葡萄风信子基因转化受体系统的建立

以葡萄风信子(Muscari botryoides Mill)品种"紫葡萄"(Cantat)的鳞茎和叶片为外植体,通过植物组织培养再生系统的建立和抗生素敏感性试验,建立了稳定的葡萄风信子基因转化受体系统。结果表明,葡萄风信子的鳞茎和叶片均可被诱导形成大量的愈伤组织;叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS+0.6 mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA,其诱导频率可达100%;鳞茎诱导愈伤组织的最适培养基为MS+3.0 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L 6-BA,其诱导频率达91.2%;愈伤组织分化不定芽的最适培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,生根最适培养基为1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1%AC;筛选卡那霉素的临界质量浓度为60 mg/L,羧苄青霉素的适宜质量浓度为300 mg/L。     

越南紫薯胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎形成

【目的】越南紫薯〔Ipomoea batatas（L.）Lam〕品质优良,薯块均匀,商品性好,但产量偏低,产量性状亟待遗传改良,体细胞胚胎发生是快速繁殖和保持种性稳定的基础,对紫薯的遗传改良有重要意义。采用激素处理越南小紫薯外植体,研究越南紫薯的体细胞胚胎再生途径,为通过体细胞无性系变异筛选紫薯高产优质新材料提供新方法。【方法】以市场销售的越南紫薯为材料,以叶片和茎段作外植体,探讨植物生长调节物质种类（6-BA、NAA、2,4-D、ABA）及配比对越南紫薯培养的影响,建立越南紫薯体细胞胚胎发生及再生植株体系。【结果】叶片和茎段诱导愈伤组织培养基相同,难易程度一致,诱导配方为 MS+6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L;在普通愈伤组织诱导形成胚性愈伤组织过程中,2,4-D 起重要作用,其他激素起辅助作用,较好的诱导配方为 MS+6-BA 0.1 mg/L + 2,4-D 2.0 mg/L;在胚性愈伤组织诱导产生体细胞胚过程中,ABA 起着重要作用,并进一步发育和分化的适宜的培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 0.2 mg/L + ABA 0.5 mg/L。【结论】叶片和茎段愈伤组织诱导最佳培养基为 MS+6-BA 1.0 mg/L+0.2 mg/L NAA,愈伤组织转化为胚性愈伤最佳培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L +2,4-D 2.0 mg/L;胚性愈伤形成体细胞胚胎最佳培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 0.2 mg/L + ABA 0.5 mg/L。     

黄芪愈伤组织的诱导及分化培养

通过对黄芪叶片和茎段愈伤组织进行诱导及分化培养,确定黄芪愈伤组织诱导和分化培养最佳培养基分别为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA和MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA,选择叶片作为外植体优于茎段,愈伤诱导率和直接分化出...     

婆婆纳组织培养再生体系的建立

以婆婆纳(Veronica didymaTenore)的叶片、茎节、茎段、顶芽为外植体,接种在附加2,4-D、6-BA、NAA等不同质量浓度和组合的培养基中进行离体培养,并比较了不同培养基上不同外植体的诱导率。结果表明,诱导愈伤组织的最佳外植体是叶片,诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D0.01 mg/L+6-BA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L,愈伤组织诱导率为100%。诱导愈伤组织分化的最适培养基为MS+2,4-D0.01 mg/L+6-BA0.75mg/L+NAA1.75 mg/L,分化率为90%。诱导生根的培养基为l/2MS+NAA0.2 mg/L,生根率为90%。     

铁炮百合离体再生体系的建立

以铁炮百合无菌苗的叶片、鳞片为外植体,进行铁炮百合再生体系的研究。结果表明:鳞片的诱导分化能力高于叶片,鳞片分化培养基(MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA、MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA)的分化率高达90.98%。用叶片为外植体,不同部位对不定芽的诱导影响较大,以叶片中部分化能力最强,上部次之,下部最差。叶片分化培养基为MS+1.0 mg/L BA+0.2 mg/L NAA,分化率为85.36%。2,4-D浓度对愈伤组织的诱导影响显著,愈伤诱导培养基以MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D为佳,愈伤率达80%以上。     

