苏中某地区猪戊型肝炎病毒检测及基因序列分析

应用反转录-巢式聚合酶链法(RT-nPCR)对苏中某猪场猪粪便标本和生猪屠宰中心猪胆汁标本进行HEVRNA的检测,并对部分阳性标本进行克隆测序及阳性分析,以探讨猪戊型肝炎在该地区的流行特点。结果表明:采集的90份胆汁标本中,有4份HEV检测呈阳性,阳性率为4.44%。在140份猪粪便标本中,只有3～4月龄的35份标本中检出3份HEV RNA阳性,阳性率为8.57%。其余月龄粪便标本中均未检出HEV RNA阳性。序列分析发现猪HEV相互之间在ORF2部分区域的核苷酸序列的同源性为88.0%～100.0%。与基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型的同源性为78.0%～86.0%,81.3%～82.7%,78.7%～84.0%,86.0%～98.7%。证明该地区存在猪戊肝病毒,且该猪源HEV属于基因Ⅳ型。     

上海地区猪群中戊型肝炎病毒的流行情况

猪戊型肝炎是一种人畜共患病,为了弄清上海地区猪群中戊型肝炎的流行情况,评估其感染人的风险,于不同季节调查上海地区不同区(县)规模化猪场中不同月龄猪戊型肝炎病毒的感染状况.试验应用逆转录-巢式聚合酶链法fRT-nPCR)对9个区(县)51个猪场(次)的猪粪便标本和1个生猪屠宰中心的127份猪胆汁标本进行HEV RNA检测,结果为51个猪场次中31场次为阳性,阳性率为60.78%.1 699份猪粪便标本中201份为HEV RNA阳性,阳性率为11.83%;阳性标本季节分布明显,以夏秋季为主,平均阳性率为14.63%,而冬春季平均阳性率为5.91%;1月龄以内的仔猪感染率低于10%,为8.60%,其他均在10%～15%左右;9个养猪的区(县)中均存在戊型肝炎病毒的感染,但差异也较大,最高为18.30%,而低的只有0.61%.127份猪胆汁标本中有9份为阳性,阳性率为7.09%.结果说明上海地区的猪群中存在着较为广泛的猪戊型肝炎病毒的感染,提示密切接触者存在感染的风险.     

云南省猪戊型肝炎血清流行病学调查

 为了解云南省猪群戊型肝炎流行情况,从各地养猪场、屠宰场共采集270份血清,应用双抗夹心酶联免疫测定法（DS-ELISA）进行血清学调查。检测结果174份样品呈HEV-IgG抗体阳性,总阳性率64.4%,其中养殖场血清抗体阳性率为55.6%,屠宰厂为68.9%。比较养殖场的各年龄阶段猪群显示,母猪群血清抗体阳性率最高,为71.4%。本研究表明猪戊型肝炎在云南省也有存在,并呈一定的流行趋势,感染率随年龄增长而升高。     

