葡萄采后病原菌种类及发病规律研究

对新疆主要葡萄产区，主栽葡萄品种进行采后病原菌调查表明：引起葡萄采后贮运与销售过程中腐烂的病原菌为真菌，包括（１）根霉（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ）（２）黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）（３）青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐｐ）（４）灰霉（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ｃｉｎｅｒｅａ）（５）交链孢霉（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｓｐｐ）（６）芽枝霉（Ｃｌａｄ　ｏｓｐｏｒｕｍ　ｓｐ）（７）匐柄霉（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｎｍ　ｓｐ）（８）葡萄球座菌（Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ　ｂｉｄｗｅｌｌｉｉ）（９）粉红聚端孢（Ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｕｅｍ　ｒｏｓｅｕｍ　）９个属的真菌。其中前７种为葡萄常见致腐病菌。根霉和黑曲霉多在葡萄常温运输和销售中致病，病程仅为１～２ｄ；青霉、灰霉、交链孢霉、芽枝霉和匐柄霉多在葡萄冷藏运输和低温贮藏中致腐。本试验还对新疆葡萄主产区吐鲁番、哈密、喀什等地的无核白、术纳格、喀什哈尔等葡萄品种分别进行了病原菌种类和发病规律研究，为从根本上解决新疆葡萄贮运保鲜难题提供了重要依据。     

鲜杏采后病原菌鉴定及室内药剂筛选研究

[目的]确定新疆杏采后病害的主要病原菌并筛选有效防治药剂.[方法]采集新疆伊犁、库车、喀什等地的李光杏、小白杏、色买提杏等鲜杏品种,在室温或4℃条件下贮藏,对贮藏期采后病害的病原菌进行分离鉴定,针对主要病原菌进行室内药剂筛选.[结果]引起新疆三种鲜杏采后果实病害的病原菌有:粉红聚端孢霉(Trichothecium roseum)、链格孢霉(Alternaria alternata)、黑根霉(Rhizopus nigricans)、青霉(Penicillium freguentans)、灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea)、毛霉(Mucor spp.)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、镰刀菌(Fusarium oxysporum)、黑曲霉(Aspergillus spp.)等9种真菌,其中黑根霉、灰葡萄孢霉、链格孢霉、青霉和粉红聚端孢霉为主要病原菌.精油A1000倍液对所有供试病原菌都有很强的抑菌效果,其对青霉、灰葡萄孢霉、链格孢霉、黑根霉、毛霉、镰刀菌的抑菌率均为100;,对黑曲霉的抑菌率也达97.87;.4℃贮藏条件下,精油A 500倍液和1 000倍液处理的鲜杏贮藏25 d时,杏果实发病率分别为0;、1.67;,贮藏32 d后,精油A 500倍液和1 000倍液处理的鲜杏发病率分别为10;、20;,精油A 500倍液和1 000倍液处理可显著延长4℃条件下鲜杏的贮藏时间.[结论]黑根霉、灰葡萄孢霉、链格孢霉、青霉和粉红聚端孢霉为新疆鲜杏采后贮期主要病原菌,精油A可作为鲜杏采后病害的有效防治药剂.     

厚皮甜瓜郁金香采后腐烂病害的病原分离鉴定

通过对兰州市场上厚皮甜瓜郁金香采后腐烂病病原的分离纯化,以培养性状、显微计测结果鉴定,确认为粉红聚端孢霉(Cephalothecium roseum),黑曲霉(Aspergillus niger),镰刀菌(Fusarium sp.),青霉(Penicillium sp.)4种真菌。经过室内回接实验,镰刀菌、粉红聚端孢霉有致病作用,是甜瓜郁金香采后腐烂病的寄生性病原菌,而黑曲霉、青霉无致病作用,是甜瓜郁金香采后腐烂病的腐生性病原菌。这是国内关于该病的系统研究的首次报道。     

