宁波地区南美白对虾白斑综合征病毒（WSSV）的检测与分析

为了解浙江宁波地区南美白对虾白斑综合征病毒（WSSV）的流行情况,为科学防控该病提供参考依据,应用PCR方法对2004～2008年采自宁波地区对虾养殖场的1201份南美白对虾样品进行WSSV检测。结果表明,1201份样品中有364份样品呈阳性,总阳性率为30.31%;2004～2008年的WSSV年平均阳性检出率均较高,且呈不规律变化,其中以2006年南美白对虾白斑综合征发病最严重,阳性感染率达42.66%,但2006～2008年WSSV的年平均阳性检出率呈下降趋势。     

2013年浙江省南美白对虾虾苗病毒携带情况分析

病毒病频发是导致对虾养殖失败的最重要原因之一,为摸清浙江省南美白对虾虾苗病毒携带情况(白斑病毒、桃拉病毒、传染性皮下及造血组织坏死病毒),进一步提高水产苗种质量安全水平,于2013年对浙江省主要的南美白对虾虾苗场进行了病毒携带情况调查,并结合虾苗来源进行分析。检测方法采用国标、行标中的PCR或RT-PCR方法。结果显示,113份南美白对虾苗种来源均为外省,其中福建省58批次,广东省、海南省各26批次,其他地区3批次,共有68份检出病毒,总阳性率为60.18%,其中传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)阳性59份,占52.21%;白斑病毒(WSSV)阳性18份,占15.93%;桃拉病毒(TSV)阳性1份,占0.88%,WSSV和IHHNV同时阳性的10份,占8.85%。     

广西沿海地区对虾桃拉病毒(TSV)检测及假阳性分析

桃拉病毒(TSV)是一种给对虾养殖业造成极大危害的病原。应用RT-PCR方法对采自广西防城港、北海、钦州等地养殖场的疑似病虾进行TSV检测,结果在250份样品中,TSV的检出率为0;有5份病样在目的带位置附近出现明显条带,经测序和NCB I比对,该条带的DNA序列与南美白对虾18S ribosomal RNA 99%吻合。表明广西沿海地区近年来桃拉病的发病率已明显降低,利用国际兽医局O IE推荐的引物检测桃拉病毒有可能造成假阳性。试验结果可为广西TSV的科学检测与防控提供参考。     

一步二温式RT-PCR检测南美白对虾桃拉综合症病毒

建立一种一步法和二温式的逆转录聚合酶链式反应，用于扩增南美白对虾桃拉综合症病毒231bp的特异基因片断，对300份南美白对虾临床样品的检测结果表明，这是一种快速和敏感的桃拉综合症病毒诊断方法。     

南美白对虾病害防治技术

一、红体病 “红体”是南美白对虾疾病发生后的一种显著现象，有学者认为它属于“桃拉综合症”，实际上，白对虾在发生病毒性“桃拉病毒”（TSV），细菌性弧菌病以及环境突变情况下，外观上都会出现红体现象。     

桃拉病毒感染对南美白对虾血液学参数的影响简

桃拉病毒（TSV）病是危害我们对虾养殖业健康发展的主要疾病之一,目前仍无切实有效的防控措施。对虾血细胞既是细胞免疫的承担者,又是体液免疫因子的提供者,研究血细胞在Tsv入侵过程中的反应和变化,对提出有效防止TSV方法上有着积极意义。用Tsv粗提液投喂感染南美白对虾,通过RT—PCtk法,显微镜观察法研究了感染后南美白对虾发病死亡率,及总血淋巴细胞数和不同种类血细胞的比率组成变化,并检测了感染前后血浆中超氧化物歧化酶（SOD）和酚氧化酶（PO）活力的变化。结果显示,TSV感染虾发生了60％～80％的死亡率,出现典型的Tsv症状,PCR证实TSV条带为阳性;而对照组仅有少量的虾只发生死亡。在TSV感染2～3d后,对虾总淋巴细胞数,透明细胞数,半颗粒细胞数及颗粒细胞数分别下降了约690／o、76％、60％和70％;而SOD和PO活力分别下降了约25％和68％。这一结果显示Tsv可能通过降低对虾血液学免疫力而实现其高致病性,通过提高对虾血液学指标可有效降低TSV感染的致病力。     

