肉鸭传染性浆膜炎的诊断和防制

郑州市郊某鸭场发生一起临床症状、剖检病变疑似鸭传染性浆膜炎鸭疫里氏杆菌病例,从中分离到1株细菌。对分离的病菌进行分离培养、生化试验和动物试验,鉴定为鸭疫里默氏杆菌。药敏实验表明鸭疫里氏杆菌对头孢噻肟、卡那霉素、环丙沙星等敏感性较高。通过治疗,病情得到了控制。     

鸭疫默里氏杆菌的分离鉴定及其部分生物学特性研究

从采自湖北省不同地区规模化鸭场的鸭传染性浆膜炎疑似病例肝脏中分离到12株细菌,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性鉴定。结果显示,分离到的细菌均为两极着色的革兰氏阴性短小杆菌;在普通培养基和麦康凯培养基上不能生长,胰蛋白大豆琼脂培养基上生长旺盛;生化鉴定结果显示,分离的菌株不能发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、乳糖、甘露醇和山梨醇,靛基质、VP试验、硝酸盐还原试验、硫化氢产生、甲基红试验均为阴性,触酶、氧化酶试验为阳性。结果表明分离的12株细菌均为鸭疫默里氏杆菌（Riemerella anatipestifer）。耐药谱试验显示,分离的菌株对头孢噻呋钠、阿米卡星高度敏感,其次为环丙沙星、强力霉素、诺氟沙星、氟苯尼考、庆大霉素,对四环素、青霉素、红霉素、卡那霉素不敏感。     

一例鸭传染性浆膜炎的诊断

山东一养鸭场发生疑似传染性浆膜炎,实验室经过病原分离、镜检、血清学鉴定、生化鉴定、PCR特异性鉴定、药敏试验及动物回归试验发现,该病原为革兰氏阴性菌,在麦康凯培养基不生长,在TSA培养基生长,与鸭疫里默氏杆菌7型阳性血清发生凝集反应,经PCR特异性鉴定出现800bp左右的特异性目的条带。生化试验发现,分离菌不发酵乳糖、半乳糖、葡萄糖、果糖,甲基红、硫化氢产气试验、过氧化氢酶试验均为阴性,明胶试验和过氧化氢酶试验结果均为阳性,符合该菌的特性。将分离菌进行动物回归试验,接种20日龄樱桃谷鸭,攻毒后10d内雏鸭全部死亡,剖检可见明显的纤维素性气囊炎、心包炎和肝周炎,符合该菌的致病特性。根据实验室诊断,确定该养殖场导致鸭群发病的病原为鸭疫里默氏杆菌7型,同时,通过药敏试验给养殖户提出了良好的治疗建议。     

鸭疫里默菌河南株的分离与鉴定

为了研究鸭疫里默菌的生物学特性及其发病机制,从河南地区某鸭场临床症状、剖检病变疑似鸭疫里默菌病例进行细菌分离,从中分离到1株细菌。对分离的病菌进行形态培养、生化试验、动物试验、琼扩试验和血清型鉴定,鉴定为鸭疫里默菌3型。药敏实验表明鸭疫里默菌对头孢噻肟、卡那霉素、环丙沙星等敏感性较高。     

重庆市部分地区鸭源大肠杆菌的O抗原血清型及耐药性

从重庆市5个区、县的部分规模化鸭场收集以心包炎、肝周炎及腹膜炎为主要病理变化的病死鸭,无菌采取其心血和肝脏后接种,分离出30株细菌,经细菌的形态特性和生化特性分析,鉴定为大肠杆菌.该试验对分离的大肠杆菌进行了O抗原单价血清型鉴定试验及药敏试验.结果表明:30株分离菌中有23株定型分属于11种血清型,其中以O78,O93,O92和O21为优势血清型(共占46.67%).30株分离菌对21种抗生素的耐药率高于50%,其中耐受7种药物以上的有28株,占93.3%,耐受10种药物以上的有23株,占76.6%,表明重庆地区部分养鸭场鸭源大肠杆菌的耐药性严重.     

鸭源大肠杆菌O_(88)的分离鉴定及药敏试验

为了分离鸭大肠杆菌病病原,并筛选出敏感药物,从河北省安新县某大型鸭场30日龄病死雏鸭肝脏分离到一株革兰氏阴性杆菌,通过菌落形态观察、培养特性试验和生化试验鉴定以及药敏试验。确定为大肠杆菌。应用大肠埃希菌O抗原定型血清鉴定为O_(88)。动物试验结果显示,该分离菌株对小鼠有较强的致死性,为致病性大肠杆菌。药敏试验结果显示,分离菌株对庆大霉素、头孢曲松、头孢拉啶、呋喃妥因等药物敏感,对氨苄西林和链霉素等产生耐药。     