果蔬采后致腐病菌检测及防治

引起果蔬采后腐烂的病原菌主要分属于葡萄孢属（Botrytis）、曲霉属（Aspergillus）、青霉属（Penicillium）、根霉属（Rhizopus）和链格孢属（Alternaria）.其中A.sp.和R.sp.是果蔬常温运输过程中的主要致腐菌,B.sp.、A.sp.和P.sp.是果蔬低温贮运条件下的主要致腐菌.采用仲丁胺和二氧化氯2种药剂对采后蔬菜进行熏蒸和浸泡保鲜处理.结果表明：低温与保鲜剂处理相结合,可明显提高果蔬采后运输及货架期9～11d.     

木纳格葡萄采后附生微生物区系分析及优势致病菌的确定

以新疆阿瓦提县木纳格葡萄为试材,对木纳格葡萄果穗附生微生物区系及优势致病菌的确立进行分析研究。结果表明：成熟期的木纳格葡萄果穗附生微生物数量是酵母菌〉丝状真菌〉细菌。从木纳格葡萄果穗上分离出丝状真菌5个属,分别是：灰霉（Botrytis sp.）、链格孢（Alternaria sp.）、根霉（Rhizopus sp.）、黑曲霉（Aspergillus sp.）和青霉（Penicillium sp.）,其中Botrytis sp.、Alternaria sp.为低温优势致病菌,Aspergillus sp.和Rhizopus sp.为常温优势致病菌,主要通过伤口入侵导致发病。Botrytis sp.、Alternaria sp、Aspergillus sp为果梗主要致病菌。     

不同种类杀菌剂对6种葡萄致腐病菌的室内毒力测定

为研究不同种类杀菌剂对葡萄致腐病菌的室内抑菌活性,采用菌丝生长速率法,测定了18种生产中常用的杀菌剂对6种葡萄致腐病菌的室内毒力,以筛选出适合防治葡萄致腐病菌的杀菌剂.结果表明,18种杀菌剂对病原菌均具有一定的毒力,不同病原菌对杀菌剂的敏感性存在差异.己唑醇、氟硅唑、烯唑醇的抑菌能力较强,其EC50分别介于0.042～4.11、0.068～19.82、0.20～11.46 mg/L.多菌灵对灰霉菌、镰刀菌、交链格孢霉的抑菌活性较低,EC50均大于700 mg/L,代森锰锌对炭疽病菌的抑菌活性较低,EC50为1621.06 mg/L.不同种类杀菌剂对6种病原菌的毒力为白腐病菌>溃疡病菌>交链格孢霉>灰霉病菌>炭疽病菌>镰刀菌.研究结果可为防治葡萄果实腐烂药剂的田间应用提供理论支持.     

一株蓝麻黄拮抗内生真菌的分离鉴定及代谢物的初步分析

[目的]分离获得对农作物致病菌有高效拮抗作用的植物内生菌,并对其进行系统鉴定和代谢成分分析.[方法]用研磨法从蓝麻黄中分离内生真菌,并用琼脂扩散法筛选具有抗农作物致病菌活性的内生真菌;利用菌株形态特征和ITS-5.8S rDNA序列分析进行拮抗菌鉴定,经酚硫酸法测定多糖含量.[结果]从蓝麻黄中分离得到5株内生真菌,其中XJEG-GF-79对葡萄白腐病菌的抑菌圈直径为23 mm.经形态学观察和分子分类学分析鉴定,内生拮抗真菌XJEG-GF-79与Pleosporaceae sp. SN-2008同源性达到100;,该菌株代谢产物中含有生物碱和多糖,其经测定,发酵液中多糖含量为1.914 mg/mL.[结论]蓝麻黄内生真菌XJEG-GF-79对葡萄白腐病菌有明显的拮抗作用,最终鉴定为链格孢霉 Pleosporaceae sp..     

