油菜籽饼粕中硫苷的酶解条件优化及降解产物分析

【目的】研究影响油菜籽饼粕中硫代葡萄糖苷在黑芥子酶作用下定向转化为异硫氰酸酯的因素,确定最佳酶解条件,探索外加黑芥子酶对硫代葡萄糖苷降解产物组分和含量的影响,为油菜籽饼粕的综合利用提供基础。【方法】测定4种反应体系中黑芥子酶活性,确定酶解反应缓冲体系。以油菜籽饼粕中异硫氰酸酯总量为指标,单因素结合正交设计研究不同料液比、时间、温度、pH、抗坏血酸添加量对外加黑芥子酶降解油菜籽饼粕中硫代葡萄糖苷转化为异硫氰酸酯的影响,优化工艺参数,获得最佳酶解条件。采用二氯甲烷为提取剂,真空浓缩得到油状降解产物,利用气相色谱-质谱（GC-MS）联用鉴定外加黑芥子酶和内源黑芥子酶酶解产物成分,分析产物相对含量。【结果】4种缓冲体系中,在柠檬酸-磷酸盐缓冲液中测得黑芥子酶活性最高,在相同条件下,外加黑芥子酶的活性显著高于内源黑芥子酶活性;外源黑芥子酶添加量大于油菜籽饼粕量的20%,异硫氰酸酯生成量无显著增加,选择外源黑芥子酶添加量为油菜籽饼粕量的20%;正交优化得到最佳酶解条件为：料液比1﹕15,pH为6.0,反应温度为50℃,抗坏血酸添加量为0.005 mg•g-1,反应时间为1 h,异硫氰酸酯含量达到1.799 mg•g-1,是油菜籽饼粕内源黑芥子酶降解硫代葡萄糖苷生成异硫氰酸酯产物总量的7.6倍。外加黑芥子酶生成异硫氰酸酯含量显著高于内源黑芥子酶降解硫苷生成异硫氰酸酯含量,但两者异硫氰酸酯含量随反应条件变化趋势一致。GC-MS鉴定外加黑芥子酶有7种酶解产物,相对含量在产物的67%以上,含有1种腈类,2种噁唑烷酮和4种异硫氰酸酯。产物中异硫氰酸酯为烯丙基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯、环戊基异硫氰酸酯和苯乙基异硫氰酸酯;其中丁烯基异硫氰酸酯的含量最高,占酶解产物总量的26.77%。腈类产物为苯丙腈;2种噁唑烷酮为致甲状腺肿素和2,1-苯丙噁唑烷酮。内源黑芥子酶降解硫代葡萄糖苷的产物中检测到4种产物且含量相对较少。【结论】外加黑芥子酶能有效增加油菜籽饼粕中异硫氰酸酯生成量,确定了油菜籽饼粕中硫代葡萄糖苷的最佳降解条件。鉴定出降解产物的主要成分,异硫氰酸酯有4种,其中丁烯基异硫氰酸酯含量最高。     

西兰花茎中硫苷的提取工艺研究

[目的]以西兰花茎为研究对象,研究硫代葡萄糖苷的最佳提取条件,从而提高西兰花茎的综合利用价值。[方法]试验以乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间为因素,通过单因素和正交试验,得到硫苷的最佳提取条件。[结果]本试验得出在乙醇浓度为75%、料液比为1∶15、提取温度为70℃、提取时间为30min的条件下硫苷的提取量最大。[结论]提取量可达601.24μmol·g~(-1)。     

油菜饼中硫代葡萄糖苷含量的遗传及其低含量品种的选育

一芸苔属植物中的硫代葡萄糖苷主要有5种(A.Gland,1980),即:黑芥子硫苷酸钾(Sinigrin),葡萄糖苷(gluconapin),芸苔葡萄糖苷(glucobrassica),甲状腺素(Progoitrin)和napoleifierin。这五种硫代葡萄糖苷均属烯烃类硫代葡萄糖苷。硫代葡萄糖苷本身无毒,但它在一组芥子酶的水解作用下,产生恶唑烷硫铜(OZT,主要是甲状腺素和napoleiferin的裂解产物)、异硫氰酸盐(主要是黑芥子硫苷硫钾、葡萄糖苷和芸苔葡萄糖苷的裂解产物)和氰     

