桉树枝瘿姬小蜂雌成虫体内可培养细菌分离鉴定及多样性分析

[目的]明确桉树枝瘿姬小蜂(Leptocybe invasa Fisher&La Salle)体内可培养细菌多样性,为利用微生物防治该害虫打下基础.[方法]利用传统的细菌分离培养与鉴定方法,结合16S rDNA测序和系统发育分析,对刚羽化的桉树枝瘿姬小蜂雌成虫体内可培养细菌进行多样性分析.[结果]从桉树枝瘿姬小蜂体内分离出11株细菌,经鉴定归类于3个门(厚壁菌门、放线菌门和变形菌门)3个纲(芽孢杆菌纲、放线菌纲和γ-变形菌纲)4个目(芽孢杆菌目、微球菌目、乳酸杆菌目和肠杆菌目)8个科(芽孢杆菌科、微杆菌科、葡萄球菌科、乳酸杆菌科、纤维单胞菌科、微球菌科、肠杆菌科和类芽孢杆菌科)8个属(芽孢杆菌属、微杆菌属、葡萄球菌属、片球菌属、纤维单胞菌属、微球菌属、埃希氏杆菌属和类芽孢杆菌属),其中,厚壁菌门(Firmicutes)6株,为优势类群;芽孢杆菌属(Bacillus)3株,为优势菌属.[结论]桉树枝瘿姬小蜂体内可培养细菌具有丰富的多样性.     

豆制品(茶干)中致腐菌的分离鉴定

以未灭菌真空包装的新鲜茶干为试验材料,培养使其腐败并分离纯化得到4株主要致腐菌。对其形态和菌落特征、生理生化特性进行了系统的研究,并进行了分类鉴定。初步判断曲为芽孢杆菌科芽孢杆菌属,df2为微球菌科葡萄球菌属,df3为链球菌科链球菌属,硝为瘤胃球菌科瘤胃球菌属。对主要致腐菌df1的16SrDNA与已知序列进行同源性比较,鉴定（1n为芽孢杆菌属苏云金芽孢杆菌,并命名为苏云金芽孢杆菌zhou-1。     

川味腊肉货架期间主要微生物的研究

为了解川渝两地传统腊肉货架期内主要微生物的菌相变化和种类构成,以本地市售的川味腊肉为研究对象,利用PCA平板、MRS平板、PSA平板、MSA平板分离了其在货架期内的优势微生物,并通过生理生化实验进行鉴定,以期更好地指导川味腊肉的加工和生产.结果表明:从腊肉中分离得到10株优势菌株,分别为肉葡萄球菌(S.carnosus)(2株),表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、腐生葡萄球菌(S.saprophytic)、乳酸乳球菌(L.lactis)、弯曲乳杆菌(L.curvatus)、肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)和凝结芽孢杆菌(B.coagulans).结论是腊肉产品货架期内优势菌是葡萄球菌和微球菌,其次是乳酸菌,假单胞菌和肠杆菌数量较少.     

魔芋膳食纤维固体饮料中优势菌的分离、初步鉴定及菌相分析

对魔芋膳食纤维固体饮料中的微生物进行分离及初步鉴定,同时对饮料生产环境背景菌进行调查,以此确定魔芋膳食纤维固体饮料中的优势菌,并对菌相成因进行分析。结果表明,6个批次样品共分离得到32株菌,其中革兰氏阳性芽孢短杆菌27株,革兰氏阳性芽孢长杆菌2株,革兰氏阴性长杆菌1株,霉菌2株。6个批次样品均未分离得到肠杆菌、葡萄球菌及乳酸菌。背景菌调查发现,饮料生产环境空气中共分离得到200株菌,其中103株为芽孢杆菌。从干燥车间接触表面分离得到9株菌,全部为芽孢杆菌。表明芽孢菌为魔芋膳食纤维固体饮料产品菌相优势菌,与其生产工艺及生产环境存在一定的关联性。     

