转高赖氨酸融合蛋白基因大米喂养SD大鼠90天试验研究

 【目的】利用大鼠食用转高赖氨酸融合蛋白基因大米（简称转GL基因大米）试验来初步评价转GL基因大米的食用安全性。【方法】根据转GL基因大米及其亲本大米的营养成分,分别以70%的大米添加量配制成全价料,配制饲料营养成分与对照组饲料一致。将刚断乳的SD大鼠按性别和体重分为3组：转GL基因大米组、亲本大米组和对照组。分别饲喂相应组饲料90 d,自由进食。观察大鼠体重、进食量、食物利用率、血常规、血生化、尿常规、脏器系数和脏器的病理学检查。【结果】转GL基因大米组所有检测指标与亲本大米组相比均无统计学差异(P＞0.05);转GL基因大米组与对照组相比,转GL基因大米雌性组进食量、雄性组试验末期血清中CHOL显著低于对照组（P＜0.05）,而转GL基因大米雌性组食物利用率、雄性组试验末期全血中MCV、雄性组试验中期血清中AST、雄性组试验末期血清中AST/ALT和P显著高于对照组（P＜0.05）,但这些数据并没有显示出生物学意义上的显著性差异,而且血常规与血生化指标均在正常值范围内。【结论】转GL基因大米对大鼠生长发育无明显不良影响,转GL基因大米和其亲本大米对大鼠有同等的食用安全性。     

转溶菌酶基因水稻稻米毒理及致畸作用试验

通过小鼠急性毒性试验、大鼠长期毒性试验、小鼠微核试验和精子致畸试验对转溶菌酶基因水稻稻米的毒性及致畸作用进行了初步的评价.转基因大米淀粉灌胃小鼠,剂量相当于成人每日食用2 250 g,连续7 d观察,动物全部存活,表现正常,未见动物出现中毒反应,小鼠灌胃转基因大米的最大耐受量MTD≥37.5 g/kg.转基因大米粉分别以15 g/kg/d和7.5 g/kg/2个剂量,相当于成人日食用量900 g和450 g,连续94 d灌胃大鼠,灌胃期间动物的行为活动、外观体征、饮食、粪便、体重均无异常.5项血液学检查和13项生化指标检测及处死1/2的动物尸体解剖观察、脏器系数及脏器病理学检查,结果均属正常,与空白对照无显著差异;剩余1/2的动物留存观察2周,各项观察指标、血液、生化及病理检测也无异常.转基因大米粉以15 g/kg和7.5 g/kg 2个剂量分别灌胃小鼠,未发现对小鼠骨髓细胞微核和精子畸形发生率有不良影响.本试验结果提示携带溶菌酶基因、NPT-Ⅱ标记基因等外源DNA的转基因大米无明显的毒性和致畸作用.     

转WMV-2 CP基因西瓜的安全性评价

以转WMV-2CP基因西瓜（Citrullus lanatus var. lanatus）为例,对转基因食品进行了安全性评价。对转WMV-2CP基因西瓜进行小鼠急性和亚急性毒性试验、致突变试验以及30 d喂养试验。结果表明,小鼠经口急性毒性半数致死量LD50〉150 g·kg^-1,属实际无急性毒性物质;经微核实验、精子畸变实验及Ames实验均未发现有致突变作用;30 d喂养试验,90 g·kg^-1、180 g·kg^-1、270 g·kg^-1各剂量组小鼠发育、增重、食物利用率、血常规、脏体比及病理组织学观察等各项指标与基础对照组比均无显著性差异。初步表明转WMV-2CP基因西瓜对小鼠没有毒性,属安全食品。     

