微生物转化人参皂苷Rc和Rd的研究

人参皂苷尤其是稀有人参皂苷具有重要的药理活性,但在人参中含量极其稀少.通过运用薄层层析和高效液相色谱分析技术,对4种真菌转化人参皂苷Rc和Rd生成稀有皂苷的代谢作用进行分析,结果显示4种真菌均具有较强转化人参皂苷Rc和Rd的能力.其中,转化人参皂苷Rc的主要代谢途径推测为Rc→Mc1→Mc→CK→PPD;而在转化人参皂苷Rd的过程中可能存在2条代谢途径,其中主要途径推测为Rd→F2→CK→PPD,而另一条途径则由人参皂苷Rd直接转化为Rg3.试验结果为进一步通过优化试验条件积累代谢产物Rg3或CK,以及分离纯化相应的人参皂苷糖苷酶提供了良好基础.     

HPLC-MS/MS法检测三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb1的含量

利用HPLC-MS/MS法,建立测定三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb1含量的分析方法.方法:色谱柱为BDS HYPERSUL C18(150 mm×2.1 mm,5 μm)柱;流动相:乙腈-水(梯度洗脱);柱温:30 ℃;质谱条件:采用负离子多反应监测方法(MRM)测试;用于定量分析的对照品离子对为:人参皂苷Rb1 m/z 1107.9→783.7,内标物紫杉醇m/z 852.5→525.3.结果:人参皂苷Rb1标准曲线的线性范围为0.159～16.0 μg/mL,精密度和准确度等均符合样品分析的要求.结论:该法准确、灵敏、特异性强,适用于三七茎叶总皂苷及其制剂中人参皂苷Rb1浓度的检测.     

人参中人参总皂苷测定方法研究

建立了一种人参中人参总皂苷的测定方法。采用氨水将丙二酰基人参皂苷转化为相应的中性皂苷,超高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1、Re、Rf、Ro、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd的量,9种人参皂苷总量可代表人参中主要皂苷含量。生晒参片中人参总皂苷含量较低,生晒参须中人参总皂苷含量较高,光支生晒参和全须生晒参总人参皂苷含量在2.11%～6.01%之间。该方法准确,重复性好,完善了人参质量评价体系。     

人参、西洋参不同部位中齐墩果酸型皂苷含量的对比分析

通过对比分析人参和西洋参根、茎、叶中齐墩果酸型皂苷种类及人参皂苷Ro含量的差异,观察齐墩果酸型皂苷的分布特征。采用高效液相色谱质谱联用技术对齐墩果酸型皂苷进行鉴定及Ro含量测定。色谱柱:Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈、2.5mmol/L乙酸铵(w/v)及0.05‰氨水(v/v)水溶液;梯度洗脱;流速:1m L/min;检测波长:203nm。共鉴定了6种齐墩果酸型皂苷,分别为人参皂苷Ro(1)、竹节参皂苷Iva(2)、姜状三七皂苷R1(3)、Stipulenaoside R2(4)、Armatoside(5)和Elatoside K(6)。人参根、茎和叶中均含有化合物1、2和3;西洋参茎中含有化合物1、3和4,叶中含有化合物1和4,根中含有上述6种化合物。对含量较高的人参皂苷Ro进行分析发现,根部为人参皂苷Ro的主要积累部位,且西洋参根部含量(0.576%)高于人参根部(0.214%);两者不同部位人参皂苷Ro含量差异较一致,皆为根茎叶。人参和西洋参不同部位齐墩果酸型皂苷的种类存在差异,人参皂苷Ro在二者不同部位的分布特征较为相似,根部为齐墩果酸型皂苷的主要积累部位。     

人参总皂苷提取工艺的优化研究

比较了温浸法、乙醇回流法和超声波法等3种方法提取人参总皂苷的工艺,结果表明:超声波法提取人参总皂苷方法最佳,快速,安全,成本低且可以有效保护皂苷不被破坏.在此基础上,以标准品人参皂苷Re为指标,通过正交实验选择超声波法的最佳提取时间、溶剂量和提取温度;通过分析研究,温度对人参总皂苷的提取率影响最显著,溶剂量和提取时间的影响不显著.确定:采用超声波法,在提取温度40℃,提取时间为40 min,溶剂量为10倍的工艺参数条件下提取人参总皂苷为最佳工艺.     

