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1.
《山东农业大学学报(自然科学版)》2019,(5)
为了开发一种适合于试纸条法快速检测南美白对虾主要过敏原原肌球蛋白(Tropomyosin,Tm)的简单快速的样品前处理方法。本实验设计了8种预处理方法,并通过BCA蛋白定量、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹和层析试纸条检测比较分析了8种方法的可行性。结果发现,采用方法 8制备的样品提取液蛋白质浓度适中(2.5 mg/mL),杂蛋白较少且对磁性纳米探针标记的免疫层析检测干扰少,较适合于现场快速检测。本研究优化的虾类过敏原Tm的样品前处理方法为:用丙酮抽提虾肉至无色,加入20 m M Tris-HCl(pH 9.2)匀浆30 s,超声处理10 min,加热5 min,冷却后用迷你离心机离心10 min,所得上清液即为样品。 相似文献
2.
【目的】研制魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,为魏氏梭菌病的快速诊断提供新方法。【方法】采用分子生物学方法制备魏氏梭菌α毒素,将其免疫家兔制备多克隆抗体。用制备的抗魏氏梭菌α毒素多克隆抗体作为胶体金标记抗体和检测线上的捕获抗体,制备魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性和重复性进行检测。用制备的魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条对临床样品进行检测,比较其检测结果与PCR检测结果的符合率。【结果】成功制备了魏氏梭菌α毒素多克隆抗体。成功研制了α毒素快速诊断金标试纸条,其检测线上抗体的最适包被质量浓度为0.06 μg/mL。研制的试纸条仅与魏氏梭菌α毒素发生反应,且不同批次的试纸条重复检测结果无差异,表明试纸条具有较高的特异性和重复性;该试纸条最低可检测1.40 mg/mL的毒素量,与PCR方法测得结果符合率为80.77%,基本能满足实际应用要求。【结论】成功研制了魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,该试纸条具有快速、特异、敏感、稳定等优点,适用于对魏氏梭菌病进行普查和检疫,具有良好的应用前景。 相似文献
3.
为建立一种快速检测A型塞内卡病毒的免疫层析方法,本研究制备了SVA VP2蛋白的单克隆抗体,将单克隆抗体1D6作为金标记抗体,以单克隆抗体2C2和羊抗鼠Ig G分别作为检测抗体和质控抗体,用双抗体夹心原理制备了试纸条。结果表明,本研究所制备的2株单克隆抗体均具有良好的免疫活性,1D6和2C2识别不同抗原表位且具有较高的亲和力。基于单克隆抗体1D6和2C2制备的免疫层析试纸条能特异性的检测A型塞内卡病毒且与PRRSV、FMDV和SFV无交叉反应;病毒的最低检测限为4.8×102 TCID50/m L且具有良好的重复性;该方法与RT-PCR方法检测临床样品的一致率为100%。综上所述,本研究制备的SVA胶体金免疫层析试纸具有良好的检测性能,为临床上SVA的防控提供了快速、简便的方法。 相似文献
4.
《福建农业学报》2015,(6)
用自制的微囊藻毒素(Microcystin-LR,MC-LR)单克隆抗体与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联物为胶体金标记底物研究MC-LR胶体金免疫检测技术。制备各种粒径的胶体金,最终确定粒径30nm的胶体金作为标记抗MC-LR单克隆抗体效果最佳;制备半抗原MC-LR与KLH的偶联物;在硝酸纤维素膜上包被MC-LR与KLH的偶联物作为检测带、包被羊抗鼠IgG作为质控带,建立快速检测MC-LR的免疫层析试纸条方法,该方法在3~5min即可目测判断结果,灵敏度为2ng·mL-1;依据工艺流程,发明制备了微囊藻毒素MC-LR的免疫层析快速检测卡,该卡检测样本中的微囊藻毒素MC-LR含量阈值为2ng·mL-1。 相似文献
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6.
