一起罗氏沼虾镰刀菌病的诊断

南宁市郊某一虾苗场的罗氏沼虾亲虾，发生一种以鳃瓣呈暗褐色，外壳和附肢呈现黑褐色斑点溃疡为主要特征的疾病，通过对发病情况调查、临床症状观察、病原分离培养、真菌学检查以分离回归虾体试验等，证实是由于镰刀菌感染所致。该菌对孔雀石绿和三氯异氰尿酸敏感，分别用１００ｐｐｍｍ和１０ｐｐｍ浓度在２小时内可杀灭其分子孢子。     

罗氏沼虾诺达病毒TAS-ELISA检测法的建立及应用研究

罗氏沼虾肌肉白浊病(Whitish muscle diseases of Macrobrachium rosenbergii)是近年来流行于罗氏沼虾苗种阶段的严重疾病,该病病原已确定为罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV).作者在病毒超离提纯的基础上,制备了罗氏沼虾诺达病毒兔抗血清,并应用抗罗氏沼虾诺达病毒单克隆抗体2B5,建立了三抗体夹心酶联免疫检测方法(TAS-ELISA).TAS-ELISA最适反应条件为:兔抗体以1μg/mL包板,小鼠单抗2B5的工作浓度为1:50000,该法检测MrNV的灵敏度达0.98ng,对WSSV、TSV及其他细菌感染死亡的罗氏沼虾苗没有非特异性反应.通过对2000-2002年病虾及疑似病虾的病毒检测,表明TAS-ELISA法比间接ELISA法和核酸电泳法有更高的阳性检出率和符合率;此外还摸索了降低孵育温度和缩短孵育时间对病毒检测的影响,表明各步孵育温度和时间分别为25℃和20 min对于白浊症状的病苗检测无明显影响,使得本法更加适合于生产实践.     

逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测罗氏沼虾诺达病毒

用逆转录聚合酶链式反应方法,检测5尾来自广西某罗氏沼虾养殖场典型白肉病症状罗氏沼虾肌肉中的诺达病毒,结果是阳性5尾,占100%。该检测方法耗时短,特异性、实用性强,灵敏度高。     

两种检测罗氏沼虾诺达病毒方法的比较

分别用三抗体夹心酶联免疫吸附测定、逆转录聚合酶链式反应两种方法,检测20尾采集自广东省肇庆市的典型白肉病症状罗氏沼虾肌肉中的诺达病毒。检测结果是两种方法阳性检出率均为95%。结果表明,两种方法均能有效的应用在实验室检测罗氏沼虾诺达病毒。     

罗氏沼虾、青虾常见病害防治

近年来,随着罗氏沼虾、青虾养殖面积的持续扩大,集约化程度不断提高,各类病害频发,现将生产中几种常见的罗氏沼虾、青虾病害的病因及防治方法介绍如下:一、莫格球拟酵母菌病1.症状莫格球拟酵母菌病又称罗氏沼虾亲虾暴发病,是由莫格球拟酵母菌感染引起的。     

罗氏沼虾淡化养殖的现状与展望

为了使罗氏沼虾养殖产量再次得到提高,养殖模式更生态化,本文就罗氏沼虾的养殖现状作出简要综述。目前,淡化养殖的虾苗主要来源受到地理环境的限制,且经受"苗荒"的挫折;育苗条件受温度、水质、肌肉白浊病等威胁;生态成虾养殖受到高温季节温度难调控、养殖模式过于传统以及"铁壳"虾等问题困扰。经过不断发展,循环水系统的利用、益生菌和微生物的合理利用、养殖模式的不断创新和疾病病理的研究等对于当今罗氏沼虾淡化生态养殖起到了很大的促进作用。但是,目前罗氏沼虾的养殖向更生态、更健康的方向发展仍有很大的提升空间。     

