cDNA-AFLP技术及其在基因差异表达中的应用

cDNA-AFLP技术是一种在转录水平上研究基因差异表达的分子生物学实验技术,由于其具有起始材料量少、假阳性低、重现性、灵敏度高且不需预先知晓序列信息等优点,被广泛应用于各类生物差异表达基因的研究。就cDNA-AFLP技术的基本原理、发展历史和技术特点以及在微生物研究尤其是乳酸菌发酵研究中的潜在应用价值进行了综述。     

一种简易的cDNA-AFLP分析方法

cDNA-AFLP结合了RFLP和RT-PCR的优点,在无需了解序列信息的同时,集中显示基因组表达序列的多态性差异,灵敏性高,重复性好。但实验室开展常规的cDNA-AFLP研究需要昂贵的设备和大量的投入。本试验改用小面积变性聚丙烯胺凝胶电泳检测扩增产物,银染显带法来完成cDNA-AFLP的全套技术体系,便cDNA-AFLP分析方法更为简便、经济并减少污染。     

一种适于cDNA-AFLP分析的茶树叶片总RNA提取方法

茶树富含多糖、多酚,从茶树组织中提取高质量的RNA较为困难,cDNA-AFLP技术对RNA质量要求较高,因而从茶树叶片中提取高质量的RNA是cDNA-AFLP试验正常进行的重要保障。该试验采用改进的CTAB法从茶树叶片中提取总RNA,结果表明:琼脂糖凝胶电泳显示28S、18S、5S 3条带清晰,完整性好,产率高;A260/A280值为2.07,范围为1.8~2.1,DNA和蛋白质污染较少;经逆转录、双链cDNA合成和cDNA-AFLP检测,证实提取的RNA能满足cDNA-AFLP技术对RNA质量和数量的要求。该方法为应用cDNA-AFLP技术顺利开展茶树分子生物学方面的研究奠定了基础,处理方式简单且成本较低。     

cDNA-AFLP技术在番茄及其黄化曲叶病毒互作中的应用

cDNA-AFLP技术是研究基因差异表达的有利工具,广泛用于植物抗病,抗逆和生长发育等研究领域。番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)是番茄生产上最严重的病害,为了研究番茄抗TYLCV机理,本研究利用cDNA-AFLP技术分析番茄抗黄化曲叶病毒病相关基因的差异表达,选用64对引物扩增筛选出287条转录差异片段,其中156条上调表达,131条下调表达。表明cDNA-AFLP技术对于揭示番茄与TYLCV互作机理是一种有效的方法;同时获得的差异片段也可用于番茄抗TYLCV相关基因的克隆,为未来鉴定这些基因的功能奠定基础。     

高粱四杂29号cDNA-AFLP试验体系的建立与优化

[目的]建立与优化cDNA-AFLP试验体系。[方法]以经典cDNA-AFLP方案为基础,以高粱种子为材料,对试验体系进行研究,并且加以改良。[结果]得到的cDNA-AFLP试验方案以蒸馏水代替去离子水、以普通国产试剂代替进口试剂、以国产试验设备代替进口设备,降低了试验成本,减小了试验难度。[结论]建立了一套简便、经济、快速、安全、适合国内普通试验使用的cDNA-AFLP试验方法,为高粱分子育种的研究奠定了基础。     

cDNA-AFLP技术及在差异表达基因克隆上的应用

cDNA-AFLP技术是在AFLP技术基础上发展起来的主要用于研究基因差异的技术,具有高效可靠的优点,受到研究者的青睐,被广泛应用于包括植物在内的各类生物的基因表达的研究中。简要阐述了cDNA-AFLP技术的原理,重点讨论了操作过程中可能出现的问题和技术关键,并就该技术与其他差异表达技术进行了比较,以说明其在克隆差异表达基因上的优势,还简要列举了一些在抗病育种等领域的应用实例。     

