鲑鱼降钙基因向烟草遗传转化的初步研究

报道了鲑鱼降钙素基因植物表达载体的构建及其向烟草的遗传转化。由鲑鱼降钙素的链霉菌表达载体 p MS6 80 ,通过限制性内切酶 Bam H 和 H ind 双酶切后将其克隆至中间载体 p ART7,获得中间表达载体p ART7- s CT,从而给目的基因加上启动子和终止子 ,将限制性内切酶 N ot1酶切 p ART7- s CT得到的带有启动子和终止子的目的基因片段克隆至载体 p ART2 7,得到鲑鱼降钙素基因的植物表达载体 p ART2 7- s CT。通过农杆菌介导的叶盘法将其转至烟草 ,经 PCR检测已得到转基因植株。     

开发一种预防和治疗骨质疏松症的功能性生菜

骨质疏松症严重威胁着人类的健康,鲑鱼降钙素是一种治疗骨质疏松的有效药,但是昂贵的价格限制了它的使用。本研究以生菜作为生物反应器来表达降钙素中生物活性较高的鲑鱼降钙素,以期通过鲜食表达降钙素的生菜达到防止或治疗骨质疏松目的,同时可大大降低生产成本。首先按植物偏爱密码子设计合成了编码鲑鱼降钙素的msCT基因,其次考虑到转基因产品安全性问题,构建植物双元表达载体p35S-2300-twinT—DNA：：pil—msCT：：noster,利用农杆菌介导进行生菜转化。经PCR和Southem blot确认得到了12株独立的转基因植株。同时RT-PCR分析表明鲑鱼降钙素在To代转基因植株中成功表达,而且表达量存在显著差异,为利用植物生物反应器生产治疗用降钙素奠定了基础。     

一种新型降钙素基因相关肽基因转化番茄的研究

按植物偏爱密码子设计合成一种新型降钙素基因相关肽基因(mcgrp),构建植物双元表达载体p35S-2300:: mcgrp::noster,通过农杆菌介导法转化番茄,获得卡那霉素抗性植株27株;经PCR和Southern blot检测有2株为独立的转基因阳性苗,阳性率为7．4%;通过RT-PCR检测,证实外源基因mcgrp在转基因番茄中成功表达(转录水平)。该研究为进一步利用植物系统表达降钙素基因相关肽研究做必要准备。     

鲑鱼降钙素基因向烟草遗传转化的初步研究

报道了鲑鱼降钙素基因植物表达载体的构建及其向烟草的遗传转化.由鲑鱼降钙素的链霉菌表达载体pMS680,通过限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将其克隆至中间载体pART7,获得中间表达载体pART7-sCT,从而给目的基因加上启动子和终止子,将限制性内切酶Not1酶切pART7-sCT得到的带有启动子和终止子的目的基因片段克隆至载体pART27,得到鲑鱼降钙素基因的植物表达载体pART27-sCT.通过农杆菌介导的叶盘法将其转至烟草,经PCR检测已得到转基因植株.     

烟草orf25基因植物表达载体的构建及遗传转化

为更好地研究烟草雄性不育的机理,构建orf25基因的植物表达载体。orf25基因是ATP合成酶F(0)部分的4个亚基因之一。以雄性不育烟草MS革新3号为受体材料,利用组成型启动子Ca MV35S构建orf25基因植物表达载体,将表达载体p BI121-orf25导入根癌农杆菌LBA4404。采用根癌农杆菌介导orf25基因遗传转化MS革新3号,结果证明载体上的目的基因orf25已整合到烟草基因组中,并获得了52株转p BI121-Ca MV35Sorf25基因烟草植株,经PCR鉴定,转基因阳性植株有14株,转化率为26.9%。为下一步研究该基因的功能及其与烟草雄性不育性的关系提供依据。     

用烟草生产基因工程药物的研究进展

以植物为生物反应器生产基因工程药物具有广阔的前景，其主要研究途径有两方面。一是利用转基因植物表达外源基因生产基因工程药物；二是以病毒为栽体插入外源基因在宿主植物中表达基因生产基因工程药物。以烟草花叶病毒(TMV)作为载体，用烟草生产基因工程药物是当前生物技术研究开发的热点；目前已成功地利用烟草作为生物反应器生产出许多基因工程药物和细胞因子。本文综述了这方面的技术途径和最新研究进展。     

转H5禽流感病毒M2e基因烟草的研究

将禽流感病毒M2e与鸡IgG Fc的融合基因转入烟草植株,利用烟草生产禽流感抗原蛋白,探索利用植物作为生物反应器生产禽流感疫苗的可行性。将M2e-Fc融合基因克隆到植物表达载体pBI121中,与CaMV35s启动子相连,以烟草子叶作为外植体,利用农杆菌介导法将外源基因转入烟草中。对抗性植株进行了PCR、RT-PCR分析。结果表明,M2e基因已经导入到烟草中,在转录水平得到了表达。为进一步利用转基因植物生产禽流感疫苗进行了前期的探索工作。     

水稻Rubisco激酶基因叶绿体转运肽增强转基因表达

将水稻RCA基因N端预测的转运肽(TP)序列融合报告基因GFP,构建瞬时表达载体pGD-RCATP-GFP,转化农杆菌后,注射侵染烟草叶片,通过荧光显微镜观察瞬时表达情况,结果表明外源蛋白GFP定位在叶绿体上,依此预测水稻RCA基因N端48aa为叶绿体转运肽。将该序列与报告基因GUS融合,构建植物表达载体p1300-RCATP-AGS,转化水稻后,检测阳性株叶片的GUS酶活,其GUS蛋白表达效率是未连有叶绿体转运肽的转基因植物的4.2倍左右。     

水曲柳FmSOC1基因烟草中遗传转化

为研究水曲柳SOC1基因对植物开花的调控功能,将水曲柳SOC1基因通过农杆菌介导法转入模式植物烟草中。利用PCR及Southern杂交法检测,结果有10株被确定为转基因植株。利用RT-PCR法对5株转基因烟草进一步分析表明,SOC1基因在3株烟草中表达。表型分析表明,转基因烟草植株生长较快,叶片窄小,开花时间提前。     

CaKR1上游启动子分离及其表达分析

运用基因组步移技术分离获得了CaKR1基因上游-1594 bp的启动子序列,命名为CaKR1p,发现其中含有SA、ABA、低温等信号应答原件以及其它诸如W盒等应答逆境胁迫的调控原件。进一步构建CaKR1p与GUS报告基因融合的植物表达载体,获得了烟草转基因植株及其相应的T1代株系,利用T1代转基因株系分析了CaKR1p在几种外源激素处理下的GUS基因的表达,结果表明外源激素SA、JA和ABA的诱导处理均可激活该启动子下游报告基因GUS的表达,说明CaKR1的表达和作用受到SA、ABA以及JA等信号通路调节。