泰半夏小块茎的诱导及工厂化育苗研究

以泰半夏的无菌叶片、叶柄为材料,通过愈伤组织分化不定芽途径,建立泰半夏工厂化育苗植株再生体系。结果表明,以叶片、叶柄为外植体,愈伤组织最适诱导培养基分别为:MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 3.0 mg/L、MS+0.5 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA;愈伤组织在相同培养基中增殖后诱导小块茎分化的最适培养基为:MS+2 mg/L6-BA。1/2MS+0.1%活性炭+0.5 mg/L NAA培养基产生的根较粗壮、浓密。     

耧斗菜的组织培养

以耧斗菜幼嫩叶片及叶柄为外植体,研究了不同生长调节物质对外植体愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,在培养基MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L上诱导叶柄产生愈伤效果最好,诱导率为80.5%;在培养基MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L上叶片愈伤诱导效果最好,诱导率为92.7%。继代培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L和MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L。在培养基MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L中分化芽;分化的芽在MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L中增殖。生根培养基为1/2 MS+NAA0.1 mg/L或1/2 MS+IBA 0.2 mg/L。     

不同植物生长调节剂对大苞白山茶叶片愈伤组织诱导的影响

以大苞白山茶叶片为外植体,研究不同生长调节剂6-BA、TDZ、KT、2,4-D和NAA对其愈伤组织诱导的影响.结果表明:MS+3.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA愈伤诱导率最高,但以MS+2.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA愈伤组织分化最好;在6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基中分别加入2,4-D (0.5～2.5 mg/L)、KT(0.5～2.5 mg/L)和TDZ(0.1～0.5 mg/L)后,2,4-D和TDZ均可提高愈伤组织的诱导率,最高可达100％和94.8％,KT的加入反而降低了愈伤组织的形成;适宜的分化培养基为MS+ 2.5 mg/L 6-BA+ 0.02 mg/LTDZ+ 0.05 mg/L NAA.     

大叶女贞愈伤组织诱导及继代培养的研究

实验以大叶女贞的幼嫩叶片和幼嫩茎段为外植体，研究了6-BA、2,4-D对愈伤组织诱导的影响。结果表明：愈伤组织诱导的最适外植体为幼嫩的茎段，愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.2mg/L 6-BA+0.1mg/L 2,4-D。     

半夏再生体系的建立

【目的】优化半夏再生条件,以获得优质半夏种苗.【方法】筛选出适宜的外植体后,使用3种激素2,4-D,KT,IAA利用正交设计法设置9个处理组对半夏愈伤组织进行诱导.选取长势良好,大小均一的半夏愈伤组织接于4种培养基中进行愈伤组织增殖.选取半夏叶柄诱导出的愈伤组织将其接于5种培养基中进行愈伤组织分化,观察不同培养基对半夏愈伤组织生根和出芽的影响,最后进行炼苗与移栽.【结果】在叶柄、叶片及块茎3种外植体中,叶柄是半夏愈伤组织诱导的最佳外植体;最有利于半夏愈伤组织诱导的培养基为MS+0.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L KT+1.0 mg/L IAA;在暗培养条件下,将半夏愈伤组织继代于MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L IAA中生长最快;MS+0.2 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA培养基最有利于半夏愈伤组织的生根和出芽.     

