马铃薯抗旱相关表型效应分析与抗旱指标初探

以7个马铃薯品种为材料,大棚内采用随机裂区设计,进行干旱胁迫试验.把马铃薯各表型性状的抗旱系数作为评价各单项性状抗旱能力大小的指标,用主成分分析将各抗旱系数综合成4个新的相互独立的综合指标,再利用隶属函数求出综合指标的隶属值.通过各马铃薯品种的隶属值求出各品种抗旱性度量值,再评价各马铃薯品种的抗旱性.本实验的干旱处理水平下,7个马铃薯品种抗旱性顺序为:甲帮洋芋＞左力洋芋＞宁蒗152＞PI34＞永德紫皮＞宁蒗182＞马尔科,甲帮洋芋是较为抗旱的马铃薯品种.     

一种复合微生物菌剂在甜脆豌豆中的田间应用效果

为了探究复合微生物菌剂615在甜脆豌豆栽培中的田间应用效果,以甜脆豌豆品种‘长寿仁’为试材,研究了4种施肥处理（不施肥对照,单施复合菌剂615,单施化肥,化肥+复合菌剂615配施）对主要农艺性状、产量和品质、根际微生物数量的影响。结果表明：所有施肥处理可显著提高结荚率（幅度为7.90%~12.49%）,单施菌剂的病害率减少10.83%;所有施肥处理均可显著增加小区产量（幅度为10.75%~19.82%）,其中化肥与菌剂配施增幅最大(19.82%)。单施菌剂使鲜食籽粒的总糖、蛋白和淀粉含量增加50.00%、9.24%和59.37% (p<0.05),其开花结荚期根际中的细菌、真菌和放线菌数量是苗期的1.93倍、2.38倍和2.36倍,化肥与菌剂配施可提高总糖和淀粉含量(p<0.05)。综合经济和生态效益,甜脆豌豆施肥推荐化肥与复合菌剂615配施。     

云南元阳梯田水稻品种籼粳分化的SSR分析

利用经测验可区分籼粳品种的12对SSR特异引物对来自云南元阳不同海拔梯田的24个水稻样品进行了SSR分析.发现24个样品属于21个不同品种,其中现代育成品种6个,地方品种15个.现代育成品种中有1个籼稻品种,其余是偏籼品种,籼血缘占66.7%～83.3%,但都含有一定程度的粳血缘(16.7%～33.3%),说明这些现代育成品种是籼粳杂交的结果.地方品种中有1个籼稻品种,3个粳稻品种,其余都有不同程度的偏籼或偏粳,发现在海拔1750m以上的有9个(占37.5%)偏籼品种,籼血缘占66.7%～83.3%,这些偏籼品种可能是长期人工和自然选择的结果.     

黑籽南瓜中NBS类抗病基因同源序列的克隆与表达分析

黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)是云南特有的对病害有较强抗性的一种瓜类作物。为发掘利用其蕴含的优异抗病基因资源,本研究根据已克隆到的植物核苷酸结合位点(nucleotide binding site,NBS)类抗病基因的保守氨基酸结构域基因设计简并引物,通过PCR扩增从黑籽南瓜基因组中分离了8条黑籽南瓜抗病基因同源序列(resistance gene analogous,RGAs),聚类分析和相似性比较结果显示,黑籽南瓜抗病基因同源序列2(black seed squash resistance gene analogous 2,HQRGA2(Gen Bank No.:MG946756)单独为一类,且具有核苷酸结合衔接子(nucleotide-binding adaptor shared by APAF-1,R proteins and CED-4;NBARC)结构,其余7条序列均不具有NBS保守结构域。核苷酸相似性分析表明,HQRGA2与部分抗病基因序列的相似性达到87%~99%,其中与南瓜(Cucurbita maschata)NBS类抗病蛋白基因13(squash resistance gene analogous,SQRGA-13)和SQRGA-8的相似性分别达到98.0%和97.0%。对HQRGA2编码的氨基酸保守结构域分析表明,其含有NBS类抗病基因的4个保守模块:P-loop、Kinase-2、Kinase-3a和GLPL区,且属于无Toll蛋白或白介素1受体类似的NBS富亮氨酸重复(non toll/interleukin-1 receptor like of NBS plus leucine-rich region,non-TIR-NBS-LRR)类抗病基因同源序列。HQRGA2编码氨基酸的同源性分析结果表明,其与南瓜抗病蛋白基因SQRGA-13氨基酸同源性较高,达到96.6%,与其余抗病基因同源性在16.6%~43.8%之间,NBS区域氨基酸系统进化树分析结果表明,HQRGA2可能是一个新的抗病基因片段。q RTPCR分析表明,黑籽南瓜HQRGA2片段的表达受尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的胁迫诱导,表现出先扬后抑的表达模式,说明HQRGA2可能为抗病相关基因片段。黑籽南瓜中NBS类抗病基因同源序列HQRGA2的获得为分离克隆其完整抗病基因提供了新线索。     

雪花莲凝集素基因(GNA)植物表达载体的构建及其对烟草的遗传转化

将雪花莲凝集素基因(GNA)取代GUS基因正向插入到Ti质粒载体pBI121的35S启动子之下,构建成植物表达载体pBI121/GNA,并将其导入农杆菌LBA4404中.通过该农杆菌介导转化烟草红花大金元,得到卡那霉素抗性植株159株,PCR检测表明其中102株为阳性.对8株PCR阳性植株进行了抗蚜虫生物活性检测,抑制蚜虫密度为25%～90%.     

