大鲵皮肤蛋白质活性物质提取与检测的初步研究

本研究通过组织匀浆、PBS缓冲液浸提从大鲵皮肤中提取蛋白质活性成分,并用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术对浸提物进行蛋白质电泳检测。结果表明：1、大鲵皮肤浸提液含有多种蛋白质活性成分,分子量分别约为68000D,44000D,30000D,25000D,20000D,15000D,根据分子量大小及其他两栖类研究结果,这些蛋白推测起来应和蛙皮抗菌肽蛋白(26000D,32000D), 胰蛋白酶抑制活性剂血清白蛋白 (68000D), LP Ⅱ蛋白多肽(63000D),β-microseminoprotein蛋白(12000D),竞争性抑制剂(22000D), serpin 类不可逆抑制剂(50000D)等为同类活性蛋白;2、大鲵皮肤不同部位蛋白质活性成分的表达有较大差异,其中腹部皮肤蛋白活性成分含量最高,背部次之,头部和尾部较低,且头部和尾部皮肤蛋白活性物含量没有明显差异。     

不同方法对大鲵不同部位的蛋白质含量测定

采用考马斯亮蓝法、紫外分光光度法、福林—酚试剂法,对人工养殖大鲵(Andrias davidianus)的前胸、中胸、尾部的背部及腹部肌肉的蛋白质含量进行了测定。结果表明,大鲵肌肉中不同部位的蛋白质含量存在差异,考马斯亮蓝法、紫外分光光度法、福林—酚试剂法均测得大鲵中胸腹部肌肉的蛋白质含量最高,分别为214.58、219.20、251.41 mg/g;在尾腹部最低,分别为88.05、85.71、105.28 mg/g。尽管3种方法含量测定存在差异,但其均显示蛋白质含量在大鲵体中分布为中胸前胸尾部。     

幼苗期小麦热激蛋白的诱导研究(英文)

高温是小麦产量提高的一个重要限制因素,小麦受到高温胁迫时会产生一系列热激蛋白来适应这种逆境,不同发育阶段的热激蛋白存在差异,不同抗热作物品种中热激蛋白也存在差异,因此,研究抗热性不同的小麦品种中热激蛋白差异对小麦耐热性的研究具有重要的理论意义与实践意义。该实验利用SDS-PAGE电泳技术对2种不同的小麦品系在34.37、40℃下处理1～7h产生的热激蛋白进行研究,发现其可溶性蛋白电泳图谱与常温下的有区别,其中新蛋白的出现说明高温能够诱导新蛋白。71321-9中发现的3种新蛋白的分子量分别为97.4kD、49kD、37kD,另外还发现3种蛋白质含量明显升高,这3种蛋白质的分子量范围在17～66kD。71321-4小麦中发现了2种新增热激蛋白(37kD和29kD)及1种蛋白质的含量明显增加。这些蛋白可能与小麦幼苗抗热性有关,其含量的增加能够提高幼苗的抗热性。     

驴胎盘蛋白的组成分析

采用蛋白质传统分离技术结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF/MS)揭示驴胎盘蛋白质的性质和组成,结果表明,驴胎盘蛋白含量为(15.62±1.04)％,等电点均匀分布酸性和碱性区域,分子量主要集中在7～19、36～78 kD 2个区域.通过与马科蛋白图库进行对比,检索出3865种可识别的蛋白,进一步对驴胎盘蛋白进行生物信息学分析,发现驴胎盘蛋白主要参与了内质网蛋白质加工、ECM-受体相互作用、内质网应激反应等生物学过程,为驴胎盘药理活性成分的筛选提供了理论基础.     