葡聚糖凝胶LH-20柱层析法分离人参皂苷Re的研究

采用葡聚糖凝胶LH-20层析柱料和适当的分离条件,对人参皂苷Re的分离方法进行了改进。结果表明：通过该方法分离人参皂苷Re收率为58．6％,得到的人参皂苷Re的纯度为96．2％,达到了较好地分离人参皂苷Re的目的。此分离方法的柱料用量少、使用周期长、再生容易、重复性好,是一种省时、省力的分离方法。     

海藻酸钠包埋的酵母菌转化人参皂苷Rb1的研究

为探索海藻酸钠包埋酵母菌转化人参皂苷Rb1的最佳条件,选用浓度为1.25×108个·mL-1的酵母菌菌悬液进行包埋,使用紫外分光光度计测定发酵液中人参皂苷Rb1含量变化计算生物转化率。通过单因素和正交设计试验分别考察海藻酸钠浓度、包埋时间、接种量和CaCl2浓度对所包埋的酵母菌转化人参皂苷的影响,最终获得了海藻酸钠包埋酵母菌转化人参皂苷Rb1的最佳条件为包埋时间45min,接种量7%,海藻酸钠浓度5%,CaCl2浓度10%。在该条件下,所包埋酵母菌对人参皂苷Rb1的最高生物转化率为31.51%,较以往未包埋的酵母菌转化人参皂苷Rb1的生物转化率提高约3%～5%。本研究首次利用海藻酸钠包埋酵母菌转化人参皂苷Rb1,解决了酵母菌种子不能重复使用等问题,简化了灭菌、菌种活化等步骤,为人参皂苷Rb1等苷类物质的高效生物转化提供了很好的思路和可借鉴的成功范例。     

林下山参滴丸的含量测定及指纹图谱研究

测定林下山参滴丸的人参总皂苷及主要单体人参皂苷的含量,同时建立林下山参滴丸的指纹图谱。采用紫外-可见分光光度法测定林下山参滴丸中人参总皂苷的含量;采用高效液相色谱法(HPLC)测定林下山参滴丸中3种主要单体人参皂苷的含量;采用HPLC法对10批次林下山参滴丸进行标准指纹图谱分析,通过中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004 A版)进行评价,并建立林下山参滴丸的共有指纹图谱。林下山参滴丸中人参总皂苷的含量为16mg/g;人参皂苷Rg_1、Re和Rb_1的含量分别为2.667mg/g、0.433mg/g和5.100mg/g;指纹图谱有16个共有峰,稳定性、重复性、精密度考察中每个共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于4%,10批次供试品相似度大于0.95。林下山参滴丸中富含人参总皂苷及单体人参皂苷营养成分;林下山参滴丸指纹图谱可有效控制其质量。     

应用D301R树脂对西洋参果脱色工艺研究

研究D301R树脂脱色工艺参数,优选最佳脱色条件。采用高效液相色谱测定人参皂苷Re含量;紫外-可见分光光度法检测吸光值;通过树脂静态吸附和动态吸附试验,考察不同脱色时间、pH、温度以及流速脱色效果;以人参皂苷Re保留率和脱色率综合评价脱色效果。D301R树脂最佳脱色条件为温度40℃、pH 5.30和流速1BV/h,西洋参果溶液10mg/mL,脱色率84.26%±1.56%,人参皂苷保留率88.75%±1.86%。西洋参果D301R树脂脱色工艺具有很高的脱色率和较高的人参皂苷保留率。     

二醇型人参皂苷HPLC含量测定研究

本文利用HPLC法测定人参中二醇型人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd的含量.采用HPLC法,在检测波长为203nm、柱温40℃时进行检测,得到4种人参皂苷的标准曲线,进行方法学考察包括线性关系、稳定性试验、精密度试验、回收率试验、重复性试验,根据峰面积计算4种人参皂苷的浓度和含量.结果表明:得到4种人参皂苷的标准曲线及...     