转Bt基因玉米HGK60对小鼠亚慢性毒性效应研究

【目的】评估转Bt基因玉米HGK60对小鼠的亚慢性毒性效应。【方法】以8周龄昆明小鼠及BALB/C小鼠为试验对象开展小鼠90 d喂养试验,试验组和对照组各设置小鼠24只,雌雄各一半。试验组和对照组分别喂养转Bt基因玉米HGK60和非转基因含郑58玉米饲料,观察和记录45 d和90 d时小鼠的体重及进食量、血液生化、脏器系数及器官Bt蛋白残留情况。【结果】试验期间,转Bt基因玉米处理组的小鼠与对照组小鼠均保持良好的生长状况,无任何异常行为,也均无中毒死亡情况。45 d和90 d转Bt玉米试验组与含郑58玉米对照组小鼠的体重,进食量,血液尿素氮、谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平,胃/十二指肠、肝、肾及脾脏器系数均无显著性差异(P0.05);45 d和90 d Bt试验组肝脏中均无Bt蛋白检出,胃/十二指肠和粪便中皆有不同程度检出,推测所检出的Bt蛋白可能是未经完全消化的饲料中的Bt蛋白。【结论】本研究试验条件下,转Bt基因玉米HGK60对小鼠的生长发育、血液生化指标及重要器官均无显著影响。此结果可为转Bt基因玉米的饲用安全性评价提供科学依据。     

转Bar基因抗除草剂稻谷对妊娠小鼠亚慢性毒性的响应

[目的]研究转Bar基因水稻对妊娠期小鼠是否有亚慢性毒性损害及多代毒性累积。[方法]以60只18～24 g区间的SPF级昆明小鼠为试验对象,分别喂食含量为20%、40%、60%转Bar基因稻谷,并以常规D68水稻为对照,饲养90 d后合笼,自由取食、饮水并受孕繁殖F1代。在小鼠妊娠14～15 d解剖,测定孕鼠的血液生化、脏器重量及其病理学指标。[结果]转Bar基因抗除草剂稻谷对亲代孕鼠血液生化指标均无显著的影响;除喂食转基因稻谷含量为20%和40%的F1代孕鼠分别在甘油三酯和总胆固醇含量上显著高于对照组外,转Bar基因抗除草剂稻谷对F1代孕鼠血液生化的其他指标均无显著影响。转Bar基因抗除草剂稻谷对亲代、F1代孕鼠的脏器重量及其病理学指标均无显著影响。[结论]该研究表明转Bar基因水稻对亲代、F1代妊娠小鼠没有亚慢性毒性损害及多代毒性累积的影响。     

茶多酚类毒理学试验及其评价

本文对高纯度(含量大于90％)茶多酚类(TP)进行了急性毒性试验、蓄积性试验和致突变试验,并对其作为食品添加剂的安全性作了评价.急性毒性试验结果为小鼠口服LD_(30)=2496±326mg/kg.蓄积性试验表明,有中等蓄积性.Ames试验,骨髓PCE微核率的测定,骨髓细胞SCE的测定,果蝇SLRL诱变性试验等遗传毒理试验均为阴性.以0.1％浓度饲喂小白鼠六周后,小鼠的血红蛋白、红细胞数、白细胞数、体重、肝重、胸腺和脾脏的细胞数与正常对照组比较,雌雄小鼠均无显著差异.肝、脾、胸腺等器官体重比与对照组比较也无显著差异.慢性毒性试验表明,饲料中TP含量为0.1％时。对果蝇寿命无不良影响.试验表明,TP作为食品添加剂是较安全的.     

乳铁蛋白牛初乳颗粒的毒理安全性研究

[目的]为判定聪贝优牌乳铁蛋白牛初乳颗粒对人体健康是否产生危害,进行了聪贝优牌乳铁蛋白牛初乳颗粒的安全性毒理学评价。[方法]采用急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓微核实验、微小鼠精子畸形试验和30 d喂养试验对聪贝优牌乳铁蛋白牛初乳颗粒急性毒性、致突变性以及亚慢性毒性进行了研究。[结果]聪贝优牌乳铁蛋白牛初乳颗粒小鼠急性毒性试验LD50大于20.0 g/(kg.bw),属实际无毒;对基因、体细胞与生殖细胞无明显致突作用;受试物分别按1.00、2.00、4.00 g/(kg.bw)的剂量喂养大鼠30 d,结果表明动物未出现异常。[结论]根据试验结果,可判定聪贝优牌乳铁蛋白牛初乳颗粒为安全性食品。     

