猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

从山西某猪场发病猪的脑组织中分离到1株疑为猪伪狂犬病病毒(PRV)毒株,通过BHK-21细胞培养、病毒毒力滴定、中和试验、PCR检测病毒方法对该分离株进行了鉴定,结果发现:分离的病毒在BHK-21细胞培养盲传4代后出现典型细胞病变;用BHK-21细胞测定其毒价TCID50为10-8.042/0.1 mL;PCR体外扩增可见其扩增片段与预期目的条带相一致;据此分离病毒株的上述特征,鉴定该病毒为猪伪狂犬病病毒,并命名为SX09。     

猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

从天津市郊县某猪场发病仔猪脑中分离到一株病毒。该病毒接种鸡胚绒毛尿囊膜有白色的痘斑出现,接种PK-15和BHK-21细胞出现典型的细胞病变,毒价(TCID50)为10-6/mL,且能被PRV阳性血清中和;将病毒给家兔注射后出现典型的伪狂犬病症状并导致死亡。通过上述试验结果证明,该分离毒株为伪狂犬病毒。     

猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

从河南某发病猪场大批死亡仔猪的脾、肾及脑组织中分离到1株猪伪狂犬病毒(PRV)毒株,该毒株经细胞连续传代培养后,接种PK-15细胞能够产生明显的细胞病变(CPE),且能被PRV阳性血清中和.病毒对氯仿、乙醚敏感,56℃水浴30 min能使其灭活.将所分离的病毒接种家兔和小鼠,均出现明显的伪狂犬病临床症状.PCR鉴定结果表明,用gp50基因序列引物能够从该毒株上扩增出目的条带,将测序结果与GenBank中的5株PRV毒株进行比对分析,同源性达99％.证实所分离病毒为猪伪狂犬病毒.     

猪伪狂犬病病毒泰州株的分离鉴定

从泰州市姜堰区某猪场发生的疑似伪狂犬病病猪中采集病料,接种PK15细胞,收取细胞病毒液并提取DNA,经PCR检测及间接免疫荧光鉴定,结果表明该分离株为猪伪狂犬病毒,命名为TAIZ130417。分离的病毒在PK15细胞上的生长滴度可以达到108.12TCID50/m L。将该病毒接种家兔,家兔很快出现奇痒并最终死亡等伪狂犬症状。     

河北免疫猪场猪伪狂犬病病例的诊断

为了对河北某免疫猪场发生的疑似猪伪狂犬病进行确诊,并针对猪伪狂犬病毒开展进一步的研究工作,本试验对该猪场送检的病猪进行剖检,将其脾、肺、肾及淋巴结的混合研磨液经PK15细胞接种分离,后经PCR扩增及动物回归试验,证实成功分离的病毒为伪狂犬病毒(PRV),并命名为SH151218。根据GenBank上传的PRV及其gE基因序列,设计了1对检测引物以及1对扩增gE基因的引物,并对其gE基因进行了序列分析,SH株属于GI亚型,与哈尔滨变异株同源性最高,所分离的PRV毒株为变异强毒株。此变异株的发现对PRV变异机制的研究及研制新疫苗提供了基础。     

一株猪源乙型脑炎病毒的分离及鉴定

从江苏某发病猪场采集的母猪流产胎儿脑组织样本中成功分离到一株猪源乙型脑炎病毒(JEV)毒株,并对该毒株的相关生物学特性进行了鉴定。利用BHK-21细胞传代和脑内接种小鼠方法,对疑似阳性病料做病毒分离。通过RT-PCR,CPE和IFA等方法对JEV分离株进行鉴定,并测定其TCID50。结果成功分离获得一株JEV毒株(JEV JS01株),该毒株能够在BHK-21细胞上增殖并产生细胞病变,TCID50为每1 m L107.0,免疫荧光检测可观察到JEV特异性荧光。RT-PCR扩增E基因并测序分析表明,与Gen Bank中登录的JEV毒株序列具有较高的同源性,属基因Ⅲ型。小鼠致病力试验表明该分离株对易感动物具有较高致病性。本研究为进一步开展乙脑病毒流行病学与疫苗免疫研究奠定了基础。     

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Westernblot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下基础。     

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得On-derstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Western blot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下了基础。     

上海地区猪伪狂犬病例浅析

近年来上海地区猪场出现猪伪狂犬频发的现象,并导致一些猪场猪群的死亡,笔者对上海地区发生伪狂犬的病例进行流行病学调查,并进行病毒分离和细菌分离,共分离伪狂犬病毒23株,细菌分离以大肠杆菌为主.初步推断上海地区近年来PRV感染频发的可能原因,包括：未注射伪狂犬疫苗、购买时未进行隔离就进行混群饲养及饲养环境较差等.初步提出防控建议：（1）养殖户应当选择大型牧场或者免疫措施做得比较好的猪场购买仔猪; （2）在猪群入猪棚时,应当做好棚舍的消毒工作,以及一个月的隔离饲养;（3）对买回的猪群应当尽快做好主要疫病的免疫; （4）消灭猪场内啮齿类动物,加强抗体监测.     