芍药根茎芽发育及更新规律的形态学研究

对芍药根茎性质及根茎芽发生、发育及成枝规律进行动态观察研究,为揭示芍药营养繁殖特性,提高营养繁殖效率提供理论指导。结果表明:芍药根茎是芍药的地下短缩茎,节间产生不定根,节上有芽,属于腋芽类型。根茎以根茎芽来实现每年更新生长,最终呈现合轴分枝形态。根茎芽的叶元呈现:鳞片-茎节-侧芽-叶-茎节-腋芽的依次发生模式,从第5枚鳞片原基开始叶元由交互对生向螺旋状着生状态转变,并一直持续到花瓣原基形成。叶片同株异型,叶原基呈向顶式发育,而花原基呈向基式发育。通过越冬状态下的侧芽的发育状态观察,初步确定了根茎的茎节范围,根茎顶部1~2枚根茎芽在第2年春天萌发成茎,其余根茎芽则随根茎的生长发育长期处于休眠状态。越冬状态下,顶芽顶端分生组织进入雌蕊原基分化期,顶部4~5枚腋芽进入花瓣原基分化期,而其余腋芽处于原基初始发生状态而生长停滞,从而形成"一茎多枝"。     

西葫芦双单倍体自交一代离体再生研究

以西葫芦DH12-11409双单倍体植株自交后代种子为试材,研究不同激素组合、外植体类型和苗龄对诱导西葫芦不定芽再生以及不定芽生根的影响。结果表明,取5d龄西葫芦双单倍体黄绿色子叶的子叶节为外植体,在MS+30g/L Suc+8g/L Agar+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基上诱导不定芽效果最好,诱导率高达90.0%,分化系数为8.5;生根培养基则以MS培养基中添加0.05或0.1mg/L NAA为宜;5~6片真叶再生植株经驯化移栽成活率高达90.0%,为再生植株驯化移栽的最佳时期。     

草原1号杂花苜蓿花蕾转录组SSR序列特征

【目的】对草原1号杂花苜蓿花蕾转录组微卫星SSR特征进行分析,为开发新的分子标记和辅助育种选择研究奠定基础。【方法】利用MISA软件对草原1号杂花苜蓿花蕾转录组数据进行简单重复序列(SSR)位点搜索,并对SSR分布及其序列特征进行分析。【结果】在286 409条非冗余单基因簇(Unigene)序列中共挖掘到57 368个SSR位点,SSR出现频率为20.03%,平均分布距离5.84 kb。重复基元数量以单核苷酸(68.45%)为主,三核苷酸(16.46%)次之。在129种重复基元中,以A/T类型基元(68.15%)最高,其次为AG/CT基元(6.56%)。SSR基元重复次数主要集中在6～15次,核苷酸数量随着基元重复次数的增加而减少。SSR长度主要集中在12～40 bp(55.58%),具有较高多态性潜能的SSR(长度≥20 bp)位点数为9 166(15.98%)。【结论】草原1号杂花苜蓿SSR位点出现频率高、基元重复次数和类型丰富、多态性潜能高,可用于苜蓿遗传多样性与品种的分子鉴定及分子标记辅助选择。     

树兰茎段丛生芽快繁体系的建立

【目的】建立茎段诱导丛生芽途径的树兰快速繁殖技术体系,为树兰种苗生产及工厂化育苗奠定基础。【方法】以树兰当年生分蘖苗的带芽茎段为外植体,以MS为基本培养基,研究不同质量浓度6-BA、NAA和IBA组合对树兰茎段丛生芽诱导、增殖及生根的影响。【结果】不同质量浓度6-BA和NAA组合对树兰茎段丛生芽的诱导与增殖均有显著影响,树兰茎段丛生芽诱导最适宜培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA,诱导率最高达到73.13%;增殖最适宜培养基为MS+3.0mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA,增殖系数最高达到5.2。不同质量浓度NAA和IBA组合对树兰组培苗生根有显著影响,生根最适宜培养基为MS+1.0mg/L NAA+1.5mg/L IBA,生根率可达100%,平均根数7.78条/株,株高7.44cm,茎粗2.82mm。【结论】建立了树兰茎段诱导丛生芽的组织培养快繁体系,在该体系下丛生芽的诱导率和增殖率均较高,生根状况良好。     