马铃薯渣枯草芽孢杆菌发酵物毒理学研究

为探究马铃薯渣枯草芽孢杆菌发酵物的毒理学特性,以小鼠为研究对象,通过经口急性毒性试验、鼠伤寒沙门菌/哺乳动物微粒体酶试验、骨髓细胞微核试验和睾丸染色体畸变试验,评价马铃薯渣枯草芽孢杆菌发酵物的食用安全性。结果表明:马铃薯渣枯草芽孢杆菌发酵物对雌雄小鼠的经口最大耐受剂量均大于15g·kg-1(BW),按急性毒性分级标准,这一发酵物为无毒级;与对照相比,喂食马铃薯渣枯草芽孢杆菌发酵物的小鼠经3项遗传毒性试验检测,结果均为阴性,说明马铃薯渣枯草芽孢杆菌发酵物无急性毒性、无诱变活性和致突变作用。这一研究提示马铃薯渣枯草芽孢杆菌发酵物属于无毒级。     

菌草灵芝菌糟的饲用安全性

通过小鼠急性毒性试验、30 d喂养试验、黄曲霉毒素B1的测定和重金属测定,研究菌草灵芝菌糟的饲用安全性.结果表明:小鼠经口的急性毒性MTD>20 g.kg-1,对小鼠无不良影响;30 d喂养试验期间,各组小鼠的生长不受影响,且添加5%、15%灵芝菌糟组小鼠日增重分别比对照组提高21.62%(P>0.05)、27.03%(P<0.05).剖检未见组织器官病变,对血常规检测指标基本无影响(P>0.05);黄曲霉毒素B1、重金属含量均在饲料卫生标准限定范围内.     

国产西洋参急性毒性及致突变作用的研究

为了考察西洋参作为饮食用的安全性，本文以西洋参水提取液‘进行了动物的急性毒性和致突变试验。试验结果表明，西洋参水提取液对小白鼠经口急性毒性ＬＤ５０〉１２．５ｇ／ｋｇ，属实际无毒级。致突变试验中Ａｍｅｓ试验显著了西洋参液无致基因突变作用，微核试验和精子致畸试验都证实了西洋参液对小鼠体细胞染色体无损作用，也无致小鼠生殖细胞畸变作用。     

益生菌Lactobacillus casei Zhang冻干粉对小鼠急性毒性的研究

通过研究益生菌Lactobacillus casei Zhang冻干粉对小鼠急性毒性作用,为该菌株的安全应用提供依据。连续14 d对小鼠灌胃不同剂量的L.casei Zhang冻干粉,各剂量组小鼠的一般体征、肝脏功能、脏器指数以及肝、肾、脾形态学的观察结果与对照组相比无显著差异（P>0.05）。急性毒性试验及相关指标检测结果显示L.casei Zhang冻干粉无毒副作用。     

变异猪流行性腹泻病毒M和N双基因融合真核表达及其活性鉴定

[目的]体外表达变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M-N双基因融合蛋白并明确其生物活性,为开展PEDV新型疫苗及其诊断技术研究提供更多的候选蛋白.[方法]将变异PEDV的M基因克隆至pEASY-Blunt M2(pM2)真核表达载体构建pM2-M真核质粒,通过同源重组将N基因克隆至M2-M基因片段构建pM2-M-N双基因融合重组质粒,然后转染293T细胞表达出M-N双基因融合蛋白.通过Western blotting、ELISA及免疫BLAB/c小鼠试验鉴定表达融合蛋白的生物学活性.[结果]扩增获得的M基因、N基因片段大小分别为678和1359 bp,且与原序列的相似性均达100.0%.将M基因和N基因并连接至pM2真核表达载体成功构建获得pM2-M-N双基因融合重组质粒,M-N双基因片段大小为2004 bp,且与原序列的相似性为99.3%.以pM2-M-N双基因融合重组质粒转染239T细胞,表达出大小约75 kD且具有免疫活性的M-N双基因融合蛋白,纯化的M-N双基因融合蛋白能与PEDV阳性血清反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒均无交叉反应;以其免疫BLAB/c小鼠能诱导产生特异性抗体.[结论]通过pM2真核表达载体能构建获得变异PEDV毒株的pM2-M-N融合双基因重组质粒,转染293T细胞后可表达出具有良好免疫活性的M-N双基因融合蛋白,为后期开展变异PEDV基因工程疫苗及其诊断技术研究提供更多的候选蛋白.     

