几种微量提取盐芥DNA方法的比较

[目的]探讨一种提取盐芥高质量DNA的方法。[方法]分别采用简化SDS法、改良CTAB法、CTAB法和改良尿素法提取盐芥DNA,测定不同方法所提取DNA的纯度和浓度,并进行电泳和酶切检测,并对其结果进行比较。[结果]改良CTAB法提取的DNA纯度高、质量好,没有糖类、酚类及蛋白质的污染,能用于PCR扩增和限制性内切酶酶切。CTAB法提取的DNA没有蛋白质的污染,但有酚类物质的污染,可作为PCR扩增的模板。SDS法以及尿素法提取的DNA质量较差,不能满足分子生物学研究的要求。[结论]改良CTAB法比其他方法更适合分子生物学分析和研究。     

中华补血草Syntaxin基因的克隆(英文)

[目的]对中华补血草Syntaxin基因进行克隆。[方法]以中华补血草叶片为材料,提取总RNA并进行反转录反应。依据已知Syntaxin基因5’端EST序列信息设计巢式引物,以反转录得到的cDNA为模板,利用2轮PCR扩增cDNA3’末端(3’RACE),获得Syntaxin基因3’端序列。[结果]获得1090bp的DNA片段。分析表明,该片段编码LsSyntaxin全长基因,其中开放阅读框长816bp,编码271个氨基酸。该基因编码的Syntaxin蛋白相对分子量为30254.3Da,理论等电点为5.55。[结论]为研究Syntaxin基因在补血草中的功能及其在补血草泌盐过程的作用奠定了基础。     

鲑鱼降钙素基因向烟草遗传转化的初步研究

报道了鲑鱼降钙素基因植物表达载体的构建及其向烟草的遗传转化.由鲑鱼降钙素的链霉菌表达载体pMS680,通过限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将其克隆至中间载体pART7,获得中间表达载体pART7-sCT,从而给目的基因加上启动子和终止子,将限制性内切酶Not1酶切pART7-sCT得到的带有启动子和终止子的目的基因片段克隆至载体pART27,得到鲑鱼降钙素基因的植物表达载体pART27-sCT.通过农杆菌介导的叶盘法将其转至烟草,经PCR检测已得到转基因植株.     

玉米成熟子粒RNA提取方法的改良与优化

玉米成熟子粒含有较多的多糖、蛋白质和脂类,传统的RNA提取方法难以提取到高质量的RNA。以授粉后28 d灌浆后期的玉米子粒为试材,以授粉后7 d的玉米子粒为对照,对目前国内外常用的Trizol法、Biozol法、RNAiso Plus法、三种硅胶柱商业试剂盒总RNA提取方法以及本研究建立的改良提取方法进行比较。结果表明,以授粉后7 d的玉米子粒为材料时,各种方法都能获得较好提取效果;以灌浆后期接近成熟玉米子粒为试材时,采用本研究改良或新建立的提取法,可以大幅降低提取成本,快速提取高质量和高得率的RNA。     

NaCl胁迫对中华补血草活性氧清除能力的影响

[目的]探讨NaCl胁迫对中华补血草活性氧清除能力的影响。[方法]用500 mmol/L NaCl对中华补血草进行处理,分别测定叶片渗透势,MDA含量以及过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。[结果]MDA含量能维持较低水平,但在处理5 d时达到最高点,而3种抗氧化酶活性呈先升高后下降的趋势,在处理的第5天降至最低,与MDA含量测定结果一致。[结论]补血草在短时间NaCl处理时能依靠抗氧化酶系统及时清除活性氧,减少氧化损伤,维持生长。     

