瘦素（leptin）对猪脂肪细胞脂滴相关蛋白和脂肪生成相关酶mRNA表达的影响

    以体外培养的猪原代脂肪细胞为研究对象,研究瘦素(leptin)对猪脂肪细胞脂滴相关蛋白(perilipin、ADRP、TIP47)和脂肪生成相关酶(FAS、SCD α、ACC α)mRNA表达的影响.用0、50、100、150 nmol·L-1 leptin 分别处理脂肪细胞 3、6 h,油红O染色鉴定,RT-PCR检测.结果表明,当用150 nmol·L-1 leptin 处理猪脂肪细胞 3 h 时perilipin mRNA 表达显著降低,用50、100 nmol·L-1 leptin处理 3 h时 PPAR γ、ACC α、FAS mRNA 表达降低;当用50、100 nmol·L-1 leptin 处理猪脂肪细胞6 h 时 perilipin、SCD α、PPAR γ、FAS、ACC α、LXR α mRNA 表达降低,50、100、150 nmol·L-1 leptin 处理显著下调ADRP mRNA的表达,100、150 nmol·L-1 leptin处理TIP47 mRNA表达升高.以上结果提示,50、100 nmol·L-1 leptin 可能通过抑制 PPAR γ和 LXR α来抑制 perilipin、SCD α、FAS、ACC α mRNA 的表达,从而调控猪原代培养脂肪细胞中的脂质代谢,而150 nmol·L-1 leptin 可能引起 leptin 的抵抗进而削弱 leptin 的调控作用.     

Leptin长型受体与神经肽Y在猪前脑内共存

用原位杂交与免疫组织化学相结合的方法研究了 5头三元杂交仔猪前脑内leptin长型受体mRNA与神经肽Y(NPY)免疫反应阳性物质的共存关系。实验结果表明 ,leptin长型受体mRNA和NPY免疫反应阳性神经元分布于下丘脑漏斗核和前室周核、海马、杏仁核及大脑皮质。上述结构内一些表达leptin长型受体mRNA的神经元也含有NPY免疫反应阳性物质 ,即leptin长型受体与NPY共存于同一神经元内。提示leptin可能通过下丘脑漏斗核和室周核以及边缘系统的海马和杏仁核 ,甚至大脑皮质中表达leptin长型受体mRNA的NPY免疫反应阳性神经元调节动物的摄食、能量代谢、生长和繁殖等活动。     

性成熟启动时间不同的母鸡瘦素及其受体mRNA表达的差异

为探讨瘦素（leptin）及其受体在禽类性成熟启动过程中的作用,试验采用120羽60日龄伊莎蛋母鸡,随机均分为2组,分别饲养于光照逐渐延长（以光／暗为8h／16h为起点每周增加0．5h光照,简称长光照组）和恒定的短光照（光／暗为8h／16h,简称短光照组）条件下,记录体重变化与性成熟时间。长光照组和短光照组母鸡分别于136和151日龄时开产。在136日龄时,每组取10只鸡宰杀后取血液、脂肪和下丘脑组织,分别检测血清leptin水平、脂肪leptin mRNA与下丘脑leptin受体mRNA的表达。结果表明：136日龄时,长光照组和短光照组母鸡血清雌二醇（E2）和leptin水平均无显著差异（P〉0．05,n=10）。相对定量RT-PCR结果显示：136日龄时,长光照组母鸡脂肪leptin mRNA表达丰度极显著高于短光照组（P〈0．01,n=10）,但下丘脑leptin受体mRNA的表达水平无显著差异（P〉0．05,n=10）。以上结果提示：15d的性成熟时间差异并不伴随产蛋母鸡血清leptin及下丘脑leptin受体mRNA表达水平的显著变化,而脂肪leptin mRNA表达水平与血清leptin蛋白水平的不一致性则提示循环leptin的其他组织来源。     