天津海底吹填淤泥中可培养细菌对黑麦草种子萌发及植株生长发育的影响

天津海底淤泥中含有丰富的微生物资源,这些微生物随着天津港排淤及吹填造地过程进入陆地生态系统。为明确这些微生物对陆地草坪植物的影响,选择已经分离并鉴定的14株可培养细菌作为试材,研究了其对黑麦草种子萌发及植株生长的影响。结果表明:海底淤泥中的海水芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、简单芽孢杆菌和萎缩芽孢杆菌对黑麦草种子萌发及植株生长均有促进作用;丁香假单胞菌和特氏盐芽孢杆菌对黑麦草种子萌发无显著影响,但对黑麦草植株生长有促进作用;盐单胞菌、苏云金芽孢杆菌、西伯利亚微小杆菌和海洋芽孢杆菌对黑麦草种子萌发及植株生长的影响均不大;洋葱伯克霍尔德菌、巴氏芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和类芽孢杆菌对黑麦草种子萌发影响不显著,但对黑麦草植株生长有明显的抑制作用。本研究结果为开发利用海底淤泥中的微生物资源,进一步解决吹填造陆区域绿化难题提供了理论依据。     

芽孢杆菌抗菌作用研究

将纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌3种菌单菌发酵培养和两两混合发酵培养及三者混合发酵培养24 h和48 h后,提取上清液,即为抗菌粗提液。通过杯碟法检测上清液对猪丹毒、金黄色葡萄球菌、葡萄球菌、产气杆菌、大肠杆菌及巴氏杆菌6种菌的生长是否具有抑制作用及3种菌之间是否有抑制作用,以确定3种菌在发酵过程中是否产生抗菌物质以及哪个时期发酵产生的抗菌物质的抗菌作用更强。结果表明,3种芽孢杆菌的提取液对6种菌的生长都具有一定的抑制作用;发酵24 h的上清液比发酵48 h的上清液的抗菌作用更强;3种芽孢杆菌之间除地衣芽孢杆菌对枯草芽孢杆菌具有抑制作用外,其它的两两之间都没有抑制作用。     

柞蚕肠道菌群分析及产酶菌的筛选与鉴定

 【目的】研究柞蚕肠道菌群结构及产酶菌,探寻具有新的生理功能的微生物,用于研制微生态制剂,以提高柞蚕生产的叶丝转化率及抗病能力。【方法】采用培养法分离柞树叶饲喂的5龄柞蚕幼虫肠道细菌,通过生理生化特性结合16S rDNA系统发育分析,对其肠道细菌群落类型进行鉴定,采用筛选培养基筛选产纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶的菌株。【结果】获得的柞蚕肠道菌有芽孢杆菌、葡萄球菌、肠杆菌,其中以芽孢杆菌为主要菌群。芽孢杆菌是肠道菌中产纤维素酶、蛋白酶的主要菌群;葡萄球菌产蛋白酶能力较弱;肠杆菌不产酶。【结论】柞蚕肠道菌与家蚕肠道菌群结构相似,筛选出的产酶菌活性较高,可以制备微生态制剂用于蚕业生产。     

西式火腿保质期内主要细菌的分离和鉴定简

为了解西式火腿类产品(熏烤火腿)保质期内优势微生物的种类构成,对西式火腿类产品进行生产指导,以市售的几种具有代表性的西式火腿作为研究对象,利用PCA培养基、MRS培养基、MSA培养基等对熏烤火腿中的微生物进行检测、分离纯化,并通过生理生化实验对微生物进行初步鉴定.结果确定了6株细菌;依次为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans),地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides),清酒乳杆菌(Lactobacillus sake),乳酸乳球菌(Lactococcus lactis),腐生葡萄球菌(Staph saprophytics).结论是西式火腿保质期内以乳酸菌为主,其次是假单胞菌以及少量的葡萄球菌和微球菌.     