屠宰场待宰生猪及其屠宰过程中金黄色葡萄球菌的污染检测与分析

通过陕西省和河北省部分地区屠宰场的待宰生猪、屠宰环节胴体及环境采集样本,对金黄色葡萄球菌进行分离鉴定与流行分析。取样地点分别在陕西咸阳某屠宰场和河北保定某屠宰场,3次共采集样品745份。分别采用国家标准GB 4789.10—2016的分离鉴定方法及显色培养基筛选、16S rRNA基因序列分析等方法进行了生猪从待宰到屠宰环节中的金黄色葡萄球菌污染检测,并进行了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)筛查。检测结果显示,从745份样品中共分离出金黄色葡萄球菌98株,总分离率为13.2%;其中,在屠宰场1a、屠宰场1b和屠宰场2样本中的检出率分别为15.6%、10.4%和13.8%,3次检测结果无明显相关性(P0.05);从采样部位看,猪鼻腔拭子样本中金葡菌阳性率最高,平均为20.5%,明显高于体表拭子样本检出率平均5.5%(P0.01),这说明待宰生猪及宰后猪鼻腔为金黄色葡萄球菌的主要污染部位;在屠宰场地面、空气及器具样本中均检出了金黄色葡萄球菌,说明屠宰场环境中存在金葡菌污染,其中以屠宰场2较为严重。进一步筛查与分析结果显示,上述98个金黄色葡萄球菌分离株中有12个为MRSA菌株(12.2%),且其中11株来自屠宰场2。对seb等10个特异性肠毒素基因的检测结果表明,携带肠毒素基因的菌株在3批(屠宰场1a、1b和2)金葡菌分离株中分别占比42.9%、29.6%和44.4%;肠毒素基因的总体检出率为10.6%,其中以sem、sei、sen、seg、sek的检出频次较高;大部分金葡菌分离株携带肠毒素基因数≤3个,但来自屠宰场2的2个MRSA菌株均携带≥5个肠毒素基因,这提示了毒力基因与MRSA菌株高致病性的关联性。研究结果表明,金黄色葡萄球菌等食源性病原菌在生猪养殖到屠宰等各个环节中都存在着不同程度的污染与传播,不同屠宰场食源性致病菌的污染传播存在一定差异。高度耐药的超级致病株MRSA在待宰生猪、屠宰环节甚至在屠宰场环境中的检出提示其对于肉食品安全的严重风险。     

猪戊型肝炎病毒新疆株swCH25全基因序列的分析

 设计18对PCR引物分片段扩增猪戊型肝炎病毒新疆分离株swCH25全基因，对两末端采用末端快速扩增方法（RACE）进行扩增，扩增产物克隆到pMD18-T载体并测序。用DNAstar软件进行序列同源性分析，PHYLIP软件绘制基因进化树，在全基因序列的基础上比较猪HEV与其它HEV基因型的差异和人源HEV的关系。结果显示swCH25全序列除去3′poly（A）尾，由7 243个核苷酸组成，ORF 1～3分别编码含1070，674和114个氨基酸的蛋白质。全基因序列与HEVⅠ、Ⅱ和Ⅲ型同源性73.5%～75.7%，与Ⅳ型的同源性为83.5%～89.8%，其中与Ⅳ型中国人源T1株最高，达89.8%。ORF1与Ⅰ～Ⅲ和Ⅳ型的核苷酸同源性分别为71.6%～74%和82.3%～89.4%，氨基酸同源性为80.7%～86.1%和94.3%～96.0%；ORF2与Ⅰ～Ⅲ和Ⅳ型的核苷酸同源性分别为78.4%～81.3%和87.1%～90.9%，氨基酸同源性为89.7%～93.8%和97.2%～98.2%；ORF3与Ⅰ～Ⅲ和Ⅳ型的核苷酸同源性分别为84.4%～87.3%和95.4%～96.8%，氨基酸同源性为74.8%～83.2%和93.8%～97.4%,基因进化树显示swCH25与基因Ⅳ型人源T1株最接近，在同一分支上。swCH25株是国内第一个测出全基因序列的猪戊型肝炎病毒。     

上海地区猪戊型肝炎病毒部分序列的克隆与分析

对上海地区几个猪场的戊型肝炎感染情况进行了调查,共采集粪便样品36份,通过RT-nPCR的方法应用通用引物对病毒基因组的ORF2部分片断进行扩增,36份样品中有5份RT-nPCR阳性,HEV RNA阳性率为13.9%,去除相同的序列,得到2株HEV的ORF2部分序列。序列分析表明,这两段序列与基因I、II、III、IV的遗传距离分别为0.183、0.207、0.230、0.102和0.177、0.226、0.240、0.108。系统进化分析显示,这两株病毒都属于基因Ⅳ型。     

皖南某野生动物园戊型肝炎跨种感染的分析

从皖南某野生动物园采集包括鸟类在内的22种动物粪便样品共计38份,采用RT-nPCR法检测HEV。结果表明,28.9%的粪样呈HEV RNA阳性,其中包括多种鸟类粪样。对所有11个HEV分离株的基因序列分析表明,它们均属基因4型,同源性为96%~100%。这提示,在该野生动物中心发生了HEV的跨种间感染,并且哺乳动物HEV可以在自然条件下感染鸟类。     