超高压处理对人参化妆品的影响

采用500MPa超高压对人参化妆品均质2min,显微镜下观察发现:超高压对人参化妆品的均质效果优于常规均质。采用所建立的反相高效液相色谱法比较了均质前后人参化妆品中6种主要人参皂苷的含量,结果表明:超高压均质对化妆品中人参皂苷的含量基本无影响。Rp-HPLC的条件为YMC反相C18柱以乙腈—水进行梯度洗脱,柱温30℃,流速1.5mL/min,6种主要人参皂苷在60min内被检出。加样回收率为95.2%～97.9%,线性相关系数均0.9997。     

浸渍法提取人参皂苷最佳工艺的研究

为优选浸渍法提取人参皂苷最佳工艺条件,以人参总皂苷得率为考察指标,对影响人参皂苷提取工艺的因素进行了正交试验。结果表明:试验设计各因素对提取效果的影响程度为:溶剂量>温度>时间;浸渍法提取人参皂苷最佳工艺参数为:溶剂量为浸提物的10倍、温度60℃、浸提时间2h。     

高效液相色谱法检测人参培养须根及内生菌中皂苷的含量

[目的]检测人参培养须根及内生菌中皂苷的含量。[方法]采用高效液相色谱法同时测定植物生物反应器中人参培养须根及内生菌中10种人参皂苷单体的含量。液相体系为：Waters SymmetryC_18 Synergi色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）,柱温30℃,以乙腈为流动相A,超纯水为流动相B进行梯度洗脱,检测波长203nm,进样量10μ1。[结果]lO种皂苷基本分离,线性关系良好,稳定性、精密度和重复性均较好,平均回收率在95．07％～108．72％。[结论]该方法快速简便,重现性好,可对人参培养须根及内生菌中皂苷含量进行多指标质量控制。     

不同加热方式对丙二酰基人参皂苷降解的影响及抗氧化活性的变化

采用高效液相色谱法，测定了丙二酰基人参皂苷Rb₁、Rc、Rb₂和Rd在水浴加热、微波加热、高温蒸制和烘焙条件下的降解情况，并研究其体外抗氧化活性的变化。结果表明：在水浴加热和微波加热条件下，丙二酰基人参皂苷会降解成相应的中性皂苷(Rb₁,Rc,Rb₂,Rd)；在高温蒸制条件下，丙二酰基人参皂苷不仅降解成相应的中性皂苷，同时还有稀有皂苷20(S)-Rg₃,20 (R)-Rg₃,RK₁,Rg₅的生成；而在烘焙加热条件下，丙二酰基人参皂苷非常稳定，不发生降解。此外，体外抗氧化试验结果表明，不同加热方式下人参皂苷对DPPH·和OH·的清除能力大小为高温蒸制>烘焙>水浴和微波。此结果可为人参产品在高温加工过程中丙二酰基人参皂苷的降解规律和抗氧化能力提供基础数据，同时也为丙二酰基人参皂苷的开发利用提供了科学依据。     

正交试验优选人参皂苷Re转化为Rg_2发酵工艺

优选人参皂苷Re转化为人参皂苷Rg_2最佳发酵工艺条件,计算人参皂苷Rg_2转化产率。采用HPLC法,从发酵时间、发酵温度、复合菌添加量3方面,以人参皂苷Rg_2转化产率为评价指标,优选人参发酵条件,并进行相关性分析。人参发酵工艺为酶解温度60℃、加酶量10%、发酵时间10d。采用正交实验优选人参发酵工艺条件,该实验可以为人参皂苷Rg_2的工业化生产提供新的途径。     