应用抑制消减杂交技术筛选葡萄冬芽和夏芽生理休眠相关基因

【目的】葡萄新梢上的芽有冬芽和夏芽两种,根据这两种芽休眠特性的差异,筛选与芽生理休眠相关基因,进而从分子水平研究葡萄芽生理休眠的相关机制。【方法】以‘赤霞珠’葡萄新梢上冬芽和夏芽为材料,夏芽作为驱动方（driver）,冬芽作为实验方（tester）,采用抑制消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）构建冬芽和夏芽的SSH-cDNA文库,筛选冬芽和夏芽差异表达的基因片段。通过NCBI同源比对,寻找与葡萄芽生理休眠相关的基因,并对差异表达基因进行功能注释和分类。最后,运用Real-time PCR技术对部分候选基因进行检测,以验证其与葡萄芽生理休眠的相关性。【结果】共获得359条有效、高质量的差异基因片段,经CAP3软件聚类拼接,得到106个unique EST。在GenBank中进行BLASTN同源比对,有98条EST与已知蛋白或基因具有不同程度的同源性,占全部EST的92.4%。进行BLASTX同源比对,有54条EST与功能已知蛋白或基因具有不同程度的同源性,占全部EST的51%。已知功能的EST涉及休眠、逆境胁迫、细胞代谢、胞内物质运输等方面,且绝大多数基因信息来源于葡萄、苜蓿、橄榄、油菜、高粱、棉花、大蒜、拟南芥等植物。对差异基因片段进一步的功能分析发现,调控开花的基因占生物学过程的20%;与环境胁迫相关的基因占生物学过程的6%;与细胞代谢相关的基因占生物学过程的20%;与胞内物质运输相关的基因占总生物学过程的6%;其他包括DNA转录、减数分裂、细胞死亡及细胞壁松弛作用等。这些基因的分子功能主要有半胱氨酸型肽链内切酶、甲基转移酶、蛋白激酶、催化活性、结构分子活性、蛋白结合功能、DNA结合功能、ATP结合功能、蛋白质二聚体催化活性及丙酮酸氨基转移酶活性等。经Real-time PCR检测得知,在夏芽萌发过程中,候选基因在冬芽和夏芽中表达量呈不规律变化,且同一基因在相同节位的冬芽和夏芽中表达量均有较大差异。【结论】发现了一些在冬芽中表达频率较高的基因,如编码MADS FLC-like蛋白、钙依赖蛋白激酶、NADP依赖型的苹果酸酶、细胞壁水解酶、细胞壁松弛蛋白、外被体蛋白β亚基、热激蛋白、衰老相关蛋白、细胞色素P450、细胞壁关联蛋白等基因,认为线粒体蛋白基因、未知蛋白基因、开花相关基因、ATP合成酶β亚基基因、MADs FLC-like蛋白基因等与葡萄芽生理休眠具有相关性。     

温度对桃品种破眠效应的研究

研究了25～15 ℃变温与20 ℃恒温条件对23个桃品种打破休眠的影响.在21个品种中16个品种未打破生理休眠的时期,9个品种叶芽和花芽在25～15 ℃下的萌动指数大于在20 ℃条件下的萌动指数,5个品种的花芽在25～15 ℃下的破眠情况大于在20 ℃条件下,2个品种的叶芽在25～15 ℃下的破眠情况大于在20 ℃条件下.14个品种已部分打破生理休眠的时期,继续供试的16个品种对温度的反应不同,叶芽和花芽对温度的反应不同,大观山1号在25～15 ℃下的破眠情况大于在20 ℃条件下,2个桃品种安农水蜜和玉露在25～15 ℃下的破眠情况小于在20 ℃条件下;多数品种的叶芽在25～15 ℃下的破眠情况大于在20 ℃条件下,多数品种的花芽在25～15 ℃下的破眠情况小于在20 ℃条件下.不同条件对桃品种花芽萌发的先后顺序有较大的不同,但几个早花品种在3种条件下,花芽萌动均较早.表2参11     