四川省石棉县生猪胴体表面菌落总数的检测

应用国标法对石棉县畜禽定点屠宰场屠宰的60份生猪胴体体表样品进行菌落总数检测.结果表明,生猪胴体表面样品中菌落总数的超标率达31.7％.这说明石棉县畜禽定点屠宰场屠宰的卫生质量达标率相对较差,因此需要进一步改善屠宰生产和管理水平.     

鸡西地区猪戊型肝炎血清流行病学调查

为了了解鸡西地区猪群戊型肝炎病毒的感染状况及其流行特点,为了进一步揭示鸡西地区猪HEV感染与人HEV感染之间的关系,我们分别采集鸡西5个不同地区(鸡东120份、虎林市89份、东方红镇64份、迎春镇75份、密山96份)444份猪血清,应用双抗原夹心酶联免疫法(DS-ELISA)检测猪血清中的抗HEV IgG抗体的阳性率,并用X2检验比较这5个地区猪抗HEV IgG抗体阳性率的差异。结果显示,所检测的5个地区均为抗HEV IgG抗体阳性地区;444份血清中有79份呈抗HEV IgG抗体阳性,阳性率为17.79%。这5个地区猪血清抗HEV IgG抗体阳性率鸡东为16.67%(20/120)、虎林市为20.22%(18/89)、东方红镇17.19%(11/64)、迎春镇14.67%(11/75)、密山19.79%(19/96)。X2检验各地区之间抗HEV IgG抗体阳性率,差异不显著(P>0.05),说明鸡西地区猪中普遍存在着HEV感染。     

河南地区猪戊型肝炎病毒的检测及基因序列分析

对从河南省郑州、洛阳、新乡、焦作、周口等5地市采集的133份血清样品进行戊型肝炎病毒( Hepatitis EVirus,HEV) IgG抗体分析;通过反转录聚合酶链式反应的方法(RT-PCR)对从郑州、中牟、新郑、济源、濮阳等5个地市采集的200份粪便样品进行HEV RNA检测.检测结果表明,79.70％的血清为HE...     

辽宁省猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体的血清学调查

摘要： 从辽宁省各地区采集猪血清样本,应用血凝和血凝抑制试验检测血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)抗体。结果,910份样品中有451份呈现HEV抗体阳性反应,阳性率为49.6%;抽检了10个规模化养猪场共280份样品,阳性率高达70.0%;抽查了不同年龄阶段猪血清样品,种母猪阳性率最高,为73.8%,仔猪次之,为67.5%,育肥猪最低,为37.0%。调查证明辽宁省各地区普遍存在HEV感染,被采集血清的成年猪未表现临床症状,说明HEV在本地区的猪群中主要表现为隐性感染,仔猪有少数出现症状,诊断为HEV与猪瘟或猪繁殖与呼吸综合征等混合感染。关键词：血凝性脑脊髓炎病毒;血清学调查;猪;     

广西猪牛羊鸡戊型肝炎血清流行病学调查分析

[目的]全面掌握了解广西各地猪、牛、羊、鸡戊型肝炎(HE)的感染状况及其流行特点.[方法]采用双抗原夹心ELISA检测来自广西各地猪(850份)、牛(392份)、羊(428份)、鸡(352份)共2022份血清中的抗HEV抗体,并比较不同地区、不同动物间抗HEV抗体阳性率的差异.[结果]4种主要畜禽的血清总抗HEV抗体阳性率为44.76%(905/2022),其阳性率大小排序为:猪(77.53%)>牛(27.81%)>羊(21.03%)>鸡(13.35%);不同地区的畜禽血清抗HEV抗体阳性率都是以猪群的最高,均在59.00%以上.而从不同地区的4种畜禽血清总抗HEV抗体阳性率来看,以南宁市的最高(61.94%)、河池市的最低(30.93%).[结论]广西的猪、牛、羊、鸡群中均存在HEV感染,且猪在传播HEV方面起主导作用.     

