNA simple Total RNA Kit法)方法进行比较研究。[结果]RNA prepPure Plant Kit方法得率低,且OD260/OD280值低于1.8,Trizol法OD260/OD230高于2.0,且得率低于RNA simple Total RNA kit法。只有RNA simple Total RNA kit法提取的RNA质量最好,得率最高。[结论]与Trizol法和RNA prep Pure Plant Kit法相比,RNA simple Total RNA Kit法提取的芹菜茎总RNA得率高,完整性好,凝胶电泳泳道无杂质,可以满足半定量RT-PCR的试验需要。     

鸢尾属植物花器官总RNA不同提取方法的比较分析

【目的】为了探索更适合鸢尾属植物花朵总RNA的提取方法。【方法】以新鲜的鸢尾(Iris tectorum Maxim.)和冷冻的西南鸢尾(I. bulleyana Dykes)的花蕾为材料,分别采用Trizol法、Trans Zol Plant试剂盒法和EasyPure Plant RNA Kit试剂盒法等3种方法提取它们的花蕾总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,利用超微量紫外分光系统检测RNA的纯度和浓度,比较3种不同试剂提取得到的总RNA的质量和浓度。【结果】对于冷冻的西南鸢尾花蕾组织,只有Trans Zol Plant试剂盒法可以提取出纯度好、浓度高的RNA。而对于新鲜的鸢尾花蕾,3种方法提取出的RNA均可用于后续试验,但质量和浓度有一定差异,EasyPure Plant RNA Kit试剂盒法提取出的RNA质量最好且产量较高; Trans Zol Plant试剂盒法提取出的RNA质量较好但产量最高; Trizol法提取出的RNA品质较好但产量最低。【结论】综合植物样品材料、RNA纯度和得率及费用等因素,EasyPure Plant RNAKit试剂盒法适合需要获得高质量的RNA和有新鲜的植物材料时使用; TransZol Plant试剂盒法适合在需要大量RNA但对RNA的质量要求不是很高时使用,且较适合应用于冷冻的鸢尾花朵。研究结果为鸢尾属植物的分子生物学深入研究提供一定研究基础,也为其它植物花朵总RNA的提取提供必要的参考。     

成熟油菜种子RNA提取方法的改良

[目的]从成熟油菜种子中抽提出高质量的RNA。[方法]该研究通过将天根植物总RNA提取试剂盒与康为世纪植物总RNA提取试剂盒相结合,使用β-巯基乙醇抑制酚类物质氧化,DNA酶去除DNA,并采用吸附柱有效去除多糖类物质等措施,对油菜种子RNA的提取方法进行有效改进。[结果]采用该方法能提取出质量高且完整性好的RNA,可一次满足后续分子生物学研究的要求。[结论]该研究提出了一种高效快捷的成熟油菜种子RNA提取方法。     

适合RT-PCR的苹果芽RNA快速提取方法研究

[目的]从苹果单芽中高效、快速提取RNA,为后续分子生物学研究奠定基础。[方法]分别以苹果品种新红星、嘎拉和富士的单芽为材料,用改良SDS法提取RNA,并经过甲醛变性琼脂糖凝胶电泳和RT—PCR检测RNA质量。[结果]研究出一种高效、快速的苹果单芽RNA提取方法,该方法能在2．5h内得到完整的RNA,经RT—PCR检验,能获得理想的目的片段。[结论]该方法稳定可靠,适合苹果单芽RNA提取。     

大麦不同器官总RNA提取方法研究

[目的]探索出一套较好的大麦总RNA提取方法。[方法]以大麦的叶片、茎秆和子粒为试验材料,探索各器官总RNA提取方法。[结果]所得产物的检验结果表明,总RNA具有整齐且清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,A260/A280均介于1.8~2.0。将提取的叶片总RNA反转录成c DNA,RT-PCR检测PCR产物在1 500 bp处。[结论]用此方法提取的大麦各器官总RNA质量较好,纯度较高,完整性较好,可用于进一步的分子生物学研究。     

珠美海棠叶片总RNA提取方法的比较

珠美海棠(Malus zumi)为多年生木本植物,组织中含有大量的多酚、多糖和蛋白质等物质,给总RNA的提取带来困难。本试验使用RNeasy Plant Mini Kit试剂盒、Trizol法、SDS法和改良CTAB法提取珠美海棠叶片总RNA,并用凝胶电泳和RT-PCR技术比较了4种不同方法提取的总RNA样品的质量,认为提取珠美海棠叶片总RNA的最佳方法为改良CTAB法。     

