猪伪狂犬病毒感染病例的荧光定量PCR检测

毕节某猪场出现妊娠母猪流产、产死胎及部分仔猪发病的情况,为确诊病原,对流产胎儿的组织进行了实验室检测。流产胎儿的组织经猪伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测,结果显示,胎儿组织为猪伪狂犬病毒(PRV)阳性;根据临床症状及伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测确诊该猪场存在猪伪狂犬病毒野毒感染。     

猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR鉴别

为建立一种快速鉴别猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的方法,根据猪伪狂犬病毒(PRV)全基因序列,并参照SA215、Bartha-K61疫苗株基因缺失位点特征,在单一检测野毒株与疫苗株的基础上,针对g E、g B和TK基因设计引物,首次建立了同时检测猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR检测方法。通过一次PCR检测能区分感染野毒株、疫苗株SA215和Bartha-K61,且与猪圆环Ⅱ型病毒(PCV-2)、细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。多次试验证明该方法简单、可靠且敏感度高,可用于科学研究和临床诊断等方面。     

PRV自然感染仔猪后病毒在机体分布及gE基因序列分析

对河南省新郑某规模化猪场3头疑似猪伪狂犬病发病病死的4日龄仔猪进行病原PCR及病毒于各个组织定性分布检测,然后对其主要毒力基因gE基因进行测序,与国内外其他参考毒株进行序列比对分析。结果表明,该病死仔猪经PCR检测确诊为猪伪狂犬病,为PRV野毒感染。其组织分别采样进行PRV在体内的分布检测。结果显示,猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和脑等多组织均检出阳性,表明PRV在自然感染仔猪多数组织器官内均有分布,具有广泛的组织嗜性,且能够引起肝脏和脾脏明显的组织病理学变化。遗传系统发育树的结果表明,本试验鉴定并命名的毒株HNZZ01与我国的经典毒株亲缘关系较近,与国外毒株亲缘关系较远。     

规模猪场伪狂犬病流行病调查及监测结果综合分析

为了摸清鹿寨县规模猪场伪狂犬病的发生流行情况,有效控制猪场的猪伪狂犬病,对鹿寨县规模猪场猪伪狂犬病感染状况进行流行病学调查,通过使用猪伪狂犬病病毒gE-ELISA抗体检测试剂盒,检测血清样品,计算出鹿寨县猪伪狂犬病血清学场流行率以及个体流行率。结果显示:鹿寨县南北地区之间猪伪狂犬病毒野毒阳性率差异显著,北部地区猪伪狂犬病毒野毒阳性率显著高于南部地区;小型猪场伪狂犬病野毒阳性率最高为14.84%,中型猪场、大型猪场伪狂犬病野毒阳性率依次降低;不同生长阶段的猪群均可感染PRV,母猪PRV野毒阳性检出率最高为24.57%,仔猪PRV野毒阳性检出率为6.15%,育肥猪的PRV野毒阳性检出率为0.35%。本课题研究表明:鹿寨县北部地区规模猪场猪伪狂犬病野毒感染形势严峻,应加强猪场生物安全管理、科学饲养管理、合理地制定种猪高效免疫计划,强化定期监测防控意识,果断淘汰病猪,净化猪群,做好综合防治工作。     

河北免疫猪场猪伪狂犬病病例的诊断

为了对河北某免疫猪场发生的疑似猪伪狂犬病进行确诊,并针对猪伪狂犬病毒开展进一步的研究工作,本试验对该猪场送检的病猪进行剖检,将其脾、肺、肾及淋巴结的混合研磨液经PK15细胞接种分离,后经PCR扩增及动物回归试验,证实成功分离的病毒为伪狂犬病毒(PRV),并命名为SH151218。根据GenBank上传的PRV及其gE基因序列,设计了1对检测引物以及1对扩增gE基因的引物,并对其gE基因进行了序列分析,SH株属于GI亚型,与哈尔滨变异株同源性最高,所分离的PRV毒株为变异强毒株。此变异株的发现对PRV变异机制的研究及研制新疫苗提供了基础。     

伪狂犬病毒重组gG抗原片段的原核表达及其间接酶联免疫吸附测定方法的建立

[目的]建立方便可行的伪狂犬病毒血清抗体的酶联免疫吸附测定方法,并可特异性鉴别伪狂犬病毒TK-/gG基因缺失疫苗免疫株和野毒株.[方法]利用原核表达系统表达伪狂犬病毒gG抗原片段,蛋白纯化后包被,优化反应条件,建立一种用于检测伪狂犬病毒gG抗体的间接酶联免疫吸附测定方法.[结果]通过不同血清样品的检测试验,该酶联免疫吸附测定方法可以鉴别伪狂犬病毒TK-/gG-基因缺失疫苗免疫猪和感染野毒的血清学阳性猪.[结论]成功建立了检测伪狂犬病毒gG抗体的酶联免疫吸附测定方法,并可特异鉴别伪狂犬病毒TK-/gG-基因缺失疫苗免疫株和野毒株,此方法敏感性强,特异性高,操作简便,适合于临床大量检测.     