人、猪和鸡血清中抗禽戊型肝炎病毒抗体的检测与鉴定

通过对人、猪和鸡血清中的抗禽戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)ORF2抗体的检测以及对阳性血清抗体特异性的鉴定,本研究结果表明,人、猪和禽血清中抗禽HEV ORF2抗体阳性率为0.91%～62.5%.因为禽与哺乳动物HEV ORF2抗原具有共有的抗原表位,而阳性血清中抗禽HEV ORF2特异性抗原表位抗体的阳性率为41.3%～92.1%,提示人、猪和鸡都有感染禽HEV的可能性,这为进一步验证禽HEV可能造成的人兽共感染提供新的科学依据.     

上海某猪场发现基因3型和基因4型戊型肝炎病毒共存

在对猪戊型肝炎流行病调查过程中,通过Nested RT-PCR方法,扩增基因组ORF2的150 bp目的片段,测序并进行分析。结果表明:某猪场同时存在3型和4型HEV,这是我国首次在同一个猪场发现不同基因型HEV共同感染的报道。对基因3型HEV在该猪场流行趋势进行跟踪调查,基因3型阳性率最高达20%,最低4%,平均11.5%;基因4型最高阳性率30%,最低20%,平均23.5%。此研究结果提示基因3型HEV在该猪场与基因4型相比在竞争感染中不占主导优势。     

黑龙江省家畜血清HEV抗体和抗原水平的检测

[目的]探索黑龙江省戊型肝炎病毒（HEV）在家畜中的分布情况。[方法]采用酶联免疫吸附试验法（EusA）,检测来自黑龙江省2个地区血清样品3月龄以上大猪719份、3月龄以下小猪840份、牛505份、羊515份HEV抗原和抗体阳性率。[结果]猪群抗体水平最高,猪群（89．71％）可能比其他种群更容易感染HEV（P〈O．001）。黑龙江省共检测出HEYAg阳性血清样品猪59份,牛3份,羊1份。与吉林、辽宁相比,黑龙江省猪群HEV感染率较高。[结论]黑龙江省猪群感染HEV较为普遍,且大猪感染率高于小猪。     

戊型肝炎病毒树鼩感染模型的初步研究

 戊型肝炎病毒（HEV）研究多以灵长类动物为感染模型。由于灵长类动物价格昂贵,实验条件的控制和饲养管理较困难等原因,严重阻碍了HEV研究进展。本研究对应用树鼩（Tupaia belangeri）建立HEV感染模型的可行性进行了探索。从猪群中分离、鉴定HEV,经静脉注射途径感染树鼩,按计划采集粪便、血液以及器官组织,应用巢式RT PCR检测树鼩感染情况,观察感染后树鼩各器官组织病理学病化。结果发现,感染7d后血液、粪便、肝脏、小肠等样品可检测出HEV RNA,病毒血症持续约2周。组织病理学观察结果,人工感染HEV的树鼩肝脏可见静脉窦淤血、多发性淋巴细胞浸润、库普弗细胞增多等病变。研究结果表明树鼩对HEV具有易感性,感染后肝脏出现病毒性肝炎的病理学变化,具有作为戊型肝炎的感染模型的潜在价值。     

昆明地区犬戊型肝炎流行的血清学调查

为了解昆明地区犬戊型肝炎(HE)流行的情况,共采集血清样本268份,其中包括昆明主城区家庭散养犬血清样本163份,养犬场犬血清样本65份,城市流浪犬血清样本40份。采用双抗原夹心ELISA方法对上述血清样本进行HEV抗体的检测。结果显示,268份犬血清中HEV抗体平均阳性率为48.51%,城市流浪犬HEV抗体阳性率较高,不同品种不同年龄犬HEV抗体阳性率有差异显著。结果表明昆明地区犬戊型肝炎已经普遍流行,尤其以流浪犬HEV的感染较为严重。