看好罗氏沼虾行情

去年春天,罗氏沼虾遭遇了一场＂虾苗危机＂,虾苗供不应求,价格一路走高,出现15年以来的最高价,每万尾价格最高时达400元。江苏省高邮市罗氏沼虾占据全国的＂半壁江山＂,去年养殖面积降至12.94万亩,由于上市量少,造成市场供不应求,因此上市价格比2009年高出近36%。今年春季没有出现长时间的低温天气,对罗氏沼虾育苗来说是个好现象,那么,今年罗氏沼虾苗种情况怎么样？市场行情预计又如何呢？     

看好罗氏沼虾行情

去年春天,罗氏沼虾遭遇了一场"虾苗危机",虾苗供不应求,价格一路走高,出现15年以来的最高价,每万尾价格最高时达400元。江苏省高邮市罗氏沼虾占据全国的"半壁江山",去年养殖面积降至12.94万亩,由于上市量少,造成市场供不应求,因此上市价格比2009年高出近36%。今年春季没有出现长时间的低温天气,对罗氏沼虾育苗来说是个好现象,那么,今年罗氏沼虾苗种情况怎么样?市场行情预计又如何呢?     

高通量测序在罗氏沼虾抗病力比较中的应用

为了比较4个罗氏沼虾抗病选育群体(A、B、C、D)的抗病性能,对4个罗氏沼虾选育群体和1个非选育群体(E)进行了溶藻弧菌肌肉注射感染试验,运用高通量测序方法比较不同罗氏沼虾群体间感染组和对照组肌肉组织中弧菌的变化情况,根据感染成活率的差异性,分析其中3个罗氏沼虾群体(A、C、E)肠道组织和养殖水体的菌群多样性。结果表明:肌肉组织样品中微生物主要分为6个门,其中厚壁菌门占绝对优势,次优势门为变形菌门,软壁菌门和酸杆菌门的含量相对较低;各感染组芽孢杆菌属、假单胞菌属、嗜冷杆菌属的含量都高于对照组,而乳球菌属、乳酸杆菌属的含量明显低于对照组;肠道组织和养殖水体中微生物主要分为3个门,分别是变形菌门、拟杆菌门和厚壁菌门;基于不同罗氏沼虾群体肌肉组织中不同时间段内溶藻弧菌的含量,5个群体的抗弧菌感染能力分别为ABEDC,与感染成活率结果一致。综上,罗氏沼虾体内的菌群结构和养殖水环境密切相关,但相对独立;芽孢杆菌和类芽孢杆菌的含量差异可能是造成A群体和C群体感染成活率差异显著的原因。     

罗氏沼虾仔虾病原菌的分离鉴定及耐药性试验

从病(死)罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)仔虾的匀浆液中分离到了一株大量生长的优势菌,感染试验表明分离菌对罗氏沼虾仔虾有较强的致病作用。对分离菌进行了形态、培养、生化和理化等表观生物学特性检验,同时对该菌进行了分子生物学鉴定,扩增了该菌的gyrB基因和16S rRNA基因并进行测序和序列同源性分析。综合分离菌的表型特征、理化特性及分子生物学鉴定结果,判定病原菌为气单胞菌属(Aeromonas)的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。采用纸片扩散法(K-B法)测试了分离株对44种抗菌类药物的敏感性,结果表明,供试菌均对所测定的44种抗菌类药物中的氨曲南等24种药物敏感,对青霉素G等8种药物耐药。     

罗氏沼虾幼体培育试验

[目的]研究罗氏沼虾幼体培育技术。[方法]在127.3 m3水体中投放2 700×104 ind罗氏沼虾幼体,采取控制鱼苗密度、加强水质调控、不用抗生素的群落生态法进行培育,并观察培育效果。[结果]经25 d左右培育,90%幼体变态,获淡化虾苗1 721.3×104 ind,单位水体产量为13.5×104 ind/m3。平均育苗成活率为63.7%,平均运输成活率为85.9%。苗种达到DB45/T515-2008要求。[结论]生态法可对罗氏沼虾实现健康育苗。罗氏沼虾生态方法育苗切实可行。     