一例仔猪圆环病毒感染的诊断

用荧光定量PCR对4份湖南省永州市某猪场送检的样品进行猪圆环病毒、猪蓝耳病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒检测。检测结果显示,圆环病毒均为阳性,其他病毒均为阴性。结合猪群流行病学、临床症状和病理变化,初步诊断为猪圆环病毒感染。     

猪伪狂犬病病毒野毒SYBR-Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立

根据猪伪狂犬病病毒(PRV)g I/g E基因序列,设计一对特异性引物,建立了鉴别PRV野毒感染的荧光定量PCR方法。该方法灵敏度达到102拷贝/μL,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、乙脑病毒(JEV)不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;用PRV强毒攻毒仔猪,荧光定量PCR比普通PCR能更灵敏检出组织带毒量。该方法可以用于猪的组织样品,如脑、肺、扁桃体、淋巴结等样品中伪狂犬野毒的定量,可用于临床伪狂犬野毒感染的早期检测和定量分析猪伪狂犬病毒感染程度。     

猪伪狂犬病病毒野毒SYBR-Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立

根据猪伪狂犬病病毒(PRV)g I/g E基因序列,设计一对特异性引物,建立了鉴别PRV野毒感染的荧光定量PCR方法。该方法灵敏度达到102拷贝/μL,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、乙脑病毒(JEV)不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;用PRV强毒攻毒仔猪,荧光定量PCR比普通PCR能更灵敏检出组织带毒量。该方法可以用于猪的组织样品,如脑、肺、扁桃体、淋巴结等样品中伪狂犬野毒的定量,可用于临床伪狂犬野毒感染的早期检测和定量分析猪伪狂犬病毒感染程度。     

上海地区一株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

上海地区某猪场发生疑似伪狂犬病毒感染,采集其内脏样品进行伪狂犬病毒的分离,并采用细胞病变观察和荧光PCR方法进行鉴定。结果表明采用BHK-21细胞能够从该发病猪体内分离到猪伪狂犬病毒,其分离株能够引起BHK-21细胞产生典型的细胞病变。该猪场发生猪伪狂犬后,已连续造成2头成年猪的死亡,全群发病率高达50%,这与以往伪狂犬病并不造成成年猪的死亡不同,需要对该分离株进行进一步病原特性的研究。     

猪伪狂犬病毒SYBR-GreenⅠ实时定量PCR检测方法的建立

利用PCR技术扩增出猪伪狂犬病毒gH基因中187 bp的片段,并克隆到pGEM T栽体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线.建立了猪伪狂犬病毒的荧光定量PCR检测方法.该方法检测灵敏度可达1.26×102拷贝·μL-1,与猪圆环病毒,猪细小病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪瘟病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对15份疑似病料进行了检测.发现均为荧光定量PCR阳性,而常规PCR只能检测出6份阳性.结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床PRV感染的检测.     

秀山县猪伪狂犬病血清学调查

为了了解秀山县生猪伪狂犬病毒感染情况,对县内12家猪场的301份血清样品进行伪狂犬g E抗体检测,分析猪伪狂犬病野毒感染情况。结果发现,被调查对象中,阳性猪场所占比例为50%,阳性样品比例为17.28%。结果表明,秀山县猪场的伪狂犬野毒感染面较广,应及时加强控制与净化。     

猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

从河南某发病猪场大批死亡仔猪的脾、肾及脑组织中分离到1株猪伪狂犬病毒(PRV)毒株,该毒株经细胞连续传代培养后,接种PK-15细胞能够产生明显的细胞病变(CPE),且能被PRV阳性血清中和.病毒对氯仿、乙醚敏感,56℃水浴30 min能使其灭活.将所分离的病毒接种家兔和小鼠,均出现明显的伪狂犬病临床症状.PCR鉴定结果表明,用gp50基因序列引物能够从该毒株上扩增出目的条带,将测序结果与GenBank中的5株PRV毒株进行比对分析,同源性达99％.证实所分离病毒为猪伪狂犬病毒.     

2013~2016年广西猪伪狂犬病流行病学调查分析

[目的]全面了解广西猪伪狂犬病毒(PRV)的流行特点,为相关部门制定科学的猪伪狂犬病防控措施提供决策参考.[方法]于2013年6月~2016年8月从广西12个地市不同规模猪场采集疑似猪伪狂犬病阳性组织样品473份和血清样品5041份,通过PCR和ELISA分别对组织样品和血清样品进行PRV病原和野毒抗体检测.[结果]广西地区规模猪场的组织样品和血清样品PRV阳性率分别为26.43%和24.50%,且组织样品PRV病原阳性率与血清样品野毒抗体阳性率基本一致,以2015年的PRV阳性率最低、2016年的PRV阳性率最高.在广西地区一年四季均能检测到PRV,且组织样品的PRV病原阳性率和血清样品的野毒抗体阳性率均以第三季度(秋季)最低,分别为19.80%和14.95%.除了梧州市和防城港市的检测样品未检出PRV外,其他10个地市的检测样品均能检出PRV,说明广西规模猪场普遍存在PRV感染,且以南宁、玉林、北海和桂林等地市较严重.[结论]广西规模猪场普遍存在PRV感染,尤其是2016年PRV阳性率明显上升.因此,要求养猪业发达的地市应加大对PRV的防控力度,实时监控PRV的流行趋势,避免混合感染,并做好净化工作.     