卡介苗多糖核酸对小鼠一般毒性和致突变研究

采用卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对ICR小鼠进行急性毒性、亚慢性毒性和致突变作用试验,探讨BCG-PSN对应用动物的毒理学效应及其致突变程度。结果表明:小鼠腹腔注射BCG-PSN后LD50>2 000mg.kg-1,在其最大溶解度范围内无急性毒性;BCG-PSN对小鼠的亚慢性毒性试验表明,高剂量(100mg.kg-1)BCG-PSN组小鼠在用药后的48h内表现扎堆、畏寒、不喜运动、被毛蓬松等,以后逐渐好转的毒性反应;长期大剂量应用BCG-PSN会诱使动物出现轻微贫血和肾脏损伤,但在中、低剂量条件下长期使用是安全的;小鼠骨髓微核试验和精子畸形试验结果均呈阴性,表明BCG-PSN的致突变作用较弱。     

中药川贝对小鼠急性毒性和致突变性的研究

[目的]通过急性毒性试验和微核试验了解川贝水提取物对小鼠的急性毒性和致突变性.[方法]川贝急性毒性试验中采用最大给药量,记录小鼠给药1周内的生理反应及体征变化,然后通过剖检及血液学指标研究川贝的急性毒性.通过微核试验检测川贝水提取物对小鼠骨髓嗜多染红细胞的影响,了解川贝的致突变性.[结果]小鼠在最大给药量折合生药为90 000 mg/kg的剂量下没有明显异常反应,体重、血液指标与对照组无差异,剖检无内脏病变.微核试验结果呈阴性.[结论]川贝水提取物对小鼠无急性毒性及致突变性,可作为兽医临床用药安全使用.     

转Bar基因稻谷对小鼠肝功能若干参数的影响

通过对SPF级昆明小鼠喂食含量分别为20%、40%、60%转抗除草剂(Bar)基因稻谷,繁殖F1、F2代,并持续观察F1、F2代小鼠的日常行为、肝脏器官指数及血液生化指标,研究了转抗除草剂Bar基因稻谷对小鼠肝功能若干参数的影响。结果表明:用转Bar基因稻谷喂养并未对小鼠日常行为产生明显影响。F1、F2代供试小鼠各剂量的转基因组与常规对照组小鼠肝脏器官指数无明显差异(P>0.05)。F1代小鼠中A组和C组的白/球比、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶等指标无显著性差异(P>0.05),B组的白/球比、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶等指标无显著性差异(P>0.05),但碱性磷酸酶指标出现显著性差异(P<0.05);F2代小鼠中A、B、C组白/球比、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶5项指标均无显著性差异(P>0.05)。F1、F2代A、B、C组的葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇3项指标均无显著性差异(P>0.05)。在试验处理及时间内,与对照常规稻谷相比,用转基因稻谷喂养小鼠对其肝脏功能基本无影响。     

连翘叶水提取物对小鼠急性毒性和微核试验

[目的]研究连翘叶水提取物对小鼠急性毒性、致突变性作用。[方法]采用最大给药量试验进行连翘叶水提取物急性毒性试验,给药后连续观察7 d、记录动物反应情况。观察结束后对小鼠进行剖检、血液学检查和生化检查,以小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验进行致畸变检测。[结果]小鼠最大给药量折合生药为60 000 mg/kg;在此剂量下小鼠无明显异常表现,内脏病理解剖无器官病变情况,体重、血液、生化指标与正常对照组无明显差异;微核试验呈阴性反应。[结论]连翘叶水提取物为无毒性物质,亦无致突变作用,经口给药可安全用于兽医临床。     