新疆哈密瓜采后主要致腐病原真菌的分离与鉴定

通过对新疆哈密瓜采后贮藏中发病的果实进行病原真菌的分离,以及对冷藏中健康的果实进行潜伏侵染的真菌进行分离,鉴定后确定新疆哈密瓜采后主要致腐病原真菌为:根霉属(Rhizopus);镰孢属(Fusarium);链格孢属(Alternaria);青霉属(Penicillium)。     

蓝莓采后病害病原菌分离鉴定及其拮抗菌筛选

从西南林业大学大棚蓝莓种植基地内采集样本,并从采后腐烂果实中分离出8株真菌,成功鉴定出2株为青霉菌(Penicillium digitatum)和枝孢菌(Cladosporium tenuiussimum).从健康蓝莓果实、叶片和根际土壤中共分离到17株细菌,根据16S rRNA序列同源性,分别归入9个细菌属.通过检测其对蓝莓果腐病病原真菌的抑制活性,筛选出达到显著差异的拮抗细菌5株,其中3株为芽孢杆菌,2株为短芽孢杆菌;5株拮抗细菌对P.digitatum的抑菌率为67.6%～90.6%,其中3株拮抗细菌对C.tenuiussimum的抑菌率达90.7%～92.6%.菌株BS-3对P.digitatum和C.tenuiussimum的抑菌效果均在90%以上,有潜在生防利用价值.     

壳寡糖对杏果实采后主要病原菌抑菌作用的研究

[目的]研究壳寡糖对引起杏果实采后病害主要病原真菌抑菌作用的影响因素.[方法]将供试菌种扩展青霉(Penicillium expansum)、胶孢链格孢(Alternaria alternata)和匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)活化培养后接种到含有壳寡糖的PDA培养基上,观察不同分子量及不同浓度的壳寡糖对不同病原菌菌落生长的影响.[结果]壳寡糖对3种供试菌均有较好的抑制作用.不同分子量的壳寡糖抑菌效果不同,分子量5000和10000壳寡糖的抑菌率显著高于分子量3 000的壳寡糖.在供试壳寡糖浓度中,处理效果表现为剂量依赖关系,三种分子量的壳寡糖均以2.0;浓度对三种供试菌的抑菌效果最好.不同病原菌对壳寡糖的敏感性不同,供试壳寡糖对胶孢链格孢(A.alternata)和匍枝根霉(R.stolonifer)的抑制率明显高于扩展青霉(P.expansu).[结论]不同分子量的壳寡糖对病原菌的菌落生长均有较好的抑制作用,抑制作用的大小因壳寡糖分子量、浓度、病原菌的不同而有差异.     

黑曲霉拮抗菌Xenorhabdus bovienii445筛选、鉴定及发酵优化

【目的】从现有共生细菌资源中筛选对黑曲霉具有高拮抗作用的菌株,为寻求安全高效的生物保鲜材料提供更多选择。【方法】采用平板对峙法和琼脂扩散法,分别对现有昆虫病原线虫共生菌进行初筛和复筛,对筛选出的高效拮抗共生细菌进行生理生化以及16S rRNA 序列进化分析鉴定,通过单因素试验和响应面分析法优化菌株培养条件,利用损伤接种法在红地球葡萄上验证对黑曲霉防治效果。【结果】分离筛选共获得20株拮抗共生菌,复筛得到1株抑菌效果显著的共生细菌(445),经生理生化及分子生物学分析为伯氏致病杆菌Xenorhabdus bovienii,GeneBank ID:OK560680,与菌株Xenorhabdus bovienii strain Xb139 (MG995576.1)聚于同一分支,相似性达99.79%。获得445菌株抑菌活性的最优培养条件为接种量3.06 %、pH 7.0、装液量100.15 mL/250 mL,抑菌圈直径为(29.67±0.28) mm,抑菌效价为10.59 cm/mL,比优化前提高39.16%。Xenorhabdus bovienii 445发酵液对黑曲霉具有较好防治效果,3 d后防效为63.50%。【结论】筛选得到1株高效拮抗黑曲霉的昆虫病原线虫共生细菌,其发酵液对黑曲霉有良好的抑制效果,具有较好的生防潜能。     