不同品系小麦分蘖期TaSPL17基因表达分析

[目的]探究9个品系小麦分蘖相关基因TaSPL17基因表达与单株分蘖力强弱的关系。[方法]通过实时荧光定量PCR技术,从基因表达水平角度,分析9个品系小麦分蘖期茎基部组织TaSPL17基因相对表达量与不同品系小麦分蘖力强弱的关系。[结果]不同品系小麦分蘖期茎基部组织TaSPL17基因表达存在显著差异,单株分蘖力较强的多穗型品系烟农19、瑞丰1号、Bonito-32,TaSPL17基因表达处于相对较低水平;分蘖力中等的中大穗型品系济麦22、石优17、衡06-6632、济宁936098,TaSPL17基因表达处于相对中等水平;分蘖数较少的大穗型品系兰考906、泰山021,TaSPL17基因表达处于相对较高水平,TaSPL17基因对小麦单株分蘖力具有调控作用。[结论]为研究小麦分蘖力强弱能力提供了基因表达水平上的理论依据,为选育理想株型提供了理论基础。     

鲑鱼降钙基因向烟草遗传转化的初步研究

报道了鲑鱼降钙素基因植物表达载体的构建及其向烟草的遗传转化。由鲑鱼降钙素的链霉菌表达载体 p MS6 80 ,通过限制性内切酶 Bam H 和 H ind 双酶切后将其克隆至中间载体 p ART7,获得中间表达载体p ART7- s CT,从而给目的基因加上启动子和终止子 ,将限制性内切酶 N ot1酶切 p ART7- s CT得到的带有启动子和终止子的目的基因片段克隆至载体 p ART2 7,得到鲑鱼降钙素基因的植物表达载体 p ART2 7- s CT。通过农杆菌介导的叶盘法将其转至烟草 ,经 PCR检测已得到转基因植株。     

不同盐浓度处理对互花米草生长及离子含量的影响

测定梯度NaCl（200、400、600、800 mmol/L）处理对互花米草生长及Na＋、K＋、Ca2＋、Cl-等离子含量的影响。结果表明,200 mmol/LNaCl处理互花米草的植株干重、鲜重、含水量和干鲜比最大;随NaCl处理浓度的升高,互花米草Na＋、K＋、Ca2＋含量均呈先上升后下降趋势,而Cl-含量显著升高。     

芹菜不同器官、品种CELⅠ核酸酶提取的比较

随着TILLING技术的发展,发挥关键作用的芹菜CELⅠ核酸酶也得到了越来越广泛的应用。鉴于其活性直接影响突变体检测的效果,而芹菜粗提物中CELⅠ核酸酶的含量和活性因提取组织及提取程序不同而有较大变化,所以本研究分析了芹菜不同器官、品种等因素对CELⅠ核酸酶粗提物提取量的影响,并用只含有1个碱基差异的2个目的DNA片段形成的杂交链为底物对其活性进行了鉴定。结果表明:芹菜不同器官和品种间的CELⅠ核酸酶提取量存在较大差异。不同器官的榨汁率和提取量,以茎的出汁率最高,而叶片中的提取量显著高于根和茎中的提取量;在本研究所用的3个品种中,以山东地方品种马家沟芹的提取量最高,山芹次之,西芹的提取量最低;CELⅠ核酸酶的活性鉴定表明,CELⅠ核酸酶粗提物能有效切割DNA双链中的错配碱基。     

中华补血草Syntaxin基因的克隆

[目的]对中华补血草Syntaxin基因进行克隆。[方法]以中华补血草叶片为材料,提取总RNA并进行反转录反应。依据已知Syntaxin基因5'端EST序列信息设计巢式引物,以反转录得到的cDNA为模板,利用2轮PCR扩增cDNA3'末端(3'RACE),获得Syntaxin基因3'端序列。[结果]获得1090bp的DNA片段。分析表明,该片段编码LsSyntaxin全长基因,其中开放阅读框长816bp,编码271个氨基酸。该基因编码的Syntaxin蛋白相对分子量为30254.3Da,理论等电点为5.55。[结论]为研究Syntaxin基因在补血草中的功能及其在补血草泌盐过程的作用奠定了基础。