大鲵不同部位的抑菌效果研究

[目的]研究大鲵皮肤、黏液、肉粉和脂肪的抑菌效果。[方法]用80%甲醇水溶液分别浸提大鲵粘液、皮肤及肉粉获取提取物,用乙醚萃取大鲵油。采用滤纸片扩散法,研究大鲵4种提取物对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌的抑菌作用。[结果]大鲵皮肤浸提物对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌有较强的抑菌作用,而对大肠杆菌无抑制作用。大鲵黏液、大鲵肉粉、大鲵油对4种菌的抑制作用均不显著。[结论]大鲵的主要抗菌部位为皮肤。     

干旱胁迫下麻疯树毒蛋白的Western杂交分析

用 10 %～ 4 0 %聚乙二醇 (PEG 6 0 0 0 )处理麻疯树幼苗进行蛋白质诱导 .SDS PAGE显示 ,在根、茎、叶中分别诱导出分子量大约为 17和 30kD、17和 35kD及 15、17、32、5 3、5 6、6 1和 6 5kD的蛋白质多肽链 .用麻疯树毒蛋白(curcin)的抗血清与诱导蛋白进行Western杂交 .结果显示 ,在叶的诱导蛋白中出现分子量为 32和 6 5kD的阳性反应带 ,而在根、茎中无 .这一结果表明干旱胁迫下麻疯树蛋白质分子标记的存在 ,为逆境蛋白的研究奠定了实验基础 .     

奶牛温氏附红细胞体抗原特性研究

研究目的为制备E.wenyoni特异性诊断抗原及研制高效附红细胞体疫苗提供基础进行试验;方法从自然感染温氏附红细胞体(E.wenyoni)的牛血液中纯化附红细胞体后,采用SDS-PAGE和免疫印迹技术分析E.wenyoni抗原蛋白组分;结果SDS-PAGE结果显示,E.wenyoni全蛋白分子量范围为24kD￣150kD,主要的9种蛋白质分子量分别为141.34kD,107.27kD,86.03kD,68.05kD,56.21kD,44.30kD,32.99kD,28.89kD,24.59kD;免疫印迹筛选出3特异性蛋白质,分子量分别为147.31kD,49.03kD,35.72kD;结论E.wenyoni主要由九种类抗原蛋白组成,3种特异性蛋白质,可作为E.weny-oni特异性诊断抗原及附红细胞体疫苗的保护性抗原。     

苦瓜性别分化程序表达的研究（英文）

苦瓜的性别分化过程要先经过一个两性期,再分别向雄性或雌性的方向发育. 对两性期和雄,雌花早期发育的3个典型时期的花蕾进行毛细管电泳分析,结果表明,一种分子量为11 kD的蛋白质在雌花发育的3个时期都存在,并且含量变化很小,很可能是雌花程序表达中的一种"关键蛋白";类似地,一种分子量为30 kD的蛋白质很可能是雄花程序表达中的一种"关键蛋白".此外,蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮抑制离体两性花的体外性别分化,而核酸合成抑制剂3-脱氧腺苷则不影响两性花的体外性别分化.     

木麻黄水浸液对青皮种子的化感效应

采用GC-MS技术,比较木麻黄根、根际土壤和凋落物3种浸提液的成分差异和含量差异,并研究了3种浸提液对青皮种子萌发的化感作用。结果表明:(1)浸提液处理延迟并抑制了青皮种子的萌发,降低了种子的发芽能力以及发芽速度,并且土壤浸提液处理的抑制程度最大,其次分别是凋落物浸提液和根浸提液。(2)3种浸提液中都含有的成分为1,2-二氢-3-巯基-3H-1,2,4-三唑,根际土壤浸提液中含量最高(70.41%),根系浸提液次之(21.79%),凋落物浸提液中含量最低(18.78%)。3,6-二甲基-1,2,4,5-四嗪、1,2,4-三硫环戊烷(1,2,4-Trithiolane)在根系及凋落物中均有分布。     

苦瓜性别分化程度表达的研究

苦瓜的性别分化过程要先经过一个两性期，再分别向雄性或雌性的方向发育。对两性期和雄，雌花早期发育的3个典型时期的花蕾进行毛细管电泳分析，结果表明，一种分子量为11kD的蛋白质在雌花发育的3个时期都存在，并且含量变化很小，很可能是雌花程序表达中的一种“关键蛋白”；类似地，一种分子量为30kD的蛋白质很可能是雄花程序表达中的一种“关键蛋白”。此外，蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮抑制离体两性花的体外性别分化，而核酸合成抑制剂3－脱氧腺苷则不影响两性花的体外性别分化。     