干扰COX2基因对罗氏沼虾生长及能量代谢酶活性和基因表达的影响

【目的】从能量代谢的角度探索罗氏沼虾生长缓慢的原因,为分析和解决罗氏沼虾生长缓慢问题提供参考。【方法】利用合适浓度的siRNA抑制罗氏沼虾肝胰腺和肌肉中COX2基因的表达,分析肝胰腺和肌肉中线粒体呼吸链相关基因表达量和酶活性以及ATP含量的变化;通过持续抑制罗氏沼虾COX2基因的表达,分析其对罗氏沼虾生长的影响。【结果】siRNA对罗氏沼虾线粒体编码的COX2基因表达有抑制作用,在一定浓度范围内,随着siRNA浓度的增加抑制的作用越明显,超过一定的浓度范围的siRNA抑制作用不明显,浓度为2.0μg/g的siRNA与0.8、1.5、3.0μg/g的siRNA的抑制作用相比效果最好。罗氏沼虾注射siRNA后,肝胰腺和肌肉中的COX2基因表达量下调,ND1和ATP6基因表达量随之下调,COX、ATP合酶、CCR和ND的酶活性显著下降（P<0.05,下同）,ATP含量降低。连续注射siRNA能持续抑制罗氏沼虾肝胰腺和肌肉中COX2基因的表达,随着siRNA注射次数的增加,抑制COX2基因表达的作用时间也增加,在注射4次2.0μg/g siRNA虾的肝胰腺和肌肉中,COX2、ND1和ATP6的基因表达量持续下调的时间最长,COX、ATP合酶、CCR和ND的酶活性能长期保持在显著低于对照组的水平,ATP含量也显著低于对照组。随着肝胰腺和肌肉中COX2基因表达被抑制时间的增加,罗氏沼虾的体长与体重增加量越小,养殖28d后,注射1次siRNA和注射4次siRNA的虾的体重净增长分别为0.59和0.34g。【结论】当参与ATP合成的酶的基因表达量和酶活性长时间受到抑制时,会抑制罗氏沼虾的生长。     

罗氏沼虾同工酶表达组织差异性及遗传多样性分析

【目的】从生化遗传角度分析罗氏沼虾群体的同工酶基因座及其酶谱表型,明确不同群体的遗传多样性,为其种质资源鉴定及遗传育种研究等提供基础数据。【方法】采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）对罗氏沼虾肌肉、复眼、鳃、心脏和肝胰腺等5种组织中的苹果酸脱氢酶（MDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、山梨醇脱氢酶（SDH）、苹果酸酶（ME）、磷酸葡萄糖变位酶（PGM）、乙醇脱氢酶（ADH）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷氨酸脱氢酶（GDH）、天冬氨酸脱氢酶（AAT）和酯酶（EST）等11种同工酶进行电泳分析,并选取肌肉同工酶对申漕群体、野生群体、抗病群体、生长群体和浙江群体（2017年引进种虾）等5个罗氏沼虾群体进行遗传学研究。【结果】同种同工酶在罗氏沼虾不同组织间所表现出的酶谱总数和酶带颜色（酶活性）存在明显差异,即罗氏沼虾同工酶具有明显的组织差异性;11种同工酶在罗氏沼虾5种组织中存在26个基因座。其中,EST在肌肉中未表达,但在肝胰腺中表达较多;ME在肌肉、复眼、鳃、心脏和肝胰腺等5种组织中均有表达;SOD-2只在肝胰腺中表达;PGM在肝胰腺和心脏中表达较多。罗氏沼虾肌肉中的7种同工酶存在11个基因座,有3个基因座（SDH-1、PGM-3和LDH-1）呈多态性,多态位点比例为27.27%。5个罗氏沼虾群体的平均预期杂合度在0.1006~0.1416,平均观测杂合度在0.1143~0.1762,Hardy-Weinberg遗传偏离指数（0.1362~0.2444）均为正值,即偏离Hardy-Weinberg平衡。【结论】罗氏沼虾同工酶具有明显的组织差异性,表现为不同组织间的酶谱总数和酶带颜色（酶活性）存在明显差异,因此同工酶可作为研究罗氏沼虾遗传多样性的一种生化遗传标志。5个罗氏沼虾群体均处于杂合子过剩状态,其遗传变异水平较高。     

