蔬菜根结线虫生防细菌的筛选

从广西蔬菜地分离到359株细菌菌株,用其细菌菌悬液和发酵上清液对南方根结线虫Meloidogyne incoqnita的二龄幼虫进行处理,评价其对南方根结线虫的毒力.结果显示,有336株菌株的菌悬液对南方根结线虫二龄幼虫具有杀伤能力,其中49株菌株对南方根结线虫的室内校正死亡率达60%以上;用细菌发酵上清液处理二龄幼虫,也表现出对幼虫活性的抑制作用,48h后有8株菌株发酵上清液原液校正死亡率达80.00%以上.     

放线菌JS2对石榴枯萎病菌及南方根结线虫的毒力研究

石榴枯萎病是一种比较难防治的土传病害,石榴根结线虫病的广泛发生加重了石榴枯萎病发生程度及病害的防控难度,所以探索兼具拮抗石榴枯萎病及根结线虫病的生防菌,才能有效环保地控制石榴枯萎病。首次报道了链霉菌JS2兼有拮抗石榴枯萎病菌及抑杀南方根结线虫的活性。本研究从云南蒙自、建水石榴园采集的土样中分离筛选得到对石榴枯萎病菌有较强拮抗活性的放线菌,其中菌株JS2对石榴枯萎病菌的室内抑菌直径为3.5 mm。研究结果表明菌株JS2对南方根结线虫有较好的抑杀作用,50%JS2菌悬上清液处理南方根结线虫卵6 d的孵化率与对照相比降低了53.33%,50%JS2菌悬上清液处理南方根结线虫二龄幼虫72 h后,校正死亡率增加了83.88%。菌株JS2兼有拮抗石榴枯萎病菌及抑杀南方根结线虫的活性,具有潜在生防价值。结合菌株JS2在各鉴定培养基上的培养特征、形态学观察及16S rD NA序列分析,将JS2初步鉴定为公牛链霉菌(Streptomyces tauricus)。     

野生大豆内生芽孢杆菌BHL3501的鉴定及对大豆胞囊线虫的抑制作用

[目的]鉴定野生大豆内生芽孢杆菌BHL3501并研究其对大豆胞囊线虫的抑制作用。[方法]通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA分析,鉴定了从野生大豆根中分离筛选到的1株具有杀线虫活力的内生细菌BHL3501,并研究了BHL3501菌株代谢物不同倍数稀释液对大豆胞囊线虫卵孵化及2龄幼虫活力的影响。[结果]BHL3501菌株初步鉴定为芽孢杆菌Bacillus sp.。其发酵原液处理24h后对大豆胞囊线虫卵孵化的相对抑制率为98.3%;10倍稀释液处理下相对抑制率为79.5%,均与无菌水对照差异显著。发酵原液处理24 h后,2龄幼虫的校正死亡率为93.1%,各稀释浓度处理均与无菌水对照差异显著。[结论]BHL3501代谢物对大豆胞囊线虫卵孵化有强烈的抑制作用,对其2龄幼虫有较强的毒杀作用。     

枯草芽孢杆菌AR11菌株对南方根结线虫的生物防治

用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilus)AR11菌株处理南方根结线虫(Meloidogyne incognita)的二龄幼虫(J2)和卵,以评价生防菌AR11对南方根结线虫的防治效果.结果表明:在处理12、24、36和48 h后,5倍稀释菌液(AR11-5)对J2的活性抑制率分别比对照(清水)高55.7%、59.5%、58.0%和47.5%;用10倍稀释菌液(AR11-10)和5倍稀释上清液(S-AR11-5)处理卵8 d后,卵孵化率分别比对照高29.1%和29.7%.用不同浓度的AR11菌液进行温室盆钵实验,结果显示:8周后根系上的根结和卵块数明显减少,其中以10倍稀释菌液处理组减少最为明显,分别比对照少68.2%和75.0%;同时番茄的冠重比对照组高25.6%.上述结果表明:AR11菌株对番茄根部根结和卵块的形成有明显的抑制作用,可抑制二龄幼虫的活性,但对雌虫产卵能力没有影响;低浓度的菌悬液和上清液对卵的孵化有促进作用;此外,该菌株还对番茄的生长有促进作用.     