西兰花籽中完形硫代葡萄糖苷的HPLC-MS-MS鉴定

[目的]建立一种简单、快速、经济的鉴定蔬菜中硫代葡萄糖苷的方法。[方法]用70％甲醇从西兰花籽中提取硫代葡萄糖苷,以甲酸作为离子调节剂,采用梯度洗脱的方法对提取物进行分离,并采用液相色谱-质谱-质谱联用技术对提取物成分进行鉴定。[结果]从西兰花籽中成功鉴定出8种硫代葡萄糖苷,其保留时间分别为5．9、7．7、8．8、9．5、13．6、16．0、19．3、28．6min,分子量分别为422、468、438、436、372、406、420、402;该鉴定方法所测样品不需经过脱硫等预处理,大大节省了试验时间,且样品需要量较少,试验效率较高。[结论]该研究建立了一种鉴定蔬菜中硫代葡萄糖苷的新方法。     

鳕鱼皮胶原蛋白酶解液的制备及抗氧化研究

[目的]利用酶解法从鳕鱼皮中提取胶原蛋白肽,研究其抗氧化能力。[方法]以鳕鱼鱼皮为原料,采用胃蛋白酶进行酶解,通过正交试验研究pH、水解温度、加酶量及水解时间4个因素对酶解鳕鱼皮的影响,确定胃蛋白酶酶解鳕鱼皮的最佳条件,并采用试剂盒法对酶解产物进行抗氧化活性研究。[结果]各因素对酶解鳕鱼皮的影响为水解时间〉水解温度〉加酶量〉pH,胃蛋白酶酶解鳕鱼皮的最佳工艺条件为：加酶量4%、温度37℃、pH 3、时间3 h。此条件下,蛋白质水解度可达到6.91%。胃蛋白酶酶解鳕鱼皮得到的胶原肽粗品具有一定的抗氧化能力,并对超氧阴离子自由基具有较强的清除作用。[结论]该研究为开发新的抗氧化剂提供科学参考。     

罗汉果蛋白酶对酒糟中蛋白质的水解作用研究

[目的]为酒糟中蛋白质的水解提供新方法。[方法]采用酶解法,用罗汉果蛋白酶提取酒糟中的蛋白质,测定酶解酒糟上清液中蛋白质的含量,计算单位体积蛋白质增量。在加酶量、酶解温度、酶解时间、pH值单因子试验的基础上,采用正交试验确定酒糟中蛋白质的最佳提取条件。[结果]各因素对单位体积蛋白质增量的影响依次为:pH值>水解时间>加酶量>水解温度。酶解酒糟的最佳条件为:pH值8.0,水解时间10 min,加酶量0.75 ml/100 g湿酒糟,温度65℃。在最佳条件下,单位体积蛋白质增量可达98.78%。[结论]该研究确定了酶解法提取酒糟中蛋白质的最优条件,使酶解上清液中蛋白质含量增加了近1倍。     

鲤鱼鱼鳞蛋白的酶解制备工艺及其抗氧化活性

[目的]确定鲤鱼鱼磷蛋白的酶解制备工艺,并分析所得的鱼磷抗氧化肽的抗氧化性能。[方法]以鲤鱼鱼鳞为原料,选用胰蛋白酶考察其加酶量、反应温度、酶解时间、pH、底物浓度等因素对鱼鳞蛋白水解程度的影响,用单因素及正交试验的方法优选出鱼鳞蛋白酶解的最佳条件并测定其抗氧化活性。[结果]试验得到鲤鱼鱼磷抗氧化肽酶法制备的最佳工艺条件为pH 8.4、酶解温度45℃、加酶量4000 U/g、酶解时间3 h、底物浓度15%,此条件下得到的鱼磷抗氧化肽水解度较佳(29.97%),抗氧化能力较好。[结论]胰蛋白酶有溶解鲤鱼鱼鳞蛋白的能力,并且酶解产物的抗氧化活性与水解度有关。     

胰蛋白酶水解凤凰衣蛋白的制备工艺研究

[目的]确定胰蛋白酶水解凤凰衣蛋白的最佳水解条件。[方法]通过交联葡聚糖凝胶柱对标准品谷胱甘肽(M307)与细胞色素C(M12300)混合物的过柱情况,通过扫描,确定过柱液在波长230 nm处有最大吸收,在波长230 nm处测吸光度绘制标准曲线,确定分子量为307~12 300的分子多肽分布。以其为依据,以目的肽段得率作为指标,分别考察了酶与底物比例、酶解时间、pH、温度对胰蛋白酶酶解凤凰衣反应的影响,通过正交试验确定了胰蛋白酶酶解凤凰衣蛋白的最佳工艺条件。[结果]通过试验确定酶解反应的最佳水解条件,在此条件下,可得到最大的目的肽得率。[结论]胰蛋白酶酶解凤凰衣蛋白的最佳工艺条件:酶与底物比例为3%,pH值为8.0,水解温度为55℃,反应时间为3.0 h。此时目的肽段得率为最高值1.845%。     

Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究

[目的]研究Alcalase蛋白酶对大豆分离蛋白的水解作用及水解物的性质。[方法]通过单因素试验,研究pH值、温度、酶浓度、底物浓度等因素对Alcalase蛋白酶酶解大豆分离蛋白的影响,通过正交试验确定Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解条件。[结果]Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解条件是pH值8.0、温度60℃、酶浓度1000U/g、底物浓度3%,水解时间2h,大豆分离蛋白水解度为46.13%。[结论]酶解后大豆分离蛋白的水解度达到了制备大豆多肽的要求。     

改善大米蛋白溶解性的研究

[目的]研究Alcalase蛋白酶对大米蛋白的水解作用以改善大米蛋白的溶解性.[方法]通过单因素试验,研究pH、温度、酶浓度、底物浓度等因素对Alcalase蛋白酶酶解大米蛋白的影响,通过正交试验确定Alcalase蛋白酶水解大米蛋白的最佳水解条件.[结果]Alcalase蛋白酶水解大米蛋白的最佳水解条件是pH 8.0、温度55℃、酶浓度1 200 U/g、底物浓度4％、水解时间2h,此条件下大米蛋白的溶解度为71.25％.[结论]酶解后大米蛋白的溶解度显著提高.     

西兰苔籽中异硫氰酸盐鉴定及诱导OVCAR-3细胞凋亡研究

[目的]研究西兰苔籽中异硫氰酸盐的抗肿瘤活性。[方法]利用GC—MS联甩仪对西兰苔籽中的异硫氰酸盐进行了分析和鉴定,并通过MTT试验和相差显微镜观察研究了其抗肿瘤活性。[结果]通过GC—MS分析从西兰苔籽提取物中成功鉴定出5种异硫氰酸盐,占挥发性物质的80％。体外细胞毒性试验表明,异硫氰酸盐能有效抑制卵巢癌细胞OVCAR-3的生长,且抑制率随药物浓度的增大而增大,呈明显的剂量关系。异硫氰酸盐浓度为78．3μg/ml时,对OVCAR-3细胞生长的抑制率为50％。对照组的OVCAR-3细胞生长良好,低浓度加药组（10、30、60μg/ml）OVCAR-3细胞的形态和数目发生了变化,圆形脱壁细胞逐渐增多。随着药物浓度的继续增加,OVCAR-3细胞的形态变得很不规则,凋亡小体出现。[结论]该试验为我国天然抗癌药物研究奠定了基础。     

胰蛋白酶提取香菇可溶性含氮化合物的研究

[目的]研究各种蛋白酶水解提取香菇可溶性含氮化合物,优化筛选胰蛋白酶酶解条件。[方法]采用各种食品级蛋白酶对香菇进行酶解,选取较优蛋白酶酶解条件,并结合螺杆挤压预处理提取香菇可溶性氮。[结果]胰蛋白酶提取香菇可溶性含氮化合物的最佳酶解条件为料液比1∶11 g/ml,酶解时间1.5 h,酶解温度50℃,酶量0.5%。在最优酶解条件结合螺杆挤压物理方法,可使香菇可溶性氮释放率及氨基态氮含量提高94.94%、82.94%。[结论]研究可为食用菌鲜味物质的提取利用提供参考。     

长白山林蛙肉酶解条件的研究

[目的]优化林蛙肉酶解工艺。[方法]以长白山雄性林蛙肉为原料,选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶对其进行水解。通过单因素试验和正交试验筛选最佳酶解条件。[结果]酶解效果最好的是中性蛋白酶,其最适酶解条件为pH值6、加酶量7%、底物浓度55%,水解时间110min、温度50℃。在此工艺条件下,水解度达55.02%。[结论]该酶解工艺用酶少、分解快,适合长白山林蛙肉的酶解 更多还原     

罗布麻叶总黄酮类化合物的酶解-溶剂提取工艺研究

[目的]研究了酶法提取罗布麻叶总黄酮的工艺,为罗布麻叶总黄酮的提取提供参考。[方法]罗布麻叶先以纤维素酶酶解预处理后再用溶剂乙醇提取其中的总黄酮。分别考查了酶解各因素如酶解pH值、酶用量、酶解温度、酶解时间以及溶剂乙醇的浓度对罗布麻叶总黄酮得率的影响,确定了罗布麻叶总黄酮的最佳提取工艺条件。[结果]罗布麻叶总黄酮的最佳提取工艺条件为:pH值5,酶用量3mg/g,酶解温度45℃,酶解时间2 h,乙醇浓度50%。该条件下总黄酮得率达到4.6%。[结论]以纤维素酶酶解预处理后再用溶剂乙醇提取罗布麻叶中的总黄酮得率明显提高。     