提高无核葡萄胚挽救中幼胚成苗率的研究

 【目的】提高无核葡萄胚挽救中幼胚的成苗率。【方法】以7个杂交组合的胚珠为试材,研究不同基因型、不同胚珠发育培养基、添加不同氨基酸及低温处理采后幼果对无核葡萄胚成苗率的影响。【结果】在无核葡萄胚离体发育中,母本和父本对胚的成苗均有影响;在二倍体无核葡萄作母本的杂交组合中,以二倍体无核葡萄作父本比以四倍体有核葡萄作父本更有利于胚的成苗。在3种不同配方的培养基中,适宜于无核葡萄离体幼胚发育和成苗的培养基是MM4。ER添加4 mmol?L-1脯氨酸培养基最有利于无核葡萄胚的发育。低温处理3 d对红宝石无核×森田尼无核和红宝石无核×黑奥林胚的成苗促进最大。【结论】无核葡萄胚挽救的适宜培养基是ER+4 mmol?L-1脯氨酸或MM4培养基,低温处理幼果3 d能有效提高二倍体无核葡萄×二倍体无核葡萄胚挽救中胚的成苗率。     

一株辣椒青枯病菌拮抗内生细菌的筛选鉴定与发酵条件优化

【目的】筛选对辣椒青枯病菌生防效果较好的内生细菌,丰富辣椒青枯病的生物防治菌种资源,为生防制剂的研发生产及进行大田生物防治提供理论依据。【方法】在湖南长沙青枯病发病区采集健康的辣椒植株样品,通过平板稀释分离和划线纯化方法获得内生细菌后采用琼脂扩散法进行拮抗作用测定,筛选出拮抗青枯病菌效果较好的内生细菌,然后通过菌体的形态结构观察、生理生化特性试验及16S r DNA序列同源性分析,对筛选出的细菌进行鉴定,采用正交试验对其发酵条件进行优化试验。【结果】筛选出一株对青枯病菌拮抗作用效果好的内生细菌L009,通过对其形态学、生理生化特性鉴定和16S r DNA序列的系统发育鉴定,该菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。通过正交试验,确定该菌株的最佳发酵条件为：玉米淀粉8%、豆饼粉6%、Na Cl 0.5%、Ca CO30.5%、K2HPO40.08%、p H 7.0、72h、28℃、180 r/min转速。【结论】L009菌株对辣椒青枯病菌具有较好的拮抗作用,具有作为生防制剂的潜力。     

厂形叶幕赤霞珠葡萄果实苹果酸的代谢规律

[目的]研究厂形叶幕形赤霞珠葡萄果实苹果酸的积累代谢规律,为葡萄有机酸代谢调控的研究提供理论依据.[方法]在厂形树形的基础上,设置对照直立形叶幕及2种高度的厂形叶幕,检测赤霞珠果实成熟过程苹果酸等有机酸的变化及苹果酸代谢相关酶的活性变化.[结果]厂形叶幕与直立形叶幕相比,降低了果域环境温度0.8℃与1.5℃.厂形叶幕在...     

