检测猪瘟病毒胶体金和量子点试纸条的初步研制

为建立快速、简便检测猪瘟病毒(CSFV)抗体的方法,本研究采用胶体金和量子点免疫层析技术,将纯化的重组CSFV E2蛋白作为捕捉抗原,以纯化的抗CSFV E2蛋白多克隆抗体和HRP兔抗猪IgG分别包被于硝酸纤维素膜上,作为质控线(C线)和检测线(T线),优化反应条件,制备免疫层析试纸条,用于临床检测。结果表明,制备的2种试纸条都可用于检测CSFV标准阳性血清,使用不同批次试纸条进行检测,结果无差异。2种试纸条与CSFV阳性血清反应呈阳性,与伪狂犬病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和圆环病毒2型(PCV2)反应呈阴性;胶体金试纸条在临床样品中阳性检出率为84.38%(81/96),与CSFV抗体检测ELISA试剂盒检测阳性符合率为92.05%(81/88);量子点试纸条阳性检出率为87.50%(84/96),与ELISA试剂盒检测阳性符合率为95.45%(84/88)。本研究制备的2种试纸条都具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性。     

2016—2018年四川地区猪流行性腹泻病毒流行病学调查与ORF3、S1部分基因序列分析

为分析四川地区猪流行性腹泻流行状况及分子遗传演化特征,对2016年6月至2018年6月收集的71份猪腹泻病例进行RT-PCR检测与相关的流行病学调查,并对其中4份阳性样品进行ORF3、S1基因的检测与序列分析。结果显示,近2年的发病高峰日分别在1月28日和2月11日,发病高峰期在12月至3月;猪场连年感染数量下降,新疫源地增加;ORF3基因可分为2个基因型,部分毒株发生少量碱基突变;从S1基因高变区段分型结果显示,2016年底至2018年初流行的PEDV毒株为GⅡ群,与目前流行的PEDV变异毒株在同一分支,同源性为92.8%~99.3%,碱基变异数量较大,与国内的经典疫苗株CV777亲缘关系较远,同源性为82.7%~87.3%,发病时期更集中,较传统PEDV有轻度后移。结果表明,四川地区规模化猪场PED发病率呈下降趋势,对于该病的防控取得初步成效。目前流行PEDV毒株有变异的趋势,为PEDV的防控奠定基础。     

母猪不同阶段免疫猪瘟对其繁殖性能的影响

为了比较"普免"和产后跟胎免疫这2种免疫接种方式对母猪繁殖性能的影响,该试验研究选取饲养管理规范、生产水平较高的乐山市某规模化猪场对近3年来的母猪配种分娩率、窝均总仔、窝均健仔、窝均死胎、木乃伊胎等进行了统计分析,对采取"普免"程序后2年内同时间段所配种的7 405胎次,作横向比较分娩率分别为90.23%和91.06%,差异不显著;同时纵向统计(即采取普免程序的2015年5月—2017年5月母猪所配种的7 405窝与跟胎免疫的2014年4月—2015年4月所配种的4 320窝)分娩率分别为90.37%和87.72%,提高分娩率2.65%。产后20 d免疫、妊娠1～30 d、31～60 d、61～90 d和91 d至分娩免疫的窝平总产仔数分别为12.21、12.19、12.17、12.07和12.10,差异不显著;窝平均活产仔率分别为95.17%、95.49%、95.89%、94.53%和95.37%,差异不显著。综合结果表明猪瘟传代细胞疫苗"普免"对母猪的分娩率、产仔数和产仔质量无显著影响,可以作为规模猪场母猪猪瘟免疫程序之一。     

裂谷热病毒两种PCR检测方法的建立及比较分析

裂谷热(RVF)具有较高的发病率与死亡率,极大危害着当地养殖业和生态系统的稳定。为建立一种能够快速有效检测裂谷热病毒(RVFV)的方法,本研究根据RVFV的保守序列设计了特异性引物与探针,分别建立了探针PCR和荧光PCR,并对这两种检测方法进行比较分析。结果显示,两种检测方法均不存在非特异扩增;最低检测浓度分别为1.03×10~(-2)拷贝/μL和1.03×10~0拷贝/μL,前者比后者有更高的灵敏度;探针PCR和荧光PCR组内和组间变异系数均小于3%。实验表明,探针PCR具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、准确度高、检测速度快等优点。因此,探针PCR是一种灵敏度和可靠性均较高的RVFV检测方法。