猪伪狂犬病毒、副猪嗜血杆菌和猪链球菌混合感染的病原分离与鉴定

为了探究河南省某规模化猪场育肥猪发生疫情的病因,进行了猪伪狂犬病毒的血清学和PCR鉴别诊断,同时对分离细菌进行了形态鉴定、PCR鉴定、血清型鉴定和药敏试验。结果显示,猪伪狂犬野毒血清学和PCR检测均为阳性,同时分离到副猪嗜血杆菌和猪链球菌。经鉴定副猪嗜血杆菌为血清4型,链球菌为血清2型。药敏试验结果表明,副猪嗜血杆菌和链球菌对头孢哌酮、头孢他定、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢唑啉、亚胺培南、阿莫西林、氨苄西林、万古霉素敏感。     

猪伪狂犬病感染的诊疗报告

猪是伪狂犬病毒的贮存宿主,猪伪狂犬病严重影响了养猪业的发展。某猪场怀孕母猪发生流产,新生仔猪大批急性死亡,并伴有呕,吐、腹泻及发抖、震颤和运动失调等神经症状,病猪体温升高至41℃-41．5℃。经临床检查、病理剖检和实验室诊断,确诊为猪伪狂犬病。通过紧急接种猪伪狂犬基因缺失苗、投喂抗生素、加强消毒等措施,使疫情得到有效控制。并对发病猪场小猪采取相应防治,最终建立新的无病猪群。     

基于P72、MGF和CD2v基因的非洲猪瘟三重荧光定量PCR检测方法的建立

非洲猪瘟在临床上出现多种毒株,主要分为野毒株和基因变异毒株。因其在临床上造成不同程度的危害,有必要建立一种方法进行正确诊断和健康监测。为实现野毒株和基因变异毒株的鉴别诊断,研究根据GenBank中的ASFV中国流行株(登录号：MK333180.1)的P72、CD2v、MGF基因保守序列设计引物,建立一种可以同时检测上述三种基因的三重荧光定量PCR方法。三重荧光定量PCR方法对猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒2型(PRV)和猪圆环病毒(PCV2)检测均无交叉反应,表现出较强的特异性。敏感性检测显示针对P72、CD2v和MGF重组质粒标准品的最低检测下限为10³～10² copies/mL。在重复性试验中,大部分组间变异系数均小于2%或接近2%,具有较好的重复性。试验表明,三重荧光定量PCR方法可用来鉴别野毒株和基因变异毒株。     

某规模化猪场猪伪狂犬病的诊断与思考

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒感染所引起的,临床症状主要为仔猪腹泻、神经症状和种猪繁殖障碍等,给我国养猪业造成巨大的经济损失。2019年3月,河南省宝丰县某规模化猪伪狂犬病阴性猪场部分母猪出现流产、死胎等症状,而且新生仔猪腹泻、角弓反张等,导致新生仔死亡率较高。通过对发病猪群临床、病理症状进行观察,同时结合实验室诊断结果,最终判定为伪狂犬病毒感染所致。本文主要分析猪场猪伪狂犬病的发病情况、临床症状、病理变化及诊断方法等,以供参考。     

陕西省猪伪狂犬病流行病学调查和WG株的分离鉴定

应用gE-EL ISA法对陕西省部分地区6个集约化猪场的187份猪血清进行了伪狂犬病毒(P seu-dorab ies v irus,PRV)野毒感染检测,并对疑似伪狂犬病发病仔猪的内脏及脑组织进行了病毒分离鉴定。结果显示,陕西省猪PRV野毒抗体平均阳性率为28.76%,最高为48.98%,最低为0;分离毒株可致PK-15细胞出现典型的圆缩、集聚,脱落等细胞病变,连续传代后,CPE出现的时间稳定在20 h左右;细胞培养物和病料混悬液接种家兔均出现典型奇痒症状,PCR反应扩增出PRV gE基因中长度为612 bp的特异性片段。表明本试验分离的病毒为PRV,并将其命名为PRV W G株。     

间接血凝试验检测死产猪伪狂犬病抗体的研究

伪狂犬病(Pseudorabies)是多种家畜及部分野生动物共患的传染病。近年来,许多学者先后发现伪狂犬病毒(PrV)可通过猪胎盘屏障感染胎儿,引起流产死产。为弄清我省猪流产死产的主要病因,迅速确立诊断,我们试用间接血凝试验(IHA)检测死产猪的伪狂犬病病毒抗体,通过多次试验研究,获得了比较满意的结果,现将方法与结果作一报道。