低温胁迫下钙处理对茄子幼苗蛋白质含量及特异蛋白表达的影响

试验表明,4℃低温胁迫下,墨茄和紫星茄的可溶性蛋白质和热稳定蛋白质含量随胁迫时间的延长呈下降趋势,钙处理可减缓下降幅度。SDS-PAGE电泳结果显示,低温胁迫下,钙可诱导特异性蛋白的表达,其中,墨茄出现分子量为25kD、111kD、118kD的3种特异蛋白,紫星茄出现分子量为118kD和111kD的2种特异蛋白。     

不同育龄人工流水和仿生态养殖大鲵粘液营养成分研究

研究不同育龄人工流水饲养大鲵和仿生态养殖大鲵皮肤分泌粘液中的营养成分,氨基酸含量进行对比分析,得出仿生态养殖大鲵粘液中蛋白质含量高于人工流水饲养大鲵,提取蛋白质最佳育龄为3龄;仿生态养殖大鲵黏液中氨基酸含量高于人工饲养大鲵,具有重要的市场价值。     

苦瓜种子发育过程中水溶性蛋白组分的研究

选取在果型和果色上具典型性的4个苦瓜品种为材料,对不同发育时期种子的可溶性蛋白提取物进行了SDS-PAGE和IEF分析.结果表明,所有品种苦瓜种子均含有丰富的可溶性蛋白(14.4～116.0 kD),其中以分子量为27.6,47.4和43.4 kD的蛋白含量较高,有3种蛋白的分子量在30 kD左右,不同品种之间在小分子量蛋白的表达上有一定差异;所有品种种子均含有4种以上的碱性蛋白,但不同品种之间碱性蛋白的含量和积累规律存在一定的差异.     

栓皮栎成熟效应蛋白质及组分变化分析

选用幼龄、成龄、老龄栓皮栎在幼年期和成年期的叶片,研究成熟效应过程中蛋白质及组分变化规律。结果表明,蛋白质含量随成熟效应呈现由高到低的变化趋势为幼年期﹥成年期,幼龄﹥成龄﹥老龄;不同蛋白质组分在成熟效应过程中变化动态和含量都存在差异,清蛋白含量逐渐增加,出现了27.0、61.8 kD与104.8 kD的清蛋白条带,球蛋白、醇溶蛋白含量逐渐减少,14.4、28.4、53.4 kD与66.0 kD的球蛋白条带和53.4 kD的醇溶蛋白条带消失,谷蛋白含量无明显变化,4种蛋白组分含量表现为清蛋白>球蛋白>醇溶蛋白>谷蛋白。     

花生活性肽的分子量分布及抗氧化活性研究

[目的]研究花生活性肽的分子量分布及其与抗氧化活性的关系。[方法]采用截留分子量8.0、3.5、1.0 kD的透析袋对花生蛋白酶水解液进行分级分离,得到不同分子量范围的抗氧化肽,分别测定其清除自由基的能力,并与Tricine-SDS-PAGE技术相结合,考察花生蛋白酶解物的分子量分布。[结果]分子量范围在1.0 kD以下的多肽混合物含量分别为碱性蛋白酶和风味酶的总水解物的76.21%和83.42%,不同分子量范围的水解物均具有一定的清除自由基的能力,且随分子量的减小而增大,分子量范围在1.0 kD以下的组分对碱性蛋白酶和风味酶中的自由基的清除能力最强,分别为(87.41±0.66)%和(67.88±0.48)%。[结论]花生活性肽的抗氧化能力较强,尤其是分子量1.0 kD以下的短肽,具有较好的开发应用前景。     

两种半夏蛋白及凝集素抑制褐飞虱与番茄花叶病毒初报

从半夏与掌叶半夏块茎中用硫酸铵盐析法分离总蛋白后,用亲和层析法纯化凝集素。所得凝集素单体分子量均为12kD,总蛋白主要含有分子量为12 kD左右的成分及24 kD、46 kD的成分,很可能为凝集素的单体及其二聚体和四聚体。凝集素均具有凝集兔血红细胞的活性。总蛋白在1 mg/ml时对褐飞虱有显著的致死效应,达80%。总蛋白在1 mg/ml或凝集素在0.2 mg/ml时对一定浓度的番茄花叶病毒的侵染有显著的抑制作用,达50%~76%。总蛋白的抑制作用应为所含的凝集素成分所致。     