不同栽培及发育期对大豆根系RNA提取效果的影响

[目的]探讨从不同栽培条件下大豆不同发育期根系中提取RNA的最佳效果以及水浸处理对提取效果的影响。[方法]以吉农18为材料,分别采用沙质和土质栽培大豆至不同发育时期,根系取样,并采用RNAiso Reagent试剂盒提取根系总RNA,用2%的变性琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计检测RNA样品的完整性及纯度。[结果]不同栽培基质条件下大豆根部同一发育期在沙质栽培条件下提取总RNA的效果优于土质栽培,水浸处理后的样品优于处理前。[结论]水浸处理后所提取的大豆根系RNA质量较高,能满足基因克隆和基因表达分析的要求。     

鱼腥草叶片总RNA提取方法研究

[目的]筛选出适合鱼腥草（Houttuynia cordata）叶片RNA提取的方法。[方法]以鱼腥草叶片为材料,比较了经典RNA提取试剂盒、Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B以及富含多糖类材料RNA提取试剂盒提取鱼腥草RNA的效果。[结果]Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B和经典RNA提取试剂盒难以提取出高质量的RNA,而富含多糖类材料RNA提取试剂盒提出的RNA质量高,完整性好,可以满足进一步分子生物学研究的要求。[结论]普通RNA提取试剂盒难以提取出鱼腥草叶片的RNA。     

山药叶片总RNA提取方法的比较

[目的]提取高质量的山药叶片总RNA。[方法]以山药叶片为材料,采用异硫氰酸胍法、改良CTAB法提取山药叶片总RNA并进行比较分析,利用琼脂糖凝胶电泳分析所提RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度。[结果]改良CTAB法提取的总RNA的28S、18SrRNA条带清晰、整齐,测得A260/A280为1.72.0。[结论]改良的CTAB法适合山药叶片总RNA提取。     

百脉根总RNA提取方法的优化

[目的]为百脉根的分子生物学研究提供基础资料。[方法]以百脉根叶片为材料,比较异硫氰酸胍法、SDS-LiCl法及SDS-LiCl改进法提取总RNA的效果并探讨活性炭、抗坏血酸对RNA提取质量的影响。[结果]异硫氰酸胍法所提取的百脉根总RNA降解严重,盐类去除不充分,该方法不适合百脉根总RNA的提取;SDS-LiCl法提取的总RNA有一定程度降解,加入液体抗坏血酸会降低百脉根RNA的提取质量;SDS-LiCl改进法提取的总RNA较为完整,有较高的纯度,在研磨过程中加入固体抗坏血酸能够提高百脉根总RNA的提取质量。活性炭对百脉根总RNA的提取无影响。[结论]研磨时加入固体抗坏血酸的SDS-LiCl改进法能提取出高质量的百脉根总RNA。     

芹菜叶中总黄酮的提取工艺研究

[目的]探讨从芹菜叶黄酮类成分的最佳工艺,为芹菜叶的开发利用提供理论依据。[方法]以乙醇为提取溶剂,采用索式抽提法从芹菜叶中提取黄酮类物质成分,通过单因素试验研究乙醇浓度、提取时间、提取温度和料液比对总黄酮得率的影响。通过正交试验优选最佳提取工艺。[结果]影响黄酮得率的因素主次顺序为：乙醇浓度〉料液比〉提取温度〉提取时间。芹菜叶中总黄酮的最佳提取工艺为：提取溶剂乙醇的浓度为60%,提取时间为1 h,提取温度为70℃,料液比为1∶60。在此工艺条件下,提取的总黄酮得率为47.85mg/g。[结论]索式抽提法提取芹菜叶中的黄酮是一种切实可行的方法。     

油松成熟胚总RNA的提取方法

[目的]对油松成熟胚总RNA的提取方法进行比较,以期得到完整的高质量油松成熟胚RNA。[方法]以油松成熟胚为材料,用SDS法、Trizol法和CTAB法及改良的SDS法对油松成熟胚总RNA进行提取,以紫外分光光度计测OD值,并用琼脂糖凝胶电泳检验提取效果。[结果]改良SDS法提取的RNA产率高,完整性好,A260/A280为1.97,A260/A230为2.08,28 S、18 S、5 S条带清晰且28 S亮度是18 S的2倍。通过RT-PCR检测,ds cDNA片段的弥散带分布范围在0.3～3.0 kb,进一步验证改良的SDS法可获得高质量的RNA,用于后续的分子生物学研究。[结论]改良SDS法成本低,操作简单,提取时间短,RNA质量好,是多酚多糖植物总RNA提取比较有效的方法。