粘虫核型多角体病毒感染特性的研究

对东北农业大学昆虫学教研室分离出来的粘虫核型多角体病毒Ｖ－Ｍｓ－４毒株进行初步研究，结果表明，病毒多角体呈近圆形、四角形、六角形和不规则形，大小在１．１６～２．８６μｍ之间，病毒粒子为３８９～４６７μｍ×４０～６８μｍ，为多粒包埋，病毒在粘虫消化液作用下，１０ｍｉｎ失去折光性，３０ｍｉｎ内完全被溶解，释放出病毒粒子；消化液能使释放出的病毒粒子在１５ｍｉｎ内失活；寄主的脂肪、气管基质及表皮组织为感染病毒的敏感组织，感染后脂肪和血淋巴蛋白的含量比健康幼虫明显降低，未见病毒侵染中肠的现象。     

罗氏沼虾仔虾耗氧率与窒息点的初步测定

在室内条件下测定了体重、温度对罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii)仔虾耗氧率与窒息点的影响。结果表明，仔虾的耗氧率与窒息点随体重的增加而降低，耗氧率与体重呈负相关的幂指数关系；耗氧率、窒息点随温度的升高而增加。     

Multiple Antibiotic Resistance and Heavy Metal Resistance Profile of Bacteria Isolated from Giant Freshwater Prawn （Macrobrachium rosenbergii） Hatchery

In this article, antibiogram and heavy metal resistance profile of bacteria isolated from giant freshwater prawn （Macrobrachium rosenbergii） hatchery in Malaysia are described. Although giant freshwater prawn was introduced into Malaysia since the 1980s, there was no database information on antibiogram and heavy metal resistance profile of bacteria from giant freshwater prawn （34. rosenbergii） hatchery in Malaysia. Therefore, this study was carried out to determine the effectiveness of antibiotic and heavy metal resistance profile to control bacterial diseases in M. rosenbergii hatchery. The results can provide valuable information for local M. rosenbergii post-larval producer. Antibiotic sensitivity test was carried out by disk-diffusion method against 15 types of antibiotics as follows： oxolinic acid （2 μg）, ampicillin （10μg）, erythromycin （15μg）, furazolidone （15 μg）, lincomycin （15μg）, amoxicillin （25 μg）, colistin sulphate （25 μg）, doxycycline （30μg）, florfenicol （30 μg）, flumequine （30 lag）, nalidixic acid （30μg）, tetracycline （30μg）, oleandomycin （15μg）, fosfomycin （50μg）, and spiramycin （100 μg）, whereas heavy metal resistance profile of the present bacterial isolates was determined by 2-fold agar dilution technique. In this study, 5 types of bacteria were successfully isolated; they were Aeromonas spp. （n = 77）, Escherichia coli （n = 73）, Edwardsiella spp. （n = 62）, Salmonella spp. （n = 75）, and Vibrio spp. （n = 43）. The result showed that furazolidone was the most effective antibiotic to control the bacteria isolated in this study, approximately 89.7% of the bacterial isolates were sensitive to this antibiotic. Multiple antibiotic resistance （MAR） index indicated that the hatchery water source and M. rosenbergii post-larval and sediment tanks were at high-risk exposure to the tested antibiotic. Furthermore, all the tested heavy metals （Cd2＋, Cr6＋, Hg2＋, and Cu2＋） failed to inhibit the growth of the bacterial isolates. Therefore, it indicated that the water source of the hatchery is contaminated with both antibiotic residues and heavy metal.     