一株抗南方根结线虫长形赖氨酸芽孢杆菌的分离鉴定及应用

【目的】筛选对南方根结线虫具有良好活性的生防菌株,为杀线虫制剂的研制与应用提供理论依据。【方法】采用平板稀释法对从抗线虫黄瓜根系附近采集的土壤样品进行芽孢杆菌分离,通过浸渍法筛选出杀线活性高且稳定的菌株,结合形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析对活性菌株进行分类鉴定,并通过离体、盆栽及田间试验对分离菌株防治南方根结线虫的效果进行验证。【结果】筛选出1株具有较高杀线虫活性的芽孢杆菌C1,经鉴定菌株C1为长形赖氨酸芽孢杆菌（Lysinibacillus macroides）。杀线活性测定结果表明,菌株C1发酵上清液对南方根结线虫卵孵化的相对抑制率为74.50%、对雌虫孵化的相对抑制率为95.17%、对2龄幼虫的24和48 h校正死亡率分别为98.83%和100.00%,且杀虫活性稳定;盆栽试验发现,菌株C1发酵液50倍稀释液对番茄南方根结线虫的防效为73.24%;田间防病试验结果显示,菌株C1发酵液50倍稀释液对黄瓜南方根结线虫病的防效达82.67%,且产量较清水对照增产20.0%。【结论】菌株C1不仅对南方根结线虫病具有良好的防治效果,且能促进作物生长,可作为生物农药和肥料在农业生产中开发利用。     

GJ23 生防菌剂防治南方根结线虫研究

用不同浓度的GJ23生防菌剂菌悬液和发酵上清液原液,对南方根结线虫的二龄幼虫和卵进行处理,评价GJ23生防菌对南方根结线虫的生物防治效果。结果显示,GJ23生防菌剂的菌悬液和上清液原液的不同稀释倍数均可抑制根结线虫二龄幼虫的活性,但可促进其卵的孵化。温室盆钵试验结果表明,2倍稀释的GJ23菌液对南方根结线虫的产卵能力和根结的形成有显著的抑制作用,对番茄生长有促进作用。     

枯草芽孢杆菌AR11菌株对南方根结线虫的生物防治

用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilus)AR11菌株处理南方根结线虫(Meloidogyne incognita)的二龄幼虫(J2)和卵，以评价生防菌AR11对南方根结线虫的防治效果。结果表明：在处理12、24、36和48h后，5倍稀释菌液(AR11-5)对J2的活性抑制率分别比对照(清水)高55．7％、59．5％、58．0％和47．5％；用10倍稀释菌液(AR11-10)和5倍稀释上清液(S—AR11-5)处理卵8d后，卵孵化率分别比对照高29．1％和29．7％。用不同浓度的AR11菌液进行温室盆钵实验，结果显示：8周后根系上的根结和卵块数明显减少，其中以10倍稀释菌液处理组减少最为明显，分别比对照少68．2％和75．0％；同时番茄的冠重比对照组高25．6％。上述结果表明：AR11菌株对番茄根部根结和卵块的形成有明显的抑制作用，可抑制二龄幼虫的活性，但对雌虫产卵能力没有影响；低浓度的菌悬液和上清液对卵的孵化有促进作用；此外，该菌株还对番茄的生长有促进作用。     

放线菌菌株1331发酵工艺优化及对南方根结线虫的作用效果

【目的】研究放线菌菌株1331的最佳发酵工艺条件,并探究其发酵液对南方根结线虫2龄幼虫的抑杀作用。【方法】在摇瓶试验中采用单因素筛选和正交试验对其发酵条件进行优化。【结果】该菌株的最佳摇瓶发酵培养基为发酵培养基Ⅱ;最佳发酵条件为装液量80 mL (500 mL摇瓶),种子液接种量为5%(体积分数),初始pH值7.0,培养温度25℃,150 r/min培养7 d。该条件下菌株1331产孢量为1.68×109 CFU/mL,其5%发酵稀释液处理南方根结线虫卵9 d,卵孵化率与对照相比降低了70.59%;10%和20%发酵稀释液对南方根结线虫2龄幼虫48 h的校正死亡率分别达88.97%和100%。【结论】放线菌菌株1331发酵液可有效抑杀南方根结线虫,具有潜在生防价值。     