蓝塘猪和长白猪leptin和leptin受体基因表达的变化

用实时荧光定量PCR方法研究了蓝塘猪和长白猪1、27、90、150和180日龄阶段脂肪组织中leptin基因mRNA和下丘脑中leptin受体基因mRNA的变化,并对2个品种不同生长阶段血液中leptin含量的变化规律进行了探讨。结果表明:(1)蓝塘猪180日龄时皮下脂肪中leptin基因表达量显著高于其它各阶段,而与长白猪相比,蓝塘猪除1日龄低于长白猪外,其它各个阶段均高于长白猪,180日龄两者差异极显著;长白猪各阶段间差异不显著;(2)蓝塘猪180日龄时下丘脑中leptin受体基因的表达量显著高于其它各阶段,长白猪180日龄时最高,且显著高于1日龄和27日龄,蓝塘猪与长白猪1日龄时差异显著;(3)蓝塘猪血清中leptin浓度各阶段均高于长白猪,两品种均是150日龄时最高,蓝塘猪150日龄显著高于27日龄和180日龄,长白猪各阶段差异不显著。     

鳜不同亚型瘦素受体基因克隆与表达分析

以鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象,使用cDNA 3′末端快速克隆法扩增瘦素受体基因(lepr)cDNA序列,获得了由mRNA 3′端可变剪切产生的鳜lepr的4个不同亚型,包括编码序列(coding sequence, CDS)长度为3 474 bp、编码1 157个氨基酸的长型受体亚型lepr-L,以及3个短型受体亚型lepr-S1、lepr-S2和lepr-S3,CDS长度分别为1 512、945和915 bp,分别编码503、314、304个氨基酸。对氨基酸序列进行结构域分析和多重比对发现,鳜lepr长型受体亚型包含完整的功能域,短型受体亚型无跨膜区及胞内结构,鳜lepr及其leptin结合域(leptin binding domain, LBD)序列保守程度高。鳜lepr在鳃中表达最高,其次是肾和垂体,腹腔注射鳜leptin B而非leptin A的同源重组蛋白2 h后引起脑lepr表达量的升高(P0.05)。以上结果表明,鳜leptins能引起组织中lepr表达的不同变化而发挥独特的生理功能。     

鸭leptin基因在大肠杆菌中的融合表达及生物学活性分析

 【目的】研究鸭leptin在体外高效表达特点，探讨表达产物的生物学活性及其功能。【方法】构建重组鸭leptin基因原核表达菌株，重组菌株经不同浓度IPTG和不同时间诱导后，对表达蛋白进行提取、纯化、复性和浓缩，经注射昆明小鼠后，对小鼠的体重﹑采食量和体脂含量进行分析。【结果】鸭leptin在大肠杆菌中实现了高效特异性融合表达，融合蛋白分子量约为20 kD，其中16 kD为鸭leptin基因表达产物，目的蛋白在0.2 mmol•L-1 IPTG的诱导下，表达量最高约占菌体总蛋白的57%。重组蛋白纯化﹑复性﹑浓缩后，能够明显降低小鼠摄食量、体重和体脂含量。【结论】鸭leptin基因在大肠杆菌中进行了高效融合表达，表达产物具有明显的生物学活性。     

瘦素影响强直性脊柱炎Th17相关细胞因子表达的研究

取30例强直性脊柱炎(AS)患者和30例健康对照组外周血清和膝关节滑液,采用放射性免疫法和双抗体夹心酶免疫吸附法分析瘦素(leptin)、IL-17、TNF-α、IL-6含量,探讨leptin、Th17细胞因子与AS病情活动的相关性。结果表明:AS患者外周血和膝关节滑液中leptin、IL-17、TNF-α、IL-6含量比健康对照组明显升高(P0.01)。AS外周血和关节滑液中leptin的表达水平与IL-17、IL-6呈显著相关(P0.01),与TNF-α表达相关不显著。AS患者外周血清和关节滑液中leptin、IL-17、IL-6平均表达水平与AS患者的血沉、C-反应蛋白、Bath强直性脊柱炎活动指数呈显著相关(P0.05),TNF-α的表达水平与AS病情活动指标相关不显著。说明leptin及Th17相关细胞因子在AS患者外周血和关节滑液中明显升高,可能直接参与了AS关节炎症过程。     