紫花苜蓿根腐病生防菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

【目的】筛选获得对紫花苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株,并对其发酵条件进行优化,为紫花苜蓿根腐病生物防治提供菌株资源。【方法】以青藏高原的紫花苜蓿根际土壤为研究对象,以紫花苜蓿根腐病5种病原菌为靶标,利用稀释涂布法分离细菌;利用平板对峙法筛选对苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株;利用平板对峙法和菌丝生长速率法测定拮抗菌株对5种苜蓿根腐病病原菌的抑菌活性;通过形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析确定拮抗菌株的分类地位;利用单因素试验和正交试验对拮抗菌株发酵条件进行优化。【结果】从紫花苜蓿根际土壤中共分离纯化出92株细菌,从中筛选出16株对供试病原菌具有较强拮抗作用的菌株,其中菌株LJ3-1的抑菌效果最强,且具有广谱抑菌活性。对菌株LJ3-1发酵滤液的抑菌活性测定结果显示,其发酵滤液对供试病原菌的抑制率为44.9%~77.4%。结合菌落形态特征、生理生化测定和16S rDNA序列分析结果,将菌株LJ3-1鉴定为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。对菌株LJ3-1的发酵条件优化结果显示,其最适发酵培养基组分为3%葡萄糖、 1%酵母浸粉和0.5% NaCl;最适发酵条件为初始pH 6.5~7.0、培养温度35 ℃、 250 mL锥形瓶装液量80 mL、接种量3%、培养时间36 h、转速180 r/min。在优化后的发酵培养条件下,菌株LJ3-1对燕麦镰刀菌 （Fusarium avenaceum）的抑菌活性由76.5%提高至89.3%。【结论】菌株LJ3-1对紫花苜蓿根腐病5种病原菌均具有良好的拮抗作用,可作为研制苜蓿根腐病生物防治菌剂的候选菌株。     

不同采收期对新疆焉耆盆地酿酒葡萄及葡萄酒品质的影响

【目的】研究不同采收期对新疆焉耆盆地酿酒葡萄及葡萄酒的影响,为确定酿酒葡萄最佳采收期提供依据。【方法】以葡萄转色期后、不同采收时段的5种红色酿酒葡萄果实和葡萄酒为研究对象,测定果实品质和葡萄酒理化指标,分析不同指标和葡萄最佳采收期之间的关系。【结果】果实品质:梅鹿辄和赤霞珠果实的纵径、横径以及单果重随着采收日期的推移总体均呈现先逐渐增大后减小的趋势,而黑比诺、北玫和北红果实的纵径、横径以及单果重随着采收日期的推移逐渐增大。葡萄果实pH、可溶性固形物含量、固酸比和糖酸比都呈逐渐增大趋势。可溶性固形物从高到低为梅鹿辄＞北红＞北玫＞赤霞珠＞黑比诺。酿造品质:各品种的pH和酒精度随着采收日期的推移,呈现缓慢上升的趋势;酿制的酒样中,黑比诺的总糖含量最高为5.48 g/L,赤霞珠的总糖含量最低为3.71 g/L,均符合GB/T15037-2006葡萄酒分类标准。【结论】在新疆焉耆盆地地区梅鹿辄和赤霞珠的最佳采收期在8月25日,黑比诺、北玫和北红的最佳采收期在8月28日。     

木纳格葡萄种子发育过程中生理生化指标变化特性

【目的】分析与白木纳格葡萄败育相关的生理生化指标。【方法】以红木纳格葡萄种子、白木纳格葡萄正常发育种子和败育种子作为研究对象,研究2种葡萄的果实及种子生长发育过程中的大小外观指标、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、MDA含量、POD活性、SOD活性及CAT活性6种生理指标,研究白木纳格葡萄种子败育的时期及相关影响因子。【结果】白木纳格葡萄的种子败育表现在43d前已经出现,可溶性蛋白含量与种子败育呈显著负相关,可溶性糖含量、MDA含量、POD活性、SOD活性及CAT活性与种子败育相关性未达到显著水平。【结论】白木纳格葡萄种子的败育时期在盛花后37～43 d,可溶性蛋白含量是影响木纳格葡萄种子发育的主要理化指标。     