蝉花菌质在饲料中应用安全性初探

本研究通过开展蝉花菌质小鼠经口急性毒性试验、雌性小鼠和雄性小鼠的小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠的精子畸形试验评价其安全性，为蝉花菌质作为饲料原料在畜牧行业的应用提供理论依据。研究结果表明，受试的所有ICR小鼠在试验观察期内均未见中毒症状和死亡情况，在试验结束后大体剖检小鼠的肾脏、肺脏、脾脏、肝脏、胃肠道、心脏等组织器官均未发现异常变化，根据本试验判定蝉花菌质对ICR小鼠经口急性毒性试验的半数致死量大于5 000 mg·kg^-1体重；蝉花菌质在1 250～5 000 mg·kg^-1体重剂量范围内经口染毒后，各小鼠骨髓细胞中含微核嗜多染红细胞率和小鼠精子畸形率与阴性对照组比较均无显著性差异(P>0.05),说明小鼠骨髓细胞微核试验结果和小鼠精畸形试验结果均为阴性。以上试验表明，蝉花菌质具有很好的安全性，可作为饲料添加剂或饲料原料进一步研究开发。     

林蛙卵油多不饱和脂肪酸的急性毒性及致突变性研究

[目的]研究林蛙卵油多不饱和脂肪酸的安全性.[方法]通过经口急性毒性试验、骨髓微核试验和精子畸形试验,研究林蛙卵油多不饱和脂肪酸的急性毒性及致突变性.[结果]林蛙卵油多不饱和脂肪酸对小鼠一般状态没有影响,试验过程中未见小鼠死亡及其他毒性表现.林蛙卵油多不饱和脂肪酸的最大耐受剂量大于60 g/kg体重(小鼠,经口).根据急性毒性的分级标准,林蛙卵油PUFAs属于无毒级物质,安全性较高.[结论]该林蛙卵油多不饱和脂肪酸为无毒级物质、无急性毒性和致突变性,且安全性好.     

拟南芥表皮细胞发育关键调控因子GL2的原核表达及多克隆抗体制备

拟南芥HD-ZIP家族转录因子GLABRA2(GL2)是控制植物表皮毛、根毛分化和发育的关键调控因子。为了深入研究GL2调控植物表皮细胞分化发育的分子机制,对GL2蛋白进行了生物信息学分析,选择其保守性较低的C端区域(597~776 aa)作为抗原区,构建了pET28a/GL2原核表达系统。通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导获得了融合蛋白rGL2~(597~776),分子量约为19.6 ku。利用纯化得到的融合蛋白免疫家兔,获得了抗GL2的多克隆抗体,并利用抗原亲和纯化了GL2多克隆抗体。GL2多克隆抗体的制备及纯化为进一步通过染色体免疫共沉淀等方法筛选和鉴定其下游作用靶基因奠定了基础。     

野大黄散提取物的毒性分析

为探讨野大黄散提取物临床应用的安全性,以昆明小鼠为研究对象,进行急性毒性和亚慢性毒性试验。急性毒性试验测定野大黄散提取物的半数致死量(LD_(50))和最大耐受量(MTD);亚慢性毒性试验分别以2、10、20 g/kg 3种剂量的野大黄散提取物,连续对小鼠灌胃35 d,观察小鼠临床表现,计算脏器指数,检测血常规、血清生化、免疫学指标,观察脏器组织病理变化,综合判定野大黄散提取物的毒性。结果显示,急性毒性试验无法测定半数致死量,MTD≥120 g/kg。亚慢性毒性试验,与生理盐水对照组比较,野大黄散提取物10 g/kg和2 g/kg剂量组小鼠的淋巴细胞数、呼吸道与肠道sIgA分泌水平和血清IgG水平显著提高(P0.05),各给药组心脏、肝脏、脾脏、肾脏等脏器组织无明显病理变化。试验结果表明,野大黄散提取物属无毒物质,是安全性较高的中药制剂。