信阳市鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定

从信阳市临床疑似鸭传染性浆膜炎发病樱桃谷鸭中分离菌进行形态、培养特征、生化试验和动物试验,鉴定为鸭疫里默氏杆菌。     

鸭金黄色葡萄球菌的分离与鉴定

从病鸭肝、脾和关节液中分离到1株细菌,经细菌形态学观察、鉴别培养、生化试验、血浆凝固酶试验、过氧化氢酶试验鉴定为金黄色葡萄球菌。该分离株能引起家兔局部皮肤溃疡、坏死,动物回归试验中,能使雏鸭发病并死亡。药敏试验结果表明,该菌株对先锋霉素V、丁胺卡那、氨苄青霉素高敏。     

鸭疫里氏杆菌RA JS01菌株的PCR鉴定及生物学特性

在临床疑似鸭传染性浆膜炎的病鸭组织中分离了1株RA JS01菌株,通过形态观察、生化试验和PCR鉴定,确定该菌株为鸭疫里氏杆菌,结果表明:该菌株对多数抗生素都具有耐药性和较强的致病性;经静脉和足底接种的鸭在接种后24 h时开始死亡,接种96 h时全部死亡;连续传至22代时菌株的生物学特性均未发生变化。     

四川地区鸭疫里默菌的分离与鉴定

为了研究鸭疫里默菌的生物学特性及其发病机制,从四川地区某鸭场临床症状、剖检病变疑似鸭疫里魔菌病例进行细菌分离,从中分离到1株细菌。对分离的病菌进行形态培养、生化试验、动物试验和琼扩试验,鉴定为鸭疫里默菌。药敏实验表明鸭疫里默菌对头孢噻肟、卡那霉素、环丙沙星等敏感性较高。     

人工感染鸭疫里默氏杆菌病鸭主要器官的光镜及电镜观察

[目的]阐明鸭疫里默氏杆菌病的致病机制。[方法]利用光镜和电镜观察人工感染Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌病鸭主要器官的病理变化和超微结构变化。[结果]病鸭心脏、肝脏、脾脏等器官被膜纤维素渗出附着,所有发病鸭只均表现纤维素性脑膜脑炎,出现出血性或坏死性肠炎。在电镜下,心肌纤维、肝细胞、神经元和肠上皮细胞等实质细胞遭到侵害,细胞器结构发生改变,主要表现为线粒体肿胀或空泡化,内质网和核膜扩张等。这可能与细菌毒素对细胞膜的直接损害或缺氧对线粒体的氧化酶系统的破坏有关。这些变化与光镜下心肌纤维、肝细胞、神经元和肠上皮细胞的变性坏死相吻合。[结论]该研究为鸭疫里默氏杆菌病的预防和治疗提供了理论依据。     

鸭疫里默氏菌对氟喹诺酮药物的主动外排作用

为研究鸭疫里默氏菌对诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星等氟喹诺酮类药物的主动外排机制,测定25株鸭疫里默氏菌临床分离株对氟喹诺酮类药物的最低抑菌浓度（M IC ）,同时测定加入主动外排抑制剂碳酰氰间氯苯腙（CCCP）后的MIC ,对二者进行比较分析。结果表明,对5种氟喹诺酮类药物耐药的鸭疫里默氏菌比例分别为84％、72％、76％、68％和36％;76％的菌株同时耐受2种及以上药物。CCCP可以使耐药菌对除左氧氟沙星外药物的敏感性增加,提示主动外排在鸭疫里默氏菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制中发挥重要的作用。     

鸭疫里默氏杆菌AS87-01740基因生物信息学分析及其原核表达

[目的]了解鸭疫里默氏杆菌AS87-01740基因分子生物学特性,确定其编码蛋白抗原性,为鸭疫里默氏杆菌亚单位疫苗研发提供新的靶标抗原选择.[方法]采用PCR克隆鸭疫里默氏杆菌AS87-01740基因,以DNASTAR和NCBI数据库分别进行基因生物信息学分析;利用pCold-TF原核表达载体在大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达,并分别以SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白的表达形式及其抗原特异性.[结果]从鸭疫里默氏杆菌基因组扩增获得的AS87-01740基因编码框全长618 bp,编码205个氨基酸,理论分子量约21.87 kD,理论等电点(pI)8.2,正电荷氨基酸总数17个,负电荷氨基酸总数16个.AS87-01740蛋白序列在同种属分离株中,与2型血清型分离株(11845、YM、GD和CH-2)有很高的相似性(>99%),与1型血清型分离株(CH-1和CH-3)的相似性为92%;在不同种属中,与金黄杆菌(Chryseobacterium sp.)、动物溃疡伯格菌(Bergeyella zoohelcum)和脑膜炎败血伊丽莎白菌(Elizabeth-kingia meningosepticum)的相似性分别为61%、60%和57%.经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得的融合蛋白分子量约77 kD,以可溶性表达形式为主.Western blotting检测结果表明,融合蛋白能与鸭疫里默氏杆菌阳性血清发生特异性免疫反应.[结论]AS87-01740基因编码蛋白在不同鸭疫里默氏杆菌分离株中具有很高的保守性,且能与其阳性血清发生特异性免疫反应,是研发鸭疫里默氏杆菌疫苗的潜在抗原.     