鸽子瘦素基因成熟肽重组蛋白的表达及多克隆抗体的制备

根据鸽子瘦素基因(leptin)编码区序列(Gen Bank:HG797022)设计并合成鸽子leptin基因编码胞外域成熟肽的c DNA序列,然后将这段序列克隆到表达载体p GEX-4T-1的Eco R I与Not I酶切位点之间,构建重组表达载体(p GEX-4T-1-leptin)并将该载体转化到大肠杆菌Arctic Express中。转化菌经IPTG诱导后表达了分子量为44 270的鸽子leptin重组蛋白。经镍柱亲和层析纯化后的重组蛋白质与矿物油佐剂混合,免疫日本大耳白兔,制备抗leptin多克隆抗体。经过4次免疫之后,获得高效价的抗leptin多克隆抗体。     

三羟基异黄酮对脂肪酸氧化关键酶的调控研究

[目的]探讨三羟基异黄酮(Genistein,Gen)对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型中脂肪酸β氧化限速酶肉碱棕桐酰转移酶1(Carnitine acetyltransferase 1,CPT-1)的调节作用。[方法]油酸诱导细胞建模,实时荧光定量PCR测定三羟基异黄酮处理后细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和CPT-1的mRNA相对表达量。[结果]Gen能经由PPARs途径上调CPT-1 mRNA的表达。[结论]该研究为三羟基异黄酮在临床药理上的应用以及非酒精性脂肪肝的预防治疗和药物研究提供了试验依据。     

槲皮素对肉鸡脂肪细胞脂质代谢作用

文章以肉鸡脂肪细胞为模型,探讨槲皮素对过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)调节脂质代谢作用。试验分对照组(5%培养液)、DMSO对照组(5%培养液+DMSO)、试验组1(5%培养液+10 mg.L-1槲皮素)、试验组2(5%培养液+20 mg.L-1槲皮素)、试验组3(5%培养液+40 mg.L-1槲皮素)。采用ELISA法检测脂肪细胞加槲皮素培养24、48、72 h后PPARγ、脂肪酸合成酶(FAS)、脂蛋白酯酶(LPL)、脂肪酸转运蛋白1(FATP1)、瘦素(leptin)蛋白含量,利用荧光定量PCR检测PPARγ、FAS、FATP1和LPL mRNA表达,利用酶法检测脂肪细胞甘油三酯(TG)含量。结果表明,与对照组相比,24 h,试验组3 PPARγmRNA表达显著降低(P<0.05);试验组1、2和3FATP1 mRNA表达均显著降低(P<0.05);试验组3 FAS mRNA表达显著降低(P<0.05),而试验组1和2有降低趋势(P=0.052),而试验组3 FAS蛋白含量显著降低(P<0.05);试验组2和3 TG含量均显著降低(P<0.05);试验组3leptin含量显著提高(P<0.05)。48 h,试验组3 PPARγmRNA表达显著降低(P<0.05),而试验组1和2有下降趋势(P=0.053),试验组1、2和3 PPARγ蛋白含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 LPL mRNA均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 FAS mRNA表达有下降趋势(P=0.05),而试验组2、3FAS蛋白含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 FATP1 mRNA表达和蛋白含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3TG含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 leptin含量均显著提高(P<0.05)。72 h,试验组1、2和3 PPARγmRNA表达和蛋白含量均显著降低(P<0.05);试验组2 LPL mRNA显著降低(P<0.05);试验组3 FATP1 mRNA表达显著降低(P<0.05),而试验组1和2有下降趋势(P=0.057),试验组1、2和3 FATP1蛋白含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 FASmRNA表达均显著降低(P<0.05),而试验组3FAS蛋白含量显著降低(P<0.05);试验组1、2和3TG含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 leptin含量均显著提高(P<0.05)。综上所述,槲皮素可以抑制脂肪水解、跨膜转运和脂肪胞内沉积,从而抑制脂肪细胞脂肪合成代谢,但作用效果未见槲皮素浓度和时间依赖性。即槲皮素可抑制鸡脂肪细胞PPARγ调节脂肪合成代谢,进而减少肉鸡脂肪沉积。     