为建立快速、简便检测猪瘟病毒(CSFV)抗体的方法,本研究采用胶体金和量子点免疫层析技术,将纯化的重组CSFV E2蛋白作为捕捉抗原,以纯化的抗CSFV E2蛋白多克隆抗体和HRP兔抗猪IgG分别包被于硝酸纤维素膜上,作为质控线(C线)和检测线(T线),优化反应条件,制备免疫层析试纸条,用于临床检测。结果表明,制备的2种试纸条都可用于检测CSFV标准阳性血清,使用不同批次试纸条进行检测,结果无差异。2种试纸条与CSFV阳性血清反应呈阳性,与伪狂犬病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和圆环病毒2型(PCV2)反应呈阴性;胶体金试纸条在临床样品中阳性检出率为84.38%(81/96),与CSFV抗体检测ELISA试剂盒检测阳性符合率为92.05%(81/88);量子点试纸条阳性检出率为87.50%(84/96),与ELISA试剂盒检测阳性符合率为95.45%(84/88)。本研究制备的2种试纸条都具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性。 相似文献
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快速检测联苯菊酯的胶体金层析试纸条研制 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]采用免疫胶体金技术,建立一种快速检测联苯菊酯的试纸条方法。[方法]利用有机合成方法制备了联苯菊酯半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫抗原,利用人工免疫的方法获得其单克隆抗体,通过酶联免疫法对制备的单克隆抗体的性能进行了验证。联苯菊酯胶体金层析试纸条是利用单克隆抗体标记胶体金,并将联苯菊酯抗原与羊抗鼠Ig G分别喷制到硝酸纤维膜上,与样品垫、吸水垫组装在PVC衬板上制备而成。[结果]联苯菊酯胶体金层析试纸条检测限为500~800μg/kg,具有速度快、简单等优点。此外,该试纸条与大部分的拟除虫菊酯没有明显的交叉反应,利用该试纸条可实现对苋菜中联苯菊酯添加试验的准确判定。[结论]胶体金试纸条方法具有前处理简单、检测速度快、可以肉眼判断结果等优点,该试纸条有望实现对果蔬中联苯菊酯残留的快速筛查。 相似文献
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胶体金免疫层析法快速诊断犬弓首蛔虫病 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]建立了一种能快速诊断犬弓首蛔虫病方法。[方法]以胶体金标SPA和犬弓首蛔虫(Toxocara canis)抗原蛋白制备免疫层析试纸条,并对其灵敏度和特异性进行评价。采用该试纸条和虫检法对200份犬血清样本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。[结果]组装的犬胶体金免疫层析试纸条的最低检测线为0.20μg/ml,灵敏度很好;与犬的其他寄生虫病的阳性血清进行反应,均成阴性;对200份犬血清样本的阳性检出率为10%,而虫检法的阳性检出率为2%。[结论]胶体金免疫层析法诊断犬弓首蛔虫病具有操作简便、灵敏度高、特异性强的优点,可用于犬弓首蛔虫病的快速检测。 相似文献
10.
本研究将荧光纳米颗粒与氯霉素单克隆抗体共价偶联在一起,用该颗粒代替常用的金标颗粒标记氯霉素单克隆抗体,以竞争法作为反应模式来制备免疫层析试纸条。在紫外灯下观察免疫层析试纸条上经免疫反应而产生的质控线和检测线上的荧光信号,利用荧光强度来半定量检测动物源性食品中的氯霉素残留。所制备的检测氯霉素的免疫层析试纸条只与氯霉素有交叉反应,与非目标检测物之间没有交叉反应。该试纸条的肉眼检测灵敏性为0.5ng/mL,满足相关检测标准要求。通过比较检测线和质控线之间的亮度,能够对氯霉素进行半定量检测。本研究建立的用于氯霉素残留检测的免疫层析法,具有简便、快速、灵敏度高的特点,有广阔的应用前景。 相似文献
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制备抗沙眼衣原体(CT)单克隆抗体,建立沙眼衣原体的胶体金免疫层析快速检测方法。采用纯化沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)免疫Balb/c小鼠,选取高效价的免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,ELISA检测筛选分泌抗MOMP单克隆抗体(McAb)的细胞株并进行相关鉴定。共获得分泌IgG1,IgG2b和IgM的3株单克隆抗体杂交瘤细胞株。纯化的单克隆抗体与鹦鹉热衣原体、肺炎衣原体、肺炎支原体均无交叉反应。通过位点分析选择配对良好的两株McAb,制备检测CT的双抗体夹心法免疫层析试纸条。制备的胶体金试纸条对MOMP的最低检出值可达50 ng·mL-1。 相似文献
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[目的]制备一种特异、快速、便捷的检测虾及鱼肉中恩诺沙星残留的胶体金免疫层析试纸条。[方法]用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金标记恩诺沙星多克隆抗体,喷于试纸的金标垫。将ENR-OVA(恩诺沙星和卵清白蛋白的偶联物)和纯化的羊抗兔IgG分别喷于试纸的T(检测线)处和C(质控线)处,通过挑选试纸条材料和调试工艺参数,并最终组装成试纸条。[结果]制备的试纸条检测体系方法的检出限为0.9 ng/ml。试纸条对虾及鱼肉中的恩诺沙星残留的检出限分别为5和10 ng/g。[结论]制备的恩诺沙星胶体金检测试纸适用于现场实际样品恩诺沙星残留水平检测,具有良好的应用前景。 相似文献
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为能够快速检测水产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus),本研究首先制备了副溶血性弧菌多克隆抗体,然后将其标记在磁珠上形成特异性磁纳米探针,再分别以副溶血性弧菌多克隆抗体和山羊抗兔Ig G作为检测线T线和质控线C线,建立了双抗夹心模式的磁性免疫层析试纸条。利用正交试验设计的方法,从Tween-20、BSA、蔗糖3种因素对层析体进行优化分析,结果表明这3个因素对层析检测的影响效果为Tween-20BSA蔗糖;当Tween-20含量为5%(V/V),BSA浓度为0.2 mg/m L,蔗糖浓度为0 mg/m L时,阳性信号最强,检测的准确性和灵敏度达到最优,通过单纯的肉眼观察,可在5~10 min实现1.6×104CFU/m L副溶血性弧菌的检测,通过T线所捕获磁信号的定量检测,可在30~40 min内实现4.1×103CFU/m L副溶血性弧菌的检测,为今后食源性致病菌的快速鉴定、诊断和检测提供了一种新途径。 相似文献
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为开发快速检测烟草(Nicotiana tabacum L.)中的甲霜灵残留方法,以自制抗原、抗体为材料,研制一种胶体金免疫层析检测试纸条,并以甲霜灵原料合成半抗原,进一步制备抗原免疫后制备甲霜灵单克隆抗体。结果表明,纸条检测限对干烟草为1.5 mg/kg,鲜烟叶为1.0 mg/kg,与其他药物无交叉反应,且与色谱法比较符合率为98%,假阳性率为2.3%。甲霜灵残留试纸条检测烟草时样品处理简单、检测时间短、无需专业人员、经济适用等特点,能够实现烟草快速、准确、批量检测,可为烟草中甲霜灵残留检测提供技术支持。 相似文献
17.