30味中药及其复方对鸭疫里默氏杆菌的体外抑菌作用

[目的]筛选出对鸭疫里默氏杆菌敏感的中草药及其复方。[方法]对分离鉴定的19株鸭疫里默氏杆菌用管碟法进行体外抑菌试验,研究30味常用中药及两个复方对其抑制作用。[结果]单味中药抑制作用的综合得分如下:黄连13分,黄柏9分,黄芩8分,苍术、丹皮、桔梗、金银花、连翘、玄参各6分,半枝莲、茯苓、虎杖、栀子各5分,半边莲、赤芍、马齿苋、生地、天花粉各4分,半夏、穿心莲、大黄、蛇舌草、鱼腥草各3分,白头翁、大青叶、丹参、附子、蒲公英、秦皮、知母各2分。方剂一和二分别得15和14分。[结论]部分中药对鸭疫里默氏杆菌的抑制作用不明显,两个复方对鸭疫里默氏杆菌均有一定的抑制作用。     

江西地区鸭疫里氏杆菌微生物学特性的研究

从江西省鸭鹅中分离到 6 0株鸭疫里氏杆菌 ,采用凝集试验和琼脂扩散试验对其血清型进行了鉴定 ,结果表明江西存在 5个血清型的鸭疫里氏杆菌 (2、JX1、JX2、JX3、JX4型 ) ,2、JX1、JX2型为目前江西地区主要流行的血清型。 80 %以上分离株对青霉素、痢特灵、氨苄青霉毒和氯霉素高度敏感 ,对阿米卡星、庆大霉素和链霉素耐药。不同血清型鸭疫里氏杆菌的培养特性较为一致 ,但部分生化特性存在较大差异     

PCR检测鸭疫里默氏菌的研究

对本研究室分离、鉴定并保存的42株鸭疫里默氏菌(包括8个血清型)、9株鸭源大肠杆菌和4株鸭源禽多杀性巴氏杆菌进行PCR扩增，结果所有的鸭疫里默氏菌均能扩增出809bp的特异性DNA片段，而鸭源大肠杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌均为阴性。试验证明以细菌DNA和全菌体分别作模板，对PCR的扩增结果无影响。经过优化的该PCR方法能检测出的最低DNA量为1pg。     

鸭疫巴氏杆菌的分离、鉴定及防制

从郑州、信阳等地鸭场的发病或死亡鸭的脑、心血、肝、脾等脏器中分离到 3株革兰氏阴性小杆菌 (HP1 、HP2 、HP3) ,经形态学检查、生化试验、血清学试验 ,3株分离菌被鉴定为I型鸭疫巴氏杆菌。药敏试验表明 ,分离株对蒽诺沙星等抗菌药物都较为敏感。     

鸭疫里默氏杆菌的分离与鉴定

对武汉周边地区的病鸭进行了病理剖检及细菌分离培养,并对分离的菌株进行了生化鉴定,最后确定此病为鸭疫里默氏杆菌(Riemerellaanatipestifer,RA)引起的。感染鸭为2～6周龄,RA易在病死鸭的肝脏、脾脏、血液等处分离到,特别是在脑组织中极易分离。该分离菌株的血清型鉴定结果为Ⅰ型RA,药敏试验结果显示对诺氟沙星高度敏感。     

用抑制性差减杂交筛选鸭疫里氏杆菌2型可能毒力基因

为寻找鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)可能的毒力基因,以鸭疫里氏杆菌2型(RA2)毒力株RAF2及弱毒力株LY-58为研究对象,通过抑制性差减杂交(SSH)试验,从RAF2株中获得14个特异性差异基因片段。经同源性分析,其中6个差异基因片段分别与外膜蛋白、ATP结合蛋白、转录调节因子、氨基酸通透酶、胞外蛋白编码基因有同源性,为可能的毒力基因;4个差异基因片段与功能未知蛋白或假定蛋白编码基因有关;另外4个差异基因片段未找到同源序列。利用PCR对上述10个可能与毒力相关的差异基因片段在13株分别属于8个不同血清型RA中的分布进行了检测,结果表明除8型外,以上差异基因片段在RA中分布普遍。     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及耐药性研究

为了解广西鸭疫里默氏杆菌病的发病情况、流行血清型及其病原菌株的耐药情况,从广西不同地区20多个发病鸭场的病料中分离出36株疑似鸭疫里默氏杆菌（RA）,经细菌培养特性、形态特征、生理生化特性鉴定,确定为RA。采用玻片凝集试验和试管凝集试验进行血清型鉴定,结果表明,广西RA分属于1型、2型和3型3个血清型。药敏试验结果表明,有70.0%以上RA分离株对头孢三嗪、先锋霉素V、头孢西丁、头孢拉定、呋喃妥因、氟苯尼考等6种抗生素高度敏感,但所有分离株对23种抗生素均存在耐药性,其中对强力霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那的耐药菌株比例达到100.0%。