食用菌制种间空气中细菌杂菌对平菇菌丝生长的影响

从唐山市周边地区平菇栽培基地的制种间空气中分离筛选到4株严重抑制平菇菌丝生长的细菌杂菌菌株,微生物学鉴定结果显示,4株细菌分别为葡萄球菌(Staphylococcus)、短状芽孢杆菌(Bacillus brevis)、假单胞菌(Pseudomonas)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。其中,葡萄球菌对平菇菌丝的抑制程度最高,其次是假单胞菌和枯草芽孢杆菌,短状芽孢杆菌的抑制程度较低。     

西式火腿保质期内主要细菌的分离和鉴定

为了解西式火腿类产品(熏烤火腿)保质期内优势微生物的种类构成,对西式火腿类产品进行生产指导,以市售的几种具有代表性的西式火腿作为研究对象,利用PCA培养基、MRS培养基、MSA培养基等对熏烤火腿中的微生物进行检测、分离纯化,并通过生理生化实验对微生物进行初步鉴定.结果确定了6株细菌;依次为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans),地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides),清酒乳杆菌(Lactobacillus sake),乳酸乳球菌(Lactococcus lactis),腐生葡萄球菌(Staph saprophytics).结论是西式火腿保质期内以乳酸菌为主,其次是假单胞菌以及少量的葡萄球菌和微球菌.     

棉花内生菌筛选纯化及抑菌效果研究

内生菌是一类新的微生物资源,能够产生多种生物活性物质,具有重要的研究价值,开发前景广阔[8]。本文对新疆地区健康棉花根部[7-9]幼叶进行表面消毒灭菌、分离、纯化、鉴定的研究,初步了解棉花内90%的内生菌都为芽孢杆菌[1]。参照《常见细菌鉴定手册》对菌株的属种及其形态、培养性状和生理生化特性进行鉴定,试验得出芽孢杆菌的分离频率最高,为优势种群。平板对峙试验表明,芽孢杆菌对两种植物病原真菌有抑制作用。     

肠衣加工过程中微生物的污染状况分析及其分离鉴定

为了研究肠衣加工过程中微生物的污染状况,试验对生产过程中的肠衣样品、工人卫生以及加工环境中的菌落总数进行测定,再采用平板划线分离方法对肠衣产品中的主要微生物菌群进行分离,根据16S rDNA序列分析等对试验菌株进行鉴定。结果表明,刮肠后的菌落总数较多,腌制后的肠衣菌落总数明显下降,产品的菌落总数随着储藏时间的延长呈上升趋势。加工环境中腌制台的菌落总数很低,而空气、工人的手和袖套的菌落总数较多且相似。低温储藏3个月的肠衣产品中含有的主要微生物有蜡样芽孢杆菌和陆地罗氏菌,而低温储藏10个月的肠衣产品中含有的主要微生物有蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和巴氏葡萄球菌。     

斜带石斑鱼稚鱼和早期幼鱼消化道可培养菌群研究

利用常规微生物分离鉴定方法结合16S rRNA基因序列分析研究斜带石斑鱼Epinephelus coioides 40d稚鱼和70d早期幼鱼消化道可培养菌群.结果表明,副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus、哈维弧菌Vibrio harveyi、短小芽孢杆菌Bacillus pumilus、鲍氏不动杆菌Acinetobacter baumannii、恶臭假单胞菌Pseudomonas putida、嗜冷杆菌Psychrobact-er sp.和洋葱伯克霍尔德菌Burkholderia cepacia均从稚鱼和早期幼鱼消化道分离.系统进化分析结果表明,斜带石斑鱼消化道细菌可归为3类:γ-变形杆菌纲γ-Proteobacteria、β-变形杆菌纲β-Proteobacteria和芽孢杆菌纲Bacil-li.稚鱼和早期幼鱼消化道的优势菌相似,稚鱼消化道的优势菌为芽孢杆菌Bacillus、嗜冷杆菌Psychrobacter、葡萄球菌Staphylococcus和不动杆菌Acinetobacter,而早期幼鱼消化道的优势菌为芽孢杆菌、不动杆菌、嗜冷杆菌和假单胞菌Pseudomonas.芽孢杆菌为稚鱼与早期幼鱼消化道的最优势菌,分别占可培养细菌总数的78.6%和75.6%,而弧菌在稚鱼和早期幼鱼消化道中的数量均较低,分别仅占消化道可培养细菌总数的2.8%和1.1%.乳酸乳球菌Lactococcus lactis、干酪乳杆菌Lactobacillus casei和屎肠球菌Enterococcus faecium等3种乳酸菌仅见于早期幼鱼消化道.     