类芽孢杆菌TX-4菌株对根结线虫的生防活性

采用类芽孢杆菌属TX-4菌株发酵提取液的不同浓度处理南方根结线虫2龄幼虫(J2)和卵。结果表明,TX-4发酵液的不同浓度提取液对线虫卵有显著的抑制作用,对J2幼虫有显著的致死作用。线虫卵的抑制率和J2幼虫的致死率,随着浸渍时间的加长和提取液浓度的升高而加大。用高浓度(10倍稀释液)提取液浸泡根结线虫卵2 d,对卵的孵化抑制率达70.4%。应用不同浓度的TX-4菌株发酵提取液或TX-4菌株细胞悬浮液防治接种J2(1000头/盆)的盆栽试验表明,两种处理均显著(P<0.01)减少番茄根瘤指数和线虫种群数量。     

番茄内生枝孢霉Wx103对根结线虫毒性的研究

本研究从番茄根结中分离得到一株根结线虫的内生生防真菌Wx103,经鉴定为Acremonium sclerotigenum。该菌株发酵液对南方根结线虫2龄幼虫具有较强的毒杀活性,发酵液处理24 h后的校正死亡率为90. 25%,处理7 d对卵孵化抑制率为41. 04%;盆栽试验中孢子液处理线虫防效为68. 72%,与3%阿维菌素微囊悬浮剂处理无显著差异。本研究丰富了根结线虫生物防治的微生物资源,可为该菌株的开发利用提供一定的理论基础。     

合肥地区南方根结线虫入侵对番茄青枯病发生的影响

[目的]为合肥地区的番茄根结线虫病和青枯病的防治提供理论依据。[方法]选用西粉3号番茄在试验基地进行基质栽培试验,从青枯病发病率的差异和相对电导率的差异的角度,探讨根结线虫的入侵对青枯病发生的影响,并对合肥地区侵染番茄的根结线虫进行鉴定。[结果]当南方根结线虫与青枯菌同时入侵番茄时,青枯病的发病率在70%～100%;而没有根结线虫入侵,青枯病的发病率仅为30%。[结论]合肥地区侵染番茄的根结线虫为南方根结线虫。在生产上,有根结线虫存在的田块,在进行番茄青枯病的防治时,应考虑到根结线虫的防治。     

番茄青枯病抗性相关根际微生物的研究进展

由茄科雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）侵染引起的植物细菌性青枯病（Bacterial wilt）素有“植物癌症”之称,是一种毁灭性土传细菌病害。目前,青枯病已成为制约我国番茄生产的主要病害之一。抗青枯病番茄品种表现出与劣质农艺性状连锁遗传的问题一直没有得到解决,而且番茄青枯病抗性主要为数量遗传,不利于优良抗病品种的选育。根际微生物参与调控植物免疫系统,提高寄主植物青枯病抗性,反之,寄主植物的健康状况也能够影响根际微生物群落组成,根际微生物在番茄青枯病防治中具有重要作用。对抗青枯病番茄根际微生物群落特征及微生物群落形成的影响因素进行总结,讨论了根际微生物参与调控番茄青枯病抗性遗传的作用机制,并对利用有益根际微生物调控番茄青枯病研究方向的热点进行展望,为番茄青枯病诱导抗性机制的解析、遗传育种以及番茄青枯病的防治与品种的合理布局提供有效参考。     

Effect of Bacillus subtilis and Pseudomonas fluorescens on Growth of Greenhouse Tomato and Rhizosphere Microbial Community