响应面法优化人参叶总皂苷提取工艺的研究

为优化人参叶总皂苷提取工艺,采用单因素试验,考察温度、时间、液料比对人参叶中总皂苷得率的影响。再采用3因素3水平的响应面分析法确定人参叶总皂苷提取的优化工艺,同时建立人参叶总皂苷提取的二次项数学模型,并验证其可靠性。结果表明:热水浸提法提取人参叶总皂苷的最佳条件为温度100 ℃、时间4.2 h、液料比16。在最佳条件下,人参叶总皂苷得率为人参叶质量的14.23％。      

固相萃取-高效液相色谱法测定保健食品中8种皂苷化合物含量

旨在建立一种固相萃取结合高效液相色谱检测保健食品中8种皂苷化合物(三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd)的方法,考察不同溶剂和不同超声时间对皂苷化合物提取效率的影响以及不同固相萃取小柱对回收率的影响。通过试验,确定先用30%甲醇溶液超声20 min进行提取,然后用C_(18)小柱净化的前处理方法,并对优化后的方法进行方法学验证。结果表明,优化后的前处理方法+高效液相色谱法操作简便、耗时少,8种皂苷化合物峰面积与含量线性方程的决定系数均可达到0.999 0以上,检出限为3.7～11.4μg/g,方法的精密度和重复性良好,样品在24 h内稳定,样品的加标回收率为85.38%～108.41%。该方法可操作性强、稳定性好,可以同时检测含有三七、人参、西洋参和高丽参等原料的保健食品中8种皂苷化合物含量。     

人参双向固体发酵过程中化学成分的变化

采用紫外分光光度法测定人参双向发酵过程中总皂苷和总多糖含量;采用高效液相色谱法测定人参双向发酵过程中代表性单体化合物Rg1、Re、Rb1含量;通过薄层色谱法鉴定、高效液相色谱法测定人参稀有皂苷Rg3、Rh1、Rh2、人参皂苷CK含量,研究了人参双向固体发酵过程中化学成分的变化规律.在发酵30 d后,人参药材经过生物转化以后总多糖含量增加26.86％,总皂苷含量减少7.70％,人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量分别减少52.76％、10.86％、9.82％,Rh1、Rh1含量明显增多,分别达到0.90 mg/g和0.09 mg/g.人参在发酵过程中不仅利用了人参中的多糖,而且还生成了其他种类的多糖;人参皂苷发生了部分的转化,人参皂苷Rg1、Re、Rb1在发酵过程中被转化成了稀有人参皂苷Rg3、Rh1.     

Box-Behnken法优化不同类型人参皂苷提取工艺

以人参皂苷提取率为响应值,考察乙醇体积分数、提取温度、提取时间对人参皂苷提取率的影响。在单因素试验基础上,通过Box-Behnken试验设计,对人参皂苷的提取工艺进行优化。结果表明:原人参二醇型皂苷最佳提取工艺为76%乙醇,提取温度85℃,提取时间5 h,提取率为0.93%;原人参三醇型皂苷最佳提取工艺为77%乙醇,提取温度71℃,提取时间5 h,提取率为0.56%;齐墩果烷型皂苷最佳提取工艺为79%乙醇,提取温度72℃,提取时间5 h,提取率为0.40%;人参总皂苷最佳提供工艺为77%乙醇,提取温度80℃,提取时间5 h,提取率为1.81%。提取温度对3种类型皂苷提取率具有显著影响。原人参三醇型皂苷和齐墩果烷型皂苷比原人参二醇型皂苷对温度更为敏感,但原人参三醇型和齐墩果烷型皂苷两者之间的差异不显著。     

人参皂苷生物转化的研究进展

人参皂苷和稀有人参皂苷是人参属植物的主要活性成分,而稀有人参皂苷具有极高的药理活性,但是在人参属植物中的含量较低,因此通过生物转化得到稀有人参皂苷具有一定的研究价值。目前已有食品级微生物和各种糖苷酶、蜗牛酶等应用到人参皂苷的生物转化中。综述了人参皂苷的种类及功效、酶法和微生物转化法转化人参皂苷的工艺条件和产物,为稀有人参皂苷的大批量工业化生产提供有益的参考。