云南地方稻种抗稻瘟病基因Pi-d(t)的SSR检测及鉴定

用与稻瘟病抗性基因Pi-d(t)紧密连锁的SSR标记引物RM262对云南地方核心稻种中的167个水稻品种(系)的抗稻瘟病基因Pi-d(t)进行检测。PCR扩增产物通过8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果显示扩增产物存在明显的多态,可分辨出4种带型;扩增产物在4%琼脂糖凝胶上只表现2种带型。选取17个品种(系)于温室接种致病菌系ZB13进行鉴定,确定PCR扩增片段大小(主带)约140和145 bp的水稻品种(系)不含Pi-d(t)基因,而扩增产物大小(主带)约150和155 bp的水稻品种(系)含有Pi-d(t)基因。实验明确了Pi-d(t)基因在云南地方核心稻种及其籼粳亚种中的分布情况,可为抗病育种和稻瘟病的防治提供理论依据。     

云南马铃薯资源抗旱种质筛选

用多年收集和选育、引进的云南马铃薯30个品种,以在宣威推广种植面积较大的宣薯4号为对照品种,在宣威农业技术推广中心马铃薯品种展示园进行抗旱性、丰产性和稳产性评价鉴定,筛选适宜当地种植抗旱、丰产的马铃薯品种和育种材料。结果表明:结合根提拉力和产量作为评价旱作马铃薯抗旱种质资源和筛选马铃薯抗旱品种的主要技术指标,05-290、05-363、S03-3276、夏波蒂、05-287、04-016、05-188、宣薯5号、05-225、丽薯200202均高于对照,表现出显著抗性,是较为抗旱的品种。      

云南地方稻种Wx基因第一内含子供体+1位碱基变异与直链淀粉含量的关系

应用PCR一步法对来自云南省14个地州、55个市/县的220个籼、粳地方稻种Wx基因第一内含子供体+1位碱基G/T进行了检测,同时用PCR Acc I酶切法对其中的101份进行验证,结果表明两种方法检测结果一致。根据G/T碱基将220个供试材料分为GG、TT两种基因型。云南地方稻种以GG型占优势,有164个,占74.5%;TT型有56个,占255%;籼稻中80.5%属GG型,粳稻中67.0%属GG型。GG型直链淀粉含量较高,平均18.97%,TT型较低,均低于16%, GG、TT基因型之间的平均直链淀粉含量差异极显著。G/T与直链淀粉含量存在密切的联系,其相关系数为0733**。GG型品种中有33个直链淀粉含量较低（3.91%～15.93%）,多数为来源于云南西南部傣族地区的品种。籼稻中的GG型或TT型品种与粳稻中的GG型或TT型品种间平均直链淀粉含量无显著差异,表明GG/TT基因型在籼粳不同遗传背景下直链淀粉表达无显著差异。     

转溶菌酶基因水稻稻米毒理及致畸作用试验

通过小鼠急性毒性试验、大鼠长期毒性试验、小鼠微核试验和精子致畸试验对转溶菌酶基因水稻稻米的毒性及致畸作用进行了初步的评价.转基因大米淀粉灌胃小鼠,剂量相当于成人每日食用2 250 g,连续7 d观察,动物全部存活,表现正常,未见动物出现中毒反应,小鼠灌胃转基因大米的最大耐受量MTD≥37.5 g/kg.转基因大米粉分别以15 g/kg/d和7.5 g/kg/2个剂量,相当于成人日食用量900 g和450 g,连续94 d灌胃大鼠,灌胃期间动物的行为活动、外观体征、饮食、粪便、体重均无异常.5项血液学检查和13项生化指标检测及处死1/2的动物尸体解剖观察、脏器系数及脏器病理学检查,结果均属正常,与空白对照无显著差异;剩余1/2的动物留存观察2周,各项观察指标、血液、生化及病理检测也无异常.转基因大米粉以15 g/kg和7.5 g/kg 2个剂量分别灌胃小鼠,未发现对小鼠骨髓细胞微核和精子畸形发生率有不良影响.本试验结果提示携带溶菌酶基因、NPT-Ⅱ标记基因等外源DNA的转基因大米无明显的毒性和致畸作用.     

人工染色体载体系统的研究进展*

 酵母人工染色体(YACs),细菌人工染色体(BACs),噬菌体P1衍生的人工染色体(P1s),细菌人工染色体双元载体(BIBACs),具有转化能力的载体系统(TACs),哺乳动物人工染色体(MACs)和人工游离基因染色体(HAECs)等人工染色体载体系统,是近年来不断发展起来的DNA克隆载体系统。作为一种重要的分子生物学技术,人工染色体载体系统在生物基因组测序分析,基因的结构与功能,表达与调控,定位与分离以及遗传病的基因治疗等研究领域得到了广泛的应用。本文着重介绍细菌人工染色体载体系统(BACs)的结构,功能及发展应用情况,同时比较和介绍了YACs, PACs, PBCs, BIBACs, TACs, MACs和HAECs等人工染色体载体系统的特点。