齐卡兔瘦蛋白基因在不同组织中的表达水平与肉质指标的关联性

选取齐卡兔(N系)为实验材料,利用荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction, qRT-PCR)技术测定齐卡兔在35、70、84和91日龄4个阶段腿肌、肾周脂肪和皮下脂肪中瘦蛋白基因(leptin)的表达水平,并检测腿肌的p H值、熟肉率、滴水损失、肌内脂肪等相关肉品质指标,从而分析齐卡兔在这3种组织中leptin基因表达水平与所测肉品质指标的关联性。结果表明:母兔肾周脂肪和腿肌中leptin基因的表达量高于公兔,而在皮下脂肪中公兔的leptin基因表达量高于母兔。84日龄母兔皮下脂肪中leptin基因的表达量与肌内脂肪含量、熟肉率和屠宰后24 h的p H值的相关系数分别为0.95(P0.01)、0.83(P0.05)和0.67(P0.05);公兔屠宰后24 h的pH值与腿肌中leptin基因表达量的相关系数为-0.85(P0.01)。根据分析,认为leptin基因在齐卡兔各组织中的表达量与肉质指标具有显著的相关性,可以作为研究家兔肉质的一个候选基因,从而为采用分子遗传标记技术和开展肉兔的遗传改良提供参考。     

日粮不同能量水平对乌金猪脂肪组织Leptin和RBP4基因表达的影响

 研究日粮不同能量水平对乌金猪脂肪组织中脂肪细胞分泌因子leptin和RBP4基因表达的影响。选取体重约15kg的乌金猪54头,随机分为3组,分别饲喂消化能为14.22,12.89,11.74MJ/kg的日粮,在30,60,100kg体重时屠宰,分别测定血液中胰岛素和葡萄糖含量及胴体脂肪沉积率,取皮下脂肪组织用荧光定量PCR检测leptin和RBP4基因的表达水平。结果显示,饲喂高能量日粮乌金猪胴体脂肪沉积率和血液胰岛素含量高于饲喂低能量日粮组（P<0.05）,日粮能量水平对血液葡萄糖含量无明显影响（P>0.05）;脂肪组织中leptin基因的表达水平升高（P<0.05）,RBP4基因的表达水平降低（P<0.05）。表明高能量日粮通过上调leptin基因的表达、下调RBP4基因的表达,和胰岛素的作用促进脂肪沉积。     

德昂族酸茶防治非酒精性脂肪肝作用的研究

【目的】酸茶为德昂族独特的茶叶制品。探究酸茶对防治外源性膳食诱导引起的非酒精性脂肪肝的预防作用。【方法】通过动物试验,以保肝药为对照,分别灌胃不同剂量的酸茶水浸提物,为期4周。对血脂指标、肝功能指标、抗氧化指标以及胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)和细胞色素P4502E1 (CYP2E1)的表达量进行检测,对试验大鼠肝脏组织进行病理性观察及评价。【结果】酸茶能够有效降低非酒精性脂肪肝试验大鼠血清中CHOL和TG的含量,同时增加HDL-C的水平;可降低大鼠血清中AST和ALT活性;升高大鼠血清和肝脏组织GSH-Px和SOD的活性。高剂量酸茶能够改善由于脂质堆积引起的肝组织病变问题。酸茶可提高试验大鼠肝脏组织中IGF-1 mRNA的表达,抑制CYP2E1 mRNA的表达。【结论】德昂族酸茶具有预防大鼠非酒精性脂肪肝的作用。     