Bacillus subtilis(B. subtilis) and Pseudomonas fluorescens(P. fluorescens) are two of the most important plant growth promoting rhizobacteria(PGPR) in agriculture. An in situ trial was conducted on greenhouse tomato(Lycopersicum esculentum Mill.) to examine the effect of two bacterial strains, Bacillus subtilis(CGMCC 1.3343) and Pseudomonas fluorescens(CGMCC 1.1802), on tomato growth, gray mold disease control, catabolic and genetic microbial features of indigenous rhizosphere bacteria under lownitrogen conditions. A commercial inoculant(ETS) was also tested as a comparison. Both B. subtilis and P. fluorescens promoted growth and biomass of seedlings, while only B. subtilis was effi cient in reducing gray mold incidence in greenhouse tomato. The two bacterial strains could colonization in tomato rhizosphere soil at the end of experiment(10 days after the last inoculation). Different AWCD trends and DGGE patterns were got in different bacterial treatments; however, analyses of microbial diversities showed that indigenous soil microbes did not seem to have signifi cant differences at either the catabolic or genetic level among treatments. ETS, as a commercial microbial agent, promoted plant growth and gave a higher microbial diversity in rhizosphere soil.     

不同发根农杆菌菌株诱导番茄毛状根的研究

采用2×3×3三因子设计,研究番茄种子萌发时间、发根农杆菌菌株和侵染菌液浓度对番茄毛状根诱导率的影响。各种因子的组合均能诱导出毛状根,用PCR技术检测诱导出的毛状根,证实了发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已经整合到番茄细胞基因组中。结果表明,番茄种子萌发时间、发根农杆菌菌株和侵染菌液浓度对毛状根诱导率有显著影响,且各因子间存在交互作用。其中番茄子叶萌发8~12 d、侵染菌液浓度为OD6000.4~0.6的发根农杆菌ATCC15834,诱导毛状根发生率最高,可达58.8%,是获得番茄毛状根的适宜组合。     

2种嫁接番茄根系分泌活性物质对番茄青枯病及根际微生物的影响

【目的】鉴定分析嫁接番茄根系分泌物,研究其活性成分对番茄抗青枯病、番茄体内青枯菌及根际微生物数量的影响,为番茄青枯病的防治提供新思路。【方法】以高感青枯病番茄品种粉贝贝（Fb）、高抗青枯病番茄砧木番砧1号（No.1）和茄砧21号（No.21）为试验材料,设自根嫁接（Fb/Fb）、砧穗嫁接（Fb/No.1、Fb/No.21）和砧木自嫁接（No.1/No.1、No.21/No.21）5个嫁接组合。利用气相色谱—质谱联用仪（GC-MS）对嫁接番茄接种青枯菌前后的根系分泌物进行鉴定分析,用筛选出的活性物质对高感病番茄进行灌根处理后接种青枯菌,采用稀释平板法分离测定番茄体内和根际青枯菌及根际微生物数量。【结果】从嫁接番茄根系分泌物中鉴定筛选出邻苯二甲酸二甲酯（DP）和2,6-二叔丁基对甲苯酚（BHT）2种活性物质,其中1.0mmol/L DP与1.0mmol/L BHT混合灌根处理的抗青枯病效果最好,使高感病番茄的青枯病发病率和病情指数显著降至46.7%、42.5（P<0.05,下同）。2种活性物质灌根处理均能使根际微生物总量和细菌数量明显下降;均可降低根际真菌数量,其中BHT的抑制效果更强;均可在发病初期显著抑制放线菌的增殖,且DP的抑制效果强于BHT。【结论】筛选出DP和BHT 2种活性物质,其可通过改善根际微环境、降低植株体内和根际的青枯菌数量而提高番茄对青枯病的抗性。     

番茄根区优势菌及青枯拮抗细菌的动态变化

针对番茄青枯病,采用平板稀释分离法,用NA平板分离了健康番茄在苗期、花期、初果期和盛果期,根表、根际、根围和非根际等不同部位样品中的细菌,并分析其数量的动态变化和各生育期的根际效应。同时测定优势菌和番茄青枯菌之间是否存在拮抗关系,鉴定优势菌。结果表明,无论在哪个生育期,番茄根际土中细菌数量都远大于其他部位的细菌数;根表细菌数量也多于根围及非根际样品中的细菌数量。从鉴定结果看,优势细菌种类无论是在不同部位样品间还是在不同生育期都大体相同,没有表现出明显的动态变化。番茄对细菌数量上的根际效应在盛果期值最大。试验中获得番茄青枯菌的拮抗菌株16株。     