香猪肺源性枯草芽孢杆菌的分离鉴定及体外抑菌作用

为获得猪呼吸系统的益生菌,以对疾病具有较强抗性的从江香猪为对象,从肺组织中分离到1株细菌Bp-1并对其进行形态学观察和生理生化特性鉴定,经克隆测序分析16SrDNA核苷酸序列和二级结构的相似性,利用琼脂扩散法和混菌拮抗培养法研究Bp-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和猪链球菌3种致病菌的抑制作用。结果表明:菌株Bp-1与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)位于同一分枝,相似性达100%;与已知枯草芽孢杆菌菌株168的16SrRNA可变区二级结构相比无明显差异,因此将Bp-1鉴定为枯草芽孢杆菌。枯草芽孢杆菌Bp-1的液体培养物对3种致病菌均有抑制作用;对大肠杆菌的拮抗作用较强,对金黄色葡萄球菌的拮抗作用较弱。枯草芽孢杆菌Bp-1可作为猪呼吸系统的益生菌对其深入研究。     

进口生牛皮中细菌的PCR-RFLP图谱建立

旨在建立存在于进口生牛皮中细菌的PCR-RFLP图谱。对从进口生牛皮中分离到的15种细菌,通过VITEK鉴定,分别进行基因组DNA提取,然后以所提取的DNA为模版,用16SrDNA的通用引物27f和1492r进行PCR扩增,扩增产物以17种内切酶,即AvaⅠ、BamHⅠ、BglⅡ、DraⅠ、EcoRⅠ、EcoRⅡ、HindⅢ、Hinf、HpaⅠ、PstⅠ、SmaⅠ、TaqⅠ、XbaⅠ、XmaⅠ、AluⅠ、XhoⅠ、PvuⅠ进行酶切,酶切产物经琼脂糖凝胶电泳分析,建立每种菌16SrDNA RFLP图谱。结果表明,进口生牛皮中分离到的15种细菌分别是侧芽短芽孢杆菌、产色葡萄球菌、黑色消化球菌、环状芽孢杆菌、解鸟氨酸拉乌尔菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、耐热芽孢杆菌、桥石芽孢杆菌、球型芽孢杆菌、溶血不动杆菌、少动桥氨醇单孢菌、苏云金芽孢杆菌、中间葡萄球菌和分支杆菌,除中间葡萄球菌和产色葡萄球菌外,其他13种菌均扩增出目的条带。说明,PCR-RFLP方法可以快速、可靠地分析、鉴定进口皮毛中的细菌,在进出口动物皮毛中细菌的检测方面具有一定的应用潜能。     

感官异常番茄酱和杏酱中腐败细菌的分离及分子生物学鉴定

【目的】采用分子生物学方法对新疆感官异常的番茄酱和杏酱中细菌进行快速鉴定。【方法】采用梯度稀释法在需氧和厌氧条件下,对感官异常的番茄酱和杏酱中的腐败细菌进行培养,通过16S rDNA序列分析并结合菌株系统发育树对分离菌株进行鉴定。【结果】分离共获得9株细菌菌株,其中番茄酱中的5株菌分别为:甲基营养性芽孢灰枣杆菌、枯草芽孢灰枣杆菌、地衣芽孢灰枣杆菌、沃氏葡萄球菌、粪肠球菌;杏酱中的4株菌株分别为巴氏葡萄球菌、粪肠球菌、沃氏葡萄球菌、类芽孢灰枣杆菌,鉴定结果与生化方法一致。【结论】该方法准确快速,可为番茄酱、杏酱生产企业有效防控产品污染保障质量安全提供基础数据。     