调查并比较了野生横纹东方鲀(Takifugu oblongus)与养殖的菊黄东方鲀(Takifugu flavidus)、暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)的毒性。随机选取17尾野生横纹东方鲀并用2%乙酸两次煮沸法提取各组织中河鲀毒素TTX,超滤离心去除杂蛋白,之后采用本实验室制备的免疫磁珠层析试纸条做定性检测,并对筛选出来的典型样本用国标小鼠生物法定量检测毒素含量与定性检测作对照,分析对比各组织TTX含量。野生横纹东方鲀肌肉和精巢TTX含量在0~7μg/g组织,由于个体差异处于无毒或弱毒水平;肝脏和卵巢TTX含量在4~400μg/g组织范围内,属于强毒水平;养殖菊黄东方鲀和暗纹东方鲀各组织均处于无毒水平。 相似文献
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[目的]采用免疫胶体金技术,建立了一种快速检测玉米赤霉醇的试纸条方法。[方法]利用有机合成方法,研制了一种玉米赤霉醇半抗原,将其载体蛋白偶联得到免疫抗原,并通过人工免疫的方法获得单克隆抗体。通过酶联免疫法对制备的单克隆抗体的性能进行了验证。玉米赤霉醇层析试纸条是利用单克隆抗体标记胶体金,其原理是玉米赤霉醇抗原和羊抗鼠Ig G分别喷到自制的膜(硝酸纤维)上,然后将样品垫、吸水垫分别放置在PVC板上,再制成试纸条。[结果]试纸条检测限可达0.5~1.0μg/kg,具有速度快、简单等优点。此外,该试纸条与大部分的玉米赤霉醇没有明显的交叉反应。[结论]利用该试纸条可实现对生鲜乳中玉米赤霉醇添加试验的准确判定。该试纸条有望实现对生鲜乳中玉米赤霉醇残留的快速筛查。 相似文献
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免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗 总被引:6,自引:0,他引:6
刘见 《上海交通大学学报(农业科学版)》2004,22(4):350-354
试验选取自身蛋白制备克盐酸伦特罗克伦特罗载体抗原,免疫动物后产生高效价的特异性抗体,纯化抗体与胶体金结合成免疫金,制备成简易的检测试纸条。通过检测试纸条敏感性、保存期、金标抗体工作浓度选择、操作方法对比、实验检测及与单抗金标试纸条平行检测等试验,证明建立的免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗具有实用性、可靠性和稳定性。自身全血清作载体可使抗盐酸克伦特罗的ELISA效价高达4万以上。免疫金试纸法对盐酸克伦特罗的最小检测量为40ng·mL-1,试纸条在室温保存150d不影响检测结果。实验检测86份ELISA试剂盒阴性样品和42份阳性样品,其符合率分别为100%和95.2%。市售单抗金标试纸条检测结果与ELISA法的阳性符合率为95%(19/20)。 相似文献
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《江苏农业科学》2016,(11)
为建立快速、准确、简便的检测气肿疽的胶体金免疫层析试纸条,以免疫层析法为指导,根据抗原-抗体的特性,建立了不需要再加入任何检测试剂且快速简便的检测方法。结果表明,胶体金与该单抗的最佳结合量为30μg/m L,最佳pH值为8.4,最佳NC膜为Millipore HFB1350220型。将纯化的气肿疽梭菌多抗及羊抗鼠IgG分别以1∶4和1∶8的稀释倍数喷于硝酸纤维素膜的T线和C线。对胶体金诊断试纸条进行验证,敏感度高,可检测到的最低抗原量为1×10~5CFU/m L,特异性强、无假阳性与交叉反应现象、有较好的稳定性。本研究旨在建立快速、准确、简便的检测气肿疽的胶体金免疫层析试纸条。 相似文献