碱性蛋白酶水解文冠果蛋白酶的条件研究

[目的]研究碱性蛋白酶水解文冠果蛋白的最佳工艺条件。[方法]选取底物浓度、pH、温度、酶用量和水解时间为影响因素,以文冠果蛋白的水解度作为评价指标,进行单因素分析,并以此为依据采用响应曲面分析法确定碱性蛋白酶的最佳水解条件,然后对最佳条件进行验证试验。[结果]碱性蛋白酶水解文冠果蛋白的最佳工艺条件为底物浓度5%,加酶量4%,pH 9.0;在此优化条件下,水解度为19.75%。[结论]为文冠果蛋白的研究开发提供了技术参数。     

豇豆饮料加工中酶解条件的研究

[目的]研究豇豆饮料加工过程中酶解工艺,为豇豆饮料工业化生产提供理论依据和技术参数。[方法]采用L9(34)正交试验对豇豆饮料酶解条件进行优化。[结果]α-淀粉酶酶解最适温度60℃,pH 7.0,添加量0.4%,时间60 min。[结论]采用该酶解条件,可以得到颜色呈微红色,具有豇豆应有的清香和滋味,香气协调,口感较好,且液体呈均匀乳液状,具有良好的流动性的豇豆饮料。     

酶解法提取红枣膳食纤维的工艺研究

[目的]探讨红枣膳食纤维的酶法提取工艺。[方法]以陕北木枣为试材,采用酶解法提取红枣中的膳食纤维。通过对α-淀粉酶、胰蛋白酶和糖化酶的用量的正交试验,分析其对膳食纤维提取率的影响,确定其最适用量,进一步对α-淀粉酶酶解的温度、pH和时间进行正交试验,确定其最佳酶解条件。[结果]3种酶用量中,对膳食纤维提取率的影响最大的是α-淀粉酶,其最适用量为:α-淀粉酶0.4%、胰蛋白酶0.6%、糖化酶0.8%。α-淀粉酶的酶解因素中对提取率的影响依次为温度﹥时间﹥pH,其最佳酶解条件为:温度65℃,时间70 min,pH 6.0。在此条件下提取的红枣膳食纤维的持水力和膨胀力分别为854.92%和13.98 ml/g。[结论]该研究为酶法提取红枣中膳食纤维工艺的产业化提供参考依据。     

大豆蛋白复合酶解法研究

[目的]研究大豆蛋白复合酶解法的最佳工艺条件。[方法]以大豆粉为原料,采用复合酶解法研究了大豆蛋白水解度随酶解时间、加酶量、复合酶加酶间隔时间等的变化规律。[结果]大豆蛋白复合酶解法的最佳工艺条件为温度45℃,pH7.5,液固比7∶1,加酶量各0.2 g,反应时间8 h,间隔加酶时间3 h。[结论]此工艺对大豆蛋白的工业化生产具有积极的参考价值。     

响应面法优化鳙鱼鱼肉蛋白的酶解工艺

[目的]为鳙鱼及其他淡水鱼鱼肉蛋白资源的高价值利用提供指导。[方法]首先比较6种不同蛋白酶水解鳙鱼鱼肉蛋白的能力,找出酶解能力最高的蛋白酶。通过响应面分析法优化酶解鳙鱼蛋白的工艺条件,探讨酶解过程中酶底物浓度比（[E]/[S]）、pH值和温度对酶解物水解度的影响。并分析酶解物的氨基酸组成。[结果]碱性蛋白酶水解鳙鱼鱼肉蛋白的能力最强,蛋白回收率最高。其酶解鳙鱼鱼肉蛋白的最佳工艺条件为：[E]/[S]1.7%、pH值9.7,温度57℃。鳙鱼鱼肉蛋白在该条件下水解度理论值为25.24%。氨基酸组成分析结果表明,该工艺下所得酶解物的氨基酸组成与鳙鱼鱼肉蛋白的氨基酸组成差别不大,酶解物很好地保持了鱼肉蛋白的特定氨基酸模式。[结论]优化了镛鱼鱼肉蛋白的酶解工艺。