鱼类leptin基因研究进展

简述了近年来鱼类leptin研究进展,介绍了鱼类leptin基因的结构、表达与分泌及生物学作用,分析了leptin对摄食和体重的调控、与新陈代谢的关系、对繁殖的调控以及对衰老的影响等。     

Leptin介导的SOCS3信号通路研究进展

 Leptin介导的SOCS3信号通路是由leptin,leptin受体,SOCS3,IRS和FAS组成的,leptin与其受体结合后经过一系列信号转导最终导致FAS的表达量增加,由FAS催化脂肪酸的合成,因此,对本信号转导通路的调节可以调控动物机体的脂肪代谢。本文主要介绍近年来关于leptin介导的SOCS3信号通路的组成、调节和作用机制的最新研究进展。     

太湖鹅与皖西白鹅IGF-I和MSTN mRNA表达与屠宰性状相关性分析

文章以太湖鹅和皖西白鹅为研究素材,采用多重荧光竞争性PCR方法研究鹅70日龄胸肌和腿肌中IGF-I、MSTN mRNA表达情况,并与屠宰性能做相关性分析,探讨IGF-I、MSTN对鹅骨骼肌生长的影响。结果表明,胸肌IGF-I mRNA表达量太湖鹅极显著高于皖西白鹅,腿肌MSTN mRNA表达量太湖鹅显著高于皖西白鹅,胸肌MSTN mRNA、腿肌IGF-I mRNA没有品种差异性。鹅群体,腿肌IGF-I mRNA表达量公鹅极显著大于母鹅,MSTN mRNA表达量腿肌极显著高于胸肌,IGF-I mRNA表达量没有组织差异性。胸肌和腿肌组织中IGF-I mRNA表达量和MSTN mRNA表达量极显著正相关,腿肌IGF-I mRNA表达量和胸肌率显著负相关,皖西白鹅腿肌MSTN mRNA表达量与体重、腿肌重显著负相关。     

脑缺血大鼠凝血酶原和PAR-1的变化及滋阴活血解毒方的干预作用

目的观察局灶性脑缺血模型大鼠脑组织凝血酶原(prothrombin , F2) mRNA和蛋白酶激活受体一I (PrO-tease-activated receptor-1 ,PAR-1)mRNA表达变化及滋阴活血解毒方的千预作用方法将24只大鼠随机分为假手术组,模型组、滋阴活血解毒方组、阿加曲班4组,每组分1,3 d两个时相点〔制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,检测各组大鼠脑组织中凝血酶原mRNA及PAR-1mRNA的表达水平、结果与假手术组比较,模型组脑组织中凝血酶原mRNA ,PAR-1mRNA表达明显增强(P<0.01) ,滋阴活血解毒方组和阿加曲班组能明显下调凝血酶原mRNA,PAR-1mRNA表达(P<0.01)〔结论局灶性脑缺血大鼠凝血酶原mRNA和PAR-1mRNA的表达增强,滋阴活血解毒方能抑制其表达,减轻凝血酶的毒性反应、     

瘦蛋白对犊牛肝细胞PC mRNA表达及其活性的影响

取单层培养72 h生长良好的犊牛肝细胞,采用单因素重复试验,分别添加0,2.5,5.0,10.0,50.0,100.0 ng/mL的牛重组牛瘦蛋白(Leptin),每个处理3个重复(每重复2孔)。再培养12 h后分别提取RNA并制备细胞上清液。应用荧光定量PCR方法检测外源leptin对肝细胞糖异生关键酶丙酮酸羧化酶(Pyruvate car-boxylase,PC)基因表达的影响,同时用比色法检测其对肝细胞PC活性的影响。结果表明:一定浓度的Leptin显著抑制了肝细胞PC mRNA表达,降低了PC活性。