孕酮对雌性小白鼠不同器官中不同分子量蛋白质合成作用的影响

[目的]为深入了解孕酮的蛋白质合成作用奠定基础。[方法]用不同浓度孕酮处理雌性小白鼠,测定其不同器官内不同分子量范围蛋白质的相对含量,探讨孕酮对雌性小白鼠不同组织器官蛋白质合成作用的影响。[结果]不同组织器官内蛋白质主要集中在25～75 kD,而不同浓度的孕酮对雌性小白鼠不同组织器官内蛋白质含量有明显影响。[结论]孕酮诱导子宫、肾上腺和垂体下丘脑上75～250 kD蛋白的合成,诱导垂体下丘脑上15～25 kD蛋白的合成,抑制子宫、肾上腺和垂体下丘脑25～75 kD蛋白的合成。     

不同产地芡实种仁中蛋白质与 淀粉组分差异性研究

以4个不同产地的芡实(Euryale ferox Salisb.)为试验材料,对其种仁中主要营养成分如蛋白质、淀粉组分进行了分析测定.结果表明,芡实种仁蛋白质主要由清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白构成;不同产地芡实的总蛋白质含量无显著差异,但4种不同蛋白的含量存在显著差异,其中3号芡实的清蛋白和球蛋白含量最高、醇溶蛋白和谷蛋白含量最低,1号芡实的醇溶蛋白和谷蛋白含量最高、清蛋白和球蛋白含量最低.SDS-PAGE图谱分析表明,4种不同产地的芡实均在45.0～66.2 kD处均含有一条明显的蛋白谱带,而3号芡实在20～45 kD范围内含3条明显蛋白谱带,表明3号芡实含有更多类型的蛋白组分或同工酶成分.此外,不同产地芡实种仁的直链淀粉和支链淀粉含量比值差异显著,其中2号芡实的支链淀粉含量最高,3号芡实支链淀粉含量最低.     

不同育龄大鲵肌肉和皮肤营养成分测定研究

本研究分别提取3育龄、6育龄仿生态养殖大鲵的肌肉和皮肤,测定其营养成分、氨基酸含量及矿物质元素含量。结果表明,仿生态养殖大鲵营养丰富。大鲵皮肤平均粗蛋白含量高于肌肉3.3%,6育龄大鲵肌肉粗蛋白含量高于3育龄2.8%;仿生态养殖大鲵肌肉的平均EAA/TAA为41.61%,平均EAA/NEAA为71.31%,达到理想模式,且6育龄大鲵蛋白质优于3育龄大鲵;6育龄大鲵肌肉矿物质含量较3育龄大鲵高3.71%。由此看出,仿生态养殖大鲵具有重要的市场价值,6育龄大鲵肌肉营养丰富,口味鲜美,更适合进行深加工,应对其进行重点开发和利用。     

运用化学计量学法高通量筛选人参抗老年痴呆的氨基酸成分

应用Ellman改良法和MTT法对人参水提物超滤分级后的＜1 kD,1～3 kD,3～10 kD,＞10 kD及总提物共5个组分进行体外乙酰胆碱脂酶(AChE)抑制活性和神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)保护活性筛选,对吉林省内12个样地的人参水提物＜1 kD活性组分进行氨基酸检测,获得各样品的氨基酸共有峰图谱数据,并测定各样品的AChE抑制率和SH-SY5Y细胞存活率,采用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法(PLS)和灰色关联度分析(GRA)对所获得的氨基酸共有峰数据进行处理后,可有效区分人参的不同产地,并筛选出其中潜在抗AChE活性和SH-SY5Y细胞保护活性的氨基酸成分.试验结果显示,苏氨酸(Thr)和亮氨酸(Leu)在氨基酸共有峰中对AChE的抑制活性最佳,苏氨酸(Thr)、丙氨酸(Ala)及亮氨酸(Leu)对SH-SY5Y损伤细胞具有较好的保护作用.揭示了人参水提物＜1 kD组分具有良好的AChE体外抑制活性和SH-SY5Y细胞损伤保护作用.因此,苏氨酸(Thr)和亮氨酸(Leu)可能具有潜在的抗阿尔茨海默病(AD)活性,该成分为寻找抗AD寡肽类药物提供物质基础.此研究方法为简单、高通量的从中药中筛选抗AD的活性物质提供借鉴.