几株生防菌对番茄根结线虫的防效测定

通过盆栽试验和田间试验,研究了生防细菌09X01和09B18菌液蘸根处理、真菌08F04菌剂土壤处理和放线菌S07菌剂土壤处理对番茄根结线虫的防治效果以及对番茄生长的影响,为根结线虫病生防制剂的开发奠定基础。在盆栽试验中,09B18菌液蘸根处理的线虫减退率和防治效果均最高,分别为67.19%和51.35%,仅次于10%噻唑磷颗粒剂土壤处理。田间试验中,09B18菌液蘸根处理的线虫减退率仍最高,为60.97%,而防治效果最好的是S07菌剂土壤处理,为51.02%,也都接近于10%噻唑磷颗粒剂土壤处理。此外,4株生防菌均具有明显增加番茄鲜质量和提高番茄产量的作用。生防菌在防治根结线虫方面有广阔的前景。     

青枯病抗性不同的番茄土壤细菌生理群的数量变化

对青枯病抗性不同的番茄品种根际细菌生理群数量变化进行了研究.结果表明,番茄根际细菌种群和数量的变化随品种抗性、生育期不同和季节的变化而变化,其中氨化细菌的数量与番茄青枯病抗性呈正相关;根际细菌中氨化细菌、硝化细菌、好气纤维素分解细菌、固氮细菌和反硫化细菌等数量均表现为夏季高于冬季,而厌气纤维素分解细菌和硫化细菌的数量则表现为冬季高于夏季.     

植物根际促生细菌(PGPR)分离筛选与鉴定

[目的]从不同作物根际土壤中筛选对黄瓜和番茄有明显促生效应的植物根际促生细菌(PGPR).[方法]从番茄、黄瓜、茄子、辣椒四种蔬菜作物的根际土壤中进行分离,测定菌株的促生能力,获得优势广适菌株,再根据菌体形态、培养特征及16S rDNA部分序列分析进行鉴定.[结果]共分离得到24株细菌菌株,经平皿初筛,分别筛选出对黄瓜幼苗、番茄幼苗生长有显著促生作用的细菌11和5株,再经营养钵促生实验筛选出2株对黄瓜、番茄幼苗均具有显著促生作用的PGPR菌,经16S rDNA序列分析,分别为芽孢杆菌属(Bacillus)和布克霍尔德氏菌属(Burkholderia).[结论]所筛选细菌对黄瓜和番茄幼苗有显著促生作用,为进一步构建PGPR广适菌群提供了菌株资源.     

铜绿假单胞菌株CR56在黄瓜和番茄根围的定殖能力

铜绿假单胞菌株Pseudomonas aeruginosaCR56作为种子处理时，能有效地防治由腐霉Pythiumspp.和茄丝核菌Rhizoctonia solania引起的黄瓜和番茄的苗期猝倒病，利用该菌的抗利福平突变菌株CR56R9和lacZY标记菌株CR56RL4，研究其在黄瓜和番茄根围的定殖能力、种群动态和在根区的分布。研究表明，黄瓜根围比番茄根围更适合于该菌的定殖，其种群数量下降的幅度在番茄根围比在黄瓜根围更快。播后28d，菌株CR56R9和CR56RL4在黄瓜根围种群数量分别由7.63×107CFU/粒和4.88×107CFU/粒下降到9.85×106CFU/株和8.87×106CFU/株，在番茄根围则分别由3.0×107CFU/粒和2.13×107CFU/粒下降到4.48×105CFU/株和4.37×105CFU/株；该菌主要分布在猝倒病的发生部位——根基部，在根尖处检测不到该菌的存在。lacZY标记菌株CR56RL4与抗利福平突变菌株CR56R9，两者在黄瓜根围和番茄根围的存活能力基本一致。