南美白对虾桃拉病毒和白斑病毒多重PCR检测体系的建立

养殖对虾可混合感染多种病毒,桃拉病毒(Taura syndrome virus,TSV)和白斑病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是南美白对虾感染的主要病原体,建立TSV和WSSV的多重聚合酶链式反应(PCR)技术可有效防制疫病的爆发。根据GenBank公布的TSV和WSSV全基因组序列,分别设计TSV和WSSV的特异性引物,并在四种不同的PCR系统中扩增筛选,在同一电泳道内得到与预期结果相符的、可明显区分的2条特异条带,PCR扩增产物测序显示分别与TSV和WSSV基因序列吻合,本体系的建立为生产鉴别和诊断混合感染病毒奠定基础。     

对虾桃拉综合症病毒(TSV)的分子生物学研究进展

对虾桃拉综合症病毒（Taurasyndrome virus,TSV）是危害对虾养殖的一个重要病原,开展该病毒的分子生物学研究具有重要的应用价值。文章综述了近年来国内外在TSV的病毒分离与鉴别、TSV检测方法的建立与改善、TSV与宿主感染后相互作用机理等方面的研究进展,提出今后应加强对TSV的病毒分离和保存技术、TSV的纯化和攻毒技术、抗TSV相关基因和抗TSV药物等方面的研究,以提高对TSV的预防和控制水平。     

不同盐度对斑节对虾幼虾人工感染WSSV及TSV的影响

[目的]探讨斑节对虾幼虾在不同盐度下对白斑综合症病毒-(WSSV)及桃拉综合症病毒(TSV)的敏感性.[方法]在8种不同盐度下对斑节对虾幼虾进行攻毒试验,采用投喂感染的方法人工感染WSSV和TSV,分析不同盐度对斑节对虾幼虾的抗病力的影响.[结果]人工感染WSSV组,当盐度为25时斑节对虾的存活率最高,为41.11％,与其他组差异极显著(P＜0.01).人工感染TSV组,当盐度为25时斑节对虾的存活率为64.44％,与其他组差异极显著(P＜0.01).当盐度为25时,斑节对虾对WSSV与TSV的抗病力最强,斑节对虾对TSV的敏感性不如WSSV的敏感性强.[结论]该研究可为提高斑节对虾的抗病力奠定基础.     

苏北部分地区南美白对虾养殖场白斑综合征病毒流行病学调查

采用nest - PCR方法对从扬州、泰州、南通三地的南美白对虾养殖场采集的1 300余份虾样、水生生物等样品进行白斑综合征病毒(WSSV)携带情况的调查.结果表明:516例对虾样品中139例为阳性,33份野生虾样品中7例为阳性,36例野生中华绒螯蟹样品中有2例阳性,317例浮游动物样品中检出阳性数为126例,229例浮游微藻样品中检出阳性数为16例,180例底泥样品中检测阳性数为34例,贝类、螺类及水样中未能检测到WSSV.调查结果提示,对虾、野生虾、浮游动物可能在南美白对虾感染WSSV过程中起着重要作用,中华绒鳌蟹及浮游微藻也有较低比例的携带病毒能力,其作用不可忽视.     

多重RT-PCR方法在凡纳滨对虾病毒检测中的应用

病毒检测在预防和控制对虾病毒性疫病实践中具有重要的作用和意义.为了提高对虾病毒检测的快速性和简便性,建立了一种可同时检测6种对虾病毒的RT-PCR方法,并利用该方法对来自广西沿海地区的130份病虾样品中的黄头病毒(YHV)、白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉病毒(TSV)、肝胰腺坏死病毒(HPV)、传染性皮下组织坏死病毒(IHHNV)以及杆状病毒(MBV)进行了检测.检测结果:白斑综合征病毒发病率最高,检出率高达73.8 %;传染性皮下组织坏死病毒发病率为18.5 %;桃拉病毒检出率为3.1 %;未检出黄头病毒、肝胰腺坏死病毒和杆状病毒.该RT-PCR方法扩增得到的片段经测序,结果与标准毒株的核酸数据高度吻合.实践证明,该实验建立的RT-PCR方法具有高度的准确性,与其他检测方法相比具有快速、简便的特点,在对虾病毒检疫、流行病学调查等方面具有重要的应用价值.     