伪狂犬病毒在BHK-21悬浮细胞中的增殖特性

为考察BHK-21悬浮细胞增殖伪狂犬病毒（Pseudorabies virus, PRV）工艺参数及病毒增殖过程中代谢动力学，将PRV接种于BHK-21悬浮细胞，考察接毒时细胞密度、病毒感染复数（MOI）及收毒时间对病毒效价的影响，测定培养过程中葡萄糖（Gluc）、乳酸（Lac）和谷氨酰胺（Gln）浓度，计算病毒增殖过程中各参数代谢速率。结果显示，将MOI为0.01的PRV病毒接种BHK-21悬浮细胞，其病毒滴度在42 h达最高8.5 lgTCID₅₀/mL。代谢参数检测结果表明，BHK-21细胞在接毒36 h后细胞开始出现死亡。PRV在BHK-21悬浮细胞中的增殖特性为伪狂犬病毒的规模化培养及疫苗开发提供了技术基础。     

广西猪伪狂犬病病毒GXA株的分离鉴定

从广西某猪场大批死亡的新生仔猪分离1株病毒，该病毒株在PK-15出现细胞病变，在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子，细胞培养物接种家兔出现伪狂犬病症状。进而用所分离病毒的DNA作为模板，应用特异性引物，通过聚合酶链式反应扩增出伪狂犬病病毒gp50基因中433-651之间217bp长的特异性片段。分离的病毒为猪伪狂犬病病毒，并将其命名为猪伪狂犬病病毒GXA株。     

南京地区1株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离病毒接种家兔,被接种的家兔很快出现瘙痒、死亡等伪狂犬病症状。与以往发表的伪狂犬病毒gE基因序列比对及进化树分析结果显示,分离株属于一个相对独立的分支。由中国兽药监察所提供的伪狂犬病阳性血清对分离株有一定的中和能力。根据实验结果推测,南京某猪场流行的伪狂犬病毒存在一定的抗原变异。     

南京地区1株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离病毒接种家兔,被接种的家兔很快出现瘙痒、死亡等伪狂犬病症状。与以往发表的伪狂犬病毒gE基因序列比对及进化树分析结果显示,分离株属于一个相对独立的分支。由中国兽药监察所提供的伪狂犬病阳性血清对分离株有一定的中和能力。根据实验结果推测,南京某猪场流行的伪狂犬病毒存在一定的抗原变异。     

2016年江苏省部分猪场猪伪狂犬病原学监测与变异性分析

[目的]研究猪伪狂犬病毒在江苏省的遗传变异情况.[方法]对2016年1-12月江苏不同地区42家规模猪场采集或者送检的共2365份病料组织进行PCR检测,分析不同季节、猪场规模以及地区的检测结果,并把检测出的部分基因序列进行同源性分析.[结果]猪伪狂犬阳性样品364份,阳性率为15.4％;夏、秋两季的病原阳性率均低与春、冬两季;苏北以及苏中地区的病原阳性率高于苏南地区;不同规模的猪场病原阳性率随着猪场规模的扩大逐渐下降且趋势明显.11株分离株中PRV-6分离株与Barthak61疫苗株属于同一个分支.[结论]该研究可为江苏省乃至全国猪伪狂犬病的防控提供参考.     

猪伪狂犬病毒河南株的分离与鉴定

从疑似猪伪狂犬病的病料中分离到 1株病毒 ,通过电镜观察、免疫荧光检查、PCR方法检查 ,证明该分离株为猪伪狂犬病毒 ;用分离株研制出油乳剂灭活苗预防猪伪狂犬病 ,预防效果良好。     

猪伪狂犬病毒感染病例的荧光定量PCR检测

毕节某猪场出现妊娠母猪流产、产死胎及部分仔猪发病的情况,为确诊病原,对流产胎儿的组织进行了实验室检测。流产胎儿的组织经猪伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测,结果显示,胎儿组织为猪伪狂犬病毒(PRV)阳性;根据临床症状及伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测确诊该猪场存在猪伪狂犬病毒野毒感染。     

猪伪狂犬病毒感染病例的荧光定量PCR检测

毕节某猪场出现妊娠母猪流产、产死胎及部分仔猪发病的情况,为确诊病原,对流产胎儿的组织进行了实验室检测。流产胎儿的组织经猪伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测,结果显示,胎儿组织为猪伪狂犬病毒(PRV)阳性;根据临床症状及伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测确诊该猪场存在猪伪狂犬病毒野毒感染。     

一例猪伪狂犬病引发的猪呼吸道疾病综合征的诊治体会

猪呼吸道疾病综合征(PRDC)是由多种病原感染、饲养管理水平低下等因素相互作用而导致的疾病,其中能引起PRDC的传染性病原主要包括猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等,复杂的病因导致临床确诊十分困难,给养猪业造成巨大的经济损失。2020年8月,汨罗市某猪场育肥猪发生PRDC,使用抗生素治疗无效,最后经实验室诊断为伪狂犬病毒感染所致,其具体原因是未及时对猪群进行伪狂犬病毒相应疫苗的免疫接种。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒新疆株的分离鉴定

从新疆阿克苏地区某规模化猪场发病仔猪体内分离到1株病毒,该病毒能在Marc-145细胞上增殖并产生特征性的细胞病变,而在Vero与BHK-21细胞上不出现细胞病变.病毒能被猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清特异性地中和,用RT-PCR反应能扩增出369 bp的特异性片段.将病毒接种30日龄血清阴性仔猪,可检测到血清中出现病毒特异性抗体,将分离株命名为XJPRRSV1/03株.