分离差异mRNA技术及其应用

从介绍分离差异mRNA技术的发展过程入手,重点概述了SSH、DDRT-PCR和cDNA-AFLP技术的程序和优缺点, 及其在分离目的基因、研究发育调控和杂种优势的分子机理等领域的应用。     

cDNA-AFLP分析不同发育时期蓖麻种子脂肪酸差异基因表达的关键技术

在介绍cDNA-AFLP技术原理与操作步骤的基础上,分析了应用cDNA-AFLP分子标记技术分析蓖麻种子脂肪酸含量差异基因表达过程中的主要影响因素,以期为后续利用该标记技术分析不同发育时期蓖麻种子脂肪酸含量的差异表达提供技术支持。     

cDNA-AFLP技术在果树生物技术育种上的应用

cDNA-AFLP技术是近年来广泛应用于植物基因分离与表达研究的mRNA指纹图谱技术,具有可靠、高效的优点.在果树生物技术应用方面,目前该技术在第一代果树中应用居多且已取得大量成果,在第二代果树上仅有少量报道,在第三代果树上的应用处于起步阶段.在简单叙述其基本原理和特点的基础上,重点阐述英在果树基因分析研究中的应用,包括芽变突变体鉴定、基因分离、基因表达特性分析以及指纹图谱构建,并对其在果树生物技术育种研究上的应用前景进行了展望.     

cDNA-AFLP技术在植物抗逆性相关基因表达研究中的应用

cDNA-AFLP技术是以mRNA反转录的cDNA为模板进行AFLP分析,在保留AFLP多态性丰富、稳定性高、无需了解序列信息等优点的同时,集中显示了基因组表达序列的多态性差异,可对生物体转录组进行全面、系统的分析,并已成功地用于基因差异显示、表达基因遗传连锁作图和基因克隆等方面。文章综述了cDNA-AFLP在植物抗逆性相关基因表达特性分析及基因分离方面的应用。     

建立胡杨抗逆研究的cDNA-AFLP反应体系

以胡杨为研究材料,建立适用于胡杨抗逆研究的cDNA-AFLP反应体系,对影响反应体系的关键因素(RNA提取、内切酶组合、预扩增体系、选择性扩增体系)进行了探索和优化。结果表明:通过改进后的CTAB法能成功获得高质量的RNA;EcoRⅠ/MseⅠ的组合4.5h内将ds-cDNA酶切完全,与相应接头连接过夜后产物直接用于预扩增;稀释10倍的预扩增产物作为模板用于选择性扩增;通过优化体系得到的选择性扩增产物,银染检测后条带清晰稳定,经RT-PCR检测,证明优化后的cDNA-AFLP技术差异显示的结果可以准确反映基因在植物体中差异表达的真实情况,并利用该技术成功筛选出42对可以获得带型丰富且重复性好的引物组合。     

番木瓜不同性别基因表达cDNA-AFLP分析

在番木瓜幼苗期,利用cDNA-AFLP技术鉴定植株性别并分析不同植株性别基因表达的差异;通过对差异表达基因进行序列和功能分析,探讨调控番木瓜性别分化的分子机理.结果表明,每次反应扩增获得的稳定条带总数为25～75条,番木瓜3种植株性别基因表达存在明显差异,每种性别植株都有特异性条带,其中雄性株14条、雌性株13条、两性株9条.将获得的部分差异TDFs序列与GenBank数据库中的所有序列进行Blastx和Blastn比对,其中一部分差异片段为未知功能基因序列,另一部分差异片段序列与谷胱甘肽转移酶基因、植物甾醇类激素合成相关基因、分裂原活化蛋白酶基因、与端粒相连的核酸序列、杨树叶中克隆的未知功能基因及拟南芥花和花蕾中克隆的未知功能基因等具有较高的同源性.因此,cDNA-AFLP技术可在幼苗期鉴定番木瓜的植株性别,不同番木瓜植株性别基因的差异表达可能是其植物体一系列功能基因调控植株性别发育及生长发育的综合反应.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的改进及其在cDNA-AFLP分析中的应用

利用电解质梯度变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统对稻纵卷叶螟取食的水稻叶片进行cDNA-AFLP分析,结果表明产生的cDNA条带比普通变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统大约增加30%,解决了传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳在同一块胶板中大片段DNA条带堆积而小片段DNA条带间距过大,且读带数量有限的问题..