感染与未感染桃拉病毒凡纳宾对虾基因差异表达文库的构建

为了寻找对虾抗桃拉病毒(TSV)相关基因信息,研究对虾抗TSV分子机理。应用抑制性差减杂交(SSH)技术,构建TSV感染后存活凡纳宾对虾与未感染凡纳宾对虾的基因差异表达文库,并通过相对定量PCR以及斑点杂交分别对SSH的效率以及文库的可靠性进行验证。结果表明,SPR凡纳宾对虾和SPF凡纳宾对虾攻毒后的死亡率分别为12%和90%;在SSH系统中,相对于未进行杂交的cDNA样品,杂交后的cDNA样品的β-肌动蛋白(β-actin)几乎没有被检测出,说明SSH操作系统是高效率的。通过文库构建则获得正负2个文库,其中正库含阳性克隆1051个,负库含阳性克隆580个;而经斑点杂交验证,共获差异表达克隆321个,其中攻毒组高表达克隆270个,未攻毒组高表达克隆51个。可见,SPR凡纳宾对虾具有较强的抗TSV能力,以之为基础构建的对虾基因差异表达文库具有高度的可靠性,由文库得到的基因信息对获取对虾抗(TSV)相关基因具有潜在的应用价值。     

南美白对虾成虾病害的防治

南美白对虾成虾常发生桃拉综合症、白斑综合病、红腿病、烂眼病等病害，选用健康虾苗，坚持定期消毒和调节水体，结合高效低毒药物防治，能有效提高成活率和经济效益。     

我国近海中国对虾种群遗传差异的RAPD分析

应用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对取自我国近海烟台、长岛、青岛、宁波等4个地方的20只中国对虾进行了种群内和种群间遗传差异分析。在使用的50个随机引物中，有9引物扩增出条带清晰的多态性片段。烟台、长岛、青岛、宁波等4个地理种群内的遗传距离分别为0．0154、0．0370、0．0462、0．0550，种群之间的遗传距离分别为0．0793、0．1139、0．0988、0．1485、0．0880、0．1260。UPGMA和NJ法构建的种群间分子系统树基本一致，结果表明不同地理种群这间存在一定程度的遗传差异。     

我国近海中国对虾种群遗传差异的RAPD分析

应用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对取自我国近海烟台、长岛、青岛、宁波等4个地方的20只中国对虾进行了种群内和种群间遗传差异分析。在使用的50个随机引物中，有9引物扩增出条带清晰的多态性片段。烟台、长岛、青岛、宁波等4个地理种群内的遗传距离分别为0．0154、0．0370、0．0462、0．0550，种群之间的遗传距离分别为0．0793、0．1139、0．0988、0．1485、0．0880、0．1260。UPGMA和NJ法构建的种群间分子系统树基本一致，结果表明不同地理种群这间存在一定程度的遗传差异。     

凡纳滨对虾3种主要病毒和虾肝肠胞虫在辽宁地区的流行情况分析

为解决近年来辽宁地区凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei病害频发的问题,于2015年8月从辽宁省盘锦、营口地区26个发病的凡纳滨对虾养殖池塘中随机采集病虾样本,采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、对虾白斑综合征病毒(WSSV)和对虾桃拉综合征病毒(TSV),并用环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplication,LAMP)技术检测虾肝肠胞虫Enterocytozoon hepatopenaei(EHP)的感染情况。结果表明:IHHNV和EHP的检出率较高,分别为65.4%和34.6%,WSSV和TSV的检出率分别为19.2%和7.7%;EHP的检出率与对虾体型大小密切相关,在小虾样本中检出的阳性率高达100%,而大虾样本中均未检出;26份对虾样本中有7份样本同时携带EHP和IHHNV。研究表明,IHHNV和EHP是2015年8月辽宁地区凡纳滨对虾的主要流行病原,发病率可能与对虾生长缓慢、个体大小差异明显相关。     

广西种猪场CSF、PRRS、PCV2与PR监控效果研究

采用PCR和RT—PCR对2004～2008年广西种猪场猪瘟（CSF）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪伪狂犬病（PR）进行监控。结果表明,2004～2008年广西种猪场CSF、PRRS、PR、PCV2均有不同程度的发生,其中2004年阳性率最高,2008年阳性率最低（全部为阴性）。从2004～2008年,组织样品的PRRSV阳性率呈逐年下降趋势;CSFV和PRV的阳性率变化趋势相似,即2004年较高、2005年有所下降、2006年有所反弹、2007～2008年呈下降趋势;PCV2阳性率变化趋势则是在2005～2006年出现一个峰值。在公猪精液方面,PRRSV、PRV、PCV2阳性检出率呈逐年下降趋势。不同年份内不同疫病对种猪场的影响程度也存在差异。可见,以PCR和RT—PCR来监控种猪场疫病具有较高的可行性。