1993年中国对虾暴发性流行病病原初步研究

在患暴发性流行病病虾肝胰腺及中肠超薄切片中看到有包膜的杆状病毒颗粒，长２５０￣２７０ｎｍ、宽７０ｎｍ左右。将除菌病虾组织浆悬液注射健康虾，可引起发病死亡，症状与自然发病虾相仿。因此，杆状病毒是中国对虾暴发性流行病的病原。同时在活检时发现病虾肝胰腺及心脏压片中有较多细菌，将未除菌病虾组织浆悬液注射健康虾，比注射除菌病虾组织浆悬液的虾死亡早而迅速，所以受病毒感染后再继发细菌感染将加快病情恶化和死亡。     

罗氏沼虾淀粉酶基因克隆及其表达规律分析

【目的】克隆罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）淀粉酶基因（AMY）,并进行生物学信息分析及其表达规律研究,为揭示AMY基因的生物学功能及其对罗氏沼虾生长发育的调控作用机理提供理论依据。【方法】PCR克隆罗氏沼虾AMY基因编码区（CDS）序列,利用ExPASy ProtParam、ExPASy ProtScale、SignalP-5.0、MegAlign及Lasergenev8.0等在线软件进行生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR检测AMY基因在罗氏沼虾不同组织（腹神经节、胃、心脏、鳃组织、性腺、肝胰腺、肌肉和肠道）中的表达情况,并明确其在生长快速家系（FG）和生长慢速家系（SG）个体肌肉中的表达模式。【结果】罗氏沼虾AMY基因CDS序列全长2121 bp,共编码706个氨基酸残基;其编码蛋白分子量为76.87 kD,理论等电点（pI）为4.63,属于不稳定的亲水性蛋白,包含2个典型的淀粉酶结构域;在罗氏沼虾AMY蛋白二级结构中,α-螺旋占13.88%,延伸链占21.39%,无规则卷曲占64.73%。罗氏沼虾AMY氨基酸序列与克氏原螯虾AMY氨基酸序列的相似性最高（62.6%）,与大珠母贝AMY氨基酸序列的相似性较低（48.9%）;基于AMY氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,罗氏沼虾与克氏原螯虾的亲缘关系最近,而与中华绒螯蟹的亲缘关系较远。AMY基因在罗氏沼虾不同组织中广泛表达,但存在性别差异性和组织特异性,具体表现为:雌性个体肠道中的相对表达量极显著高于雄性个体（P<0.01,下同）,鳃组织中的相对表达量显著高于雄性个体（P<0.05）,而肝胰腺中的相对表达量极显著低于雄性个体。罗氏沼虾AMY基因在FG个体肌肉中的相对表达量极显著高于SG个体。【结论】AMY基因在罗氏沼虾的生长发育过程中发挥重要作用,广泛表达于罗氏沼虾的不同组织中,但存在性别差异性和组织特异性。     

饵料和盐度对罗氏沼虾幼虾生长和存活率的影响

研究了不同饵料(5种饵料)和不同盐度(9个盐度梯度)对罗氏沼虾生长和存活率的影响。结果表明,饵料和盐度对罗氏沼虾幼虾的生长和存活率均有显著的影响(P0.05)。投喂卤虫无节幼体组和鱼肉组的幼虾各项生长参数都显著高于其他各组(P0.05),其中,卤虫无节幼体对幼虾生长和存活的效应尤为突出,体长增长率、体质量增长率和存活率分别达(108.00±6.928)%,(445.45±74.828)%和92.67%。在盐度为5的养殖环境中,罗氏沼虾幼虾终末体长和终末体质量最大,分别达(1.29±0.025)cm和(0.090±0.003)g。但在盐度为0~25的养殖环境中,罗氏沼虾幼虾的体长生长指标的差异不显著(P0.05),说明罗氏沼虾幼虾对盐度的适应范围较广。当盐度超过35时,罗氏沼虾幼虾的生长会变慢,成活率也会下降,与其他组之间存在显著的差异(P0.05)。