与桃树再植病相关的根际微生物的分离鉴定及相互作用

 【目的】研究桃树再植病与根际微生物的关系。【方法】以Mфller氰化钾培养基为选择培养基进行桃根际微生物的筛选,采用16S rDNA 序列分析并结合生物学特性对所获菌株进行鉴定,并通过温室盆栽试验对所获拮抗菌的生防效果进行初步观察。【结果】从桃根际土壤中分离筛选出3株能以扁桃苷为碳源产生氢化氰（HCN）的细菌（CN-X4、CN-X9、CN-X17）和3株分别能对上述细菌有不同抑制作用的放线菌（CN-G2、CN-G3、CN-G5）。鉴定结果表明菌株CN-X4、CN-X17均为农杆菌属中的根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）,但分属不同的变种;菌株CN-X9为假单胞杆菌（Pseudomonas sp.）,菌株CN-G2和CN-G5分别为细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）、淡紫灰链霉菌（Streptomyces lavendulae）,菌株CN-G3可能是灰色链霉菌(Streptomyces griseus)的近缘种;拮抗菌盆栽生防效果显著。【结论】桃根际不仅存在能以扁桃苷为碳源并产生HCN的细菌而且同时存在与其相拮抗的耐氰放线菌,根际微生物区系平衡的破坏是导致再植病的关键因素之一。     

葡萄果实发育过程中糖酸含量的动态变化

【目的】研究葡萄果实发育过程中糖酸含量的动态变化。【方法】以我国东北地区栽培的8个葡萄品种为试材,应用高效液相色谱法(HPLC)测定葡萄果实不同发育阶段的糖酸组分及含量变化。【结果】供试8个葡萄品种成熟果实中总糖平均含量为182.74 mg/g FW, 其中北冰红含量最高(236.82 mg/g FW),红地球最低(139.82 mg/g FW)。葡萄糖和果糖是为主要的可溶性糖,含量约为1.1∶1,均随果实发育逐渐积累;供试品种有机酸平均含量7.64 mg/g FW,以酒石酸和苹果酸为主,占总酸含量87.79%以上, 其中双红含量最高(12.69 mg/g FW),维多利亚含量最低(3.96 mg/g FW)。欧美杂交种藤稔、高妻以苹果酸为主要有机酸(分别占总酸含量52.60%、53.77%),其余6个品种以酒石酸为主(占比47.39%~66.16%)。【结论】葡萄果实中可溶性糖以葡萄糖和果糖为主,总糖含量随着果实发育呈上升趋势;有机酸以酒石酸和苹果酸为主,总酸含量呈先升后降的趋势。各品种果实进入糖分快速积累、有机酸迅速分解阶段的先后与其生育期的长短存在对应关系,而糖分快速积累及有机酸快速分解所需时间长短与各品种生长发育周期的长短并无正比例对应关系。     

广西北部湾入侵植物互花米草内生可培养细菌多样性及促生防病活性分析

【目的】探究不同入侵程度互花米草（Spartina alterniflora）根、茎和叶内生可培养细菌的多样性,并分析其对植物的防病促生活性,为互花米草入侵研究提供新思路,同时为后续的农业应用提供菌种资源。【方法】以不同入侵程度的互花米草为研究对象,采用6种选择培养基,通过稀释涂布法分离内生细菌;利用16S rRNA序列相似性及构建系统发育进化树确定内生细菌的分类地位。通过平板对峙法检测内生细菌拮抗香蕉枯萎病病原菌活性;通过功能培养基分析内生细菌产吲哚乙酸（IAA）、溶磷和固氮等促生活性。【结果】从互花米草的根、茎和叶中共分离出269株内生细菌,根据菌落形态和培养特征去重复后获得82株细菌;对内生细菌进行16S rRNA测序及比对分析,82株细菌分属于6纲16目19科31属,其中包括固氮细菌21株（占25.61%）、产IAA细菌21株（占25.61%）、溶磷菌11株（占13.41%）,可拮抗香蕉枯萎病病原菌14株（占17.07%）,并发现潜在新种13株（占15.85%）。互花米草入侵程度不同,内生细菌多样性也发生变化,随着入侵程度的增加,γ变形菌占据优势,而放线菌和芽孢杆菌多样性增加。【结论】互花米草内生细菌具有丰富的多样性,且多具有促生活性和生防功能,在未来农业生产中具有潜在应用价值。