枯草芽孢杆菌抑菌活性及蛋白粗提物特性研究（英文）

为了获得无耐药性、无毒副作用的生物药物,减少抗生素的使用,从动物肠道中分离到一株芽孢杆菌,用分子生物法鉴定分离菌;用琼脂扩散法做分离菌体外抑菌试验;用常规培养法筛选分离菌最佳发酵条件;用饱和硫酸铵法提取分离菌抑菌粗蛋白;用比对法检测抑菌粗蛋白的理化特性;鉴定分离菌为枯草芽孢杆菌;对金黄色葡萄球菌、猪丹毒、链球菌有抑菌作用;当温度为30℃、酸碱度为pH7、装液量为75 ml/250 ml、接种量为20%、培养时间为48 h,分离菌发酵效果最好;用80%饱和硫酸铵提取抑菌粗蛋白的方法最好;抑菌粗蛋白有较强的抗热和抗酸能力;有机溶剂、紫外照射对抑菌粗蛋白有一定的影响;蛋白酶类对抑菌粗蛋白有一定的水解作用。所分离的枯草芽孢杆菌可用于防治因金黄色葡萄球菌、猪丹毒、链球菌等引起的疾病,也可加到膨化饲料中用于肠道微生态的调节。     

生物有机肥中微生物的分离鉴定及液体菌剂的构建

【目的】了解生物有机肥中微生物的种类及各种微生物之间的关系,并借此构建一种高效便捷的 液体菌剂。【方法】采用平板划线法从肥料中分离出菌种,并通过菌落观察、革兰氏染色法及 16SrDNA 基因同 源序列比对方法对其中的微生物进行鉴定,同时运用菌饼法和平板涂布法对各菌种之间的拮抗作用及培养条件 进行研究。【结果】分离得到 4 种菌落,分别为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）和巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）,这 4 种菌之间均无拮 抗作用。地衣芽孢杆菌：枯草芽孢杆菌：巨大芽孢杆菌：植物乳杆菌按 1∶1∶1∶1 添加到不同 pH 的牛肉膏蛋 白胨培养基液体培养基中进行培养,并用稀释涂布平板法测定有效活菌数,最终得到最适 pH 为 7.0。【结论】 从生物有机肥中分离得到 4 种菌种,它们之间均无拮抗作用,采用等比例的菌种配比,在 pH 为 7.0 的牛肉膏蛋 白胨液体培养基进行培养,各菌种都能很好地生长,从而得到一种高效的液体菌剂。     

秦岭山区硅酸盐细菌的分离、筛选以及初步鉴定

针对秦岭周至县不同生境的土壤进行硅酸盐细菌的分离与筛选,对20株生长较好的硅酸盐细菌进行摇瓶培养,测定其发酵液的水溶性钾含量,挑选出解钾能力较强的菌株,并使用传统生理生化特征试验和Biolog微生物自动鉴定仪两种方法对其进行鉴定.结果表明,QL21为1株解钾能力较强的菌株,解钾率为25.1%,该菌为G+革兰氏阳性,菌体为长杆状,产生椭圆芽孢以及椭圆形肥大荚膜,其生理生化特征与芽孢杆菌很接近,经Biolog微生物自动鉴定仪鉴定为芽孢杆菌.     

新疆甘草内生细菌的分离及其系统发育分析

采用组织分离法和研磨分离法从甘草的根、茎、叶中共分离到129株内生细菌,经鉴定属于13个属,分别为芽孢杆菌属、伯克霍尔德氏菌属、棒杆菌属、柠檬酸细菌属、肠杆菌属、库克菌属、微杆菌属、类芽孢杆菌、叶杆菌属、假单胞菌属、沙雷氏菌属、葡萄球菌属和寡养单胞菌属.同时运用纯培养法和基于16S rRNA 基因序列的系统发育分析对新疆胀果甘草中可培养内生细菌进行了研究.