铁皮石斛以芽繁芽离体培养技术体系的建立

【目的】建立铁皮石斛以芽繁芽离体培养技术体系,为广西铁皮石斛良种选育及种苗繁殖提供技术支持。【方法】以广西桂平种、容县种和西林种3种野生铁皮石斛后代材料茎段为外植体,进行丛生芽诱导、增殖和壮苗生根培养,探讨不同消毒时间和不同激素配比对丛生芽诱导培养等过程的影响。【结果】3种材料外植体的最佳消毒时间为10min,污染率仅10．0％-20．0％;桂平种丛生芽最佳诱导培养基为MS＋2．0mg／L6-BA＋0．2mg／LNAA＋10％椰子汁,丛生芽诱导率7．8％;容县种和西林种丛生芽诱导最佳培养基为MS＋1．5mg／L6-BA＋0．2mg／LNAA＋10％椰子汁,丛生芽诱导率分别为23．1％和30．8％。3种材料丛生芽继代增殖最佳培养基为MS＋0．5mg／L6-BA＋0．2mg／LNAA＋10％椰子汁,平均增殖倍数为3～5倍;壮苗生根最佳培养基为1／2MS＋0．5mg／LNAA＋0．2mg／LIBA＋10％香蕉泥,生根率在95．0％以上;以松树皮为移栽基质,移栽成活率在90．0％以上。【结论】以桂平种、容县种和西林种3种野生铁皮石斛后代材料茎段为外植体均可建立以芽繁芽离体培养技术体系;在诱导培养基和继代培养基中增加继代次数,可提高铁皮石斛的诱导率和增殖倍数。     

雷公藤优良无性系组织培养技术的研究

以雷公藤绿色嫩叶诱导产生的愈伤组织为外植体,通过正交试验设计,研究了不同培养基对雷公藤优良无性系不定芽诱导、不定芽增殖和生根的影响。结果表明:不同浓度的激素组合对雷公藤愈伤组织不定芽诱导培养的影响显著,最优诱导培养基为MS+IAA 0.2 m.gL-1+KT 0.5 m.gL-1+6-BA 1.5 m.gL-1;不同浓度的激素组合对雷公藤不定芽增殖培养的影响极显著,最佳增殖培养基为MS+NAA 0.1 m.gL-1+KT 0.1 m.gL-1+6-BA 1.0 m.gL-1;不同培养基对雷公藤生根培养的影响不显著,生根培养适合的培养基为1/2MS+NAA 2.0 m.gL-1+KT 0.1 m.gL-1。     

刺黑竹气生根发育与秆芽的生长发育规律

为了研究刺黑竹(Chimonobambusa neopurpurea Yi)生根和秆芽发育规律,以加强刺黑竹育种和应用的理论基础,以南京引种的刺黑竹为试验对象,通过表观形态学观察以及滑走切片等方法,一方面对刺黑竹气生根的发育机理进行探讨,另一方面对刺黑竹气生根和秆芽在不同部位节间的发育变化规律进行研究。结果表明:高生长结束时,刺黑竹竹秆气生根的发育是自基向顶的,竹秆基部的气生根发育最早,也最先达到成熟,靠近基部为刺状的气生根,表现为木质化程度较高的深褐色刺状组织,越往秆稍则气生根的发育越为迟缓;而刺黑竹竹秆节部芽的生长则表现为竹秆中部17至19节部生长最快,基部和稍部生长相对较慢。切片表明气生根的发育方式为内起源,而秆芽为外起源。刺黑竹幼秆气生根与秆芽的生长及分布具有明显的规律性,了解并利用这种规律将有助于以刺黑竹为主的方竹属竹种的育种与推广。     

雷公藤以芽繁芽组织培养研究

以雷公藤茎段为材料,用正交试验设计来寻找其组织培养的最佳配方,结果表明：芽段在MS＋NAA0．01mg／L培养基中,可萌动产生新叶和新芽;在增殖培养中,以1／2MS＋6-BA1mg／L＋NAA0．2mg／L组合月增殖系数最大,达5．38,且芽生长最好;在生根培养中,以1／2MS＋ABT-1^#0．6mg／L＋IBA0．3mg／L的生根率最高,达80．8％。