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【目的】甜瓜细菌性叶斑病是危害甜瓜的重要种传细菌病害,是由丁香假单胞杆菌流泪病致病变种甜瓜菌株(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)引起的。论文旨在建立高效、快捷、操作简单的检测技术以防止此病原菌传播。【方法】以Gen Bank公布的甜瓜细菌性叶斑病菌的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因序列为靶标,设计甜瓜细菌性叶斑病菌特异性锁式探针,建立锁式探针与斑点杂交技术结合的检测体系。以保存的目的菌株为材料,提取DNA作为模板进行锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应,并将锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应的反应温度和反应时间分别进行优化。利用优化的锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应分别对健康的甜瓜种子、带有甜瓜细菌性叶斑病的甜瓜种子、无菌水及25株其他参试菌株进行检测,测定该体系的特异性。将甜瓜细菌性叶斑病菌的DNA按10倍梯度稀释,依次稀释为1 ng·μL~(-1)、100 pg·μL~(-1)、10 pg·μL~(-1)、1 pg·μL~(-1)、100 fg·μL~(-1)、10 fg·μL~(-1)和1 fg·μL~(-1)作为模板,利用优化的锁式探针连接反应、酶切反应和扩增反应,测定灵敏度。将探针与斑点杂交技术结合建立高通量检测体系,将上述反应过程中的扩增产物固定于尼龙膜上,将锁式探针上Zipcode序列的反向互补序列合成c Zipcode(检测探针),检测探针(c Zipcode)用地高辛标记后与产物进行杂交。锁式探针结合斑点杂交技术分别进行特异性检测和灵敏度测定。探针与斑点杂交技术结合建立的高通量检测体系进行人工模拟种子带菌检测,进一步验证该体系的可靠性。利用建立的高通量检测方法对205份市售疑似带病的甜瓜种子进行检测。【结果】锁式探针特异性测定结果表明,26株甜瓜细菌性叶斑病菌均能得到一条105 bp的特异性条带,而剩余25株参试菌株及无菌水均无扩增产物产生。灵敏度测定结果表明,当目的菌株的浓度稀释为1 pg·μL~(-1)时均能检测到一条105 bp的特异性条带,所以探针的检测灵敏度为1 pg·μL~(-1)。探针与斑点杂交技术结合建立的检测甜瓜细菌性叶斑病菌高通量体系能将甜瓜细菌性叶斑病与所有的参试菌种区分开,26株甜瓜细菌性叶斑病菌杂交后出现了显色反应,而25株参试菌株及无菌水均没有发生显色。锁式探针结合斑点杂交的灵敏度检测同样达到1 pg·μL~(-1)。将锁式探针结合斑点杂交进行人工模拟种子带菌检测,能将1粒带菌种子从1 000粒健康的种子检测出来,模拟种子带菌检测率都能达到0.1%(1/1 000)。从205份市售甜瓜种子中成功检测到7份市售种子带菌。将带菌种子分别加入一定量的无菌水浸泡4 h,提取悬液DNA,将悬液DNA进行PCR扩增后测序,NCBI比对后确定为甜瓜细菌性叶斑病菌。【结论】基于锁式探针结合斑点杂交技术的检测体系能够快速、准确地识别甜瓜细菌性叶斑病。 相似文献
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厚皮甜瓜细菌性果斑病的发生与防治 总被引:2,自引:0,他引:2
1996年厚皮甜瓜细菌性果斑病在巴盟开始发生,一直被认为是细菌性角斑病,由细菌性叶斑病的菌脓感染果实所致,导致病害逐年加重. 相似文献
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本文主要阐述了崇信县钢架塑料大棚甜瓜主要病害枯萎病、白粉病、蔓枯病、细菌性叶斑病等的发生症状及防治技术,以供种植者参考。 相似文献
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内生菌BS-2对蔬菜立枯病的抑制效果 总被引:7,自引:2,他引:7
抗利福平标记的菌株内生定殖测定结果表明,分离自辣椒叶片的内生枯草芽孢杆菌BS-2菌株既可在辣椒体内定殖,又可进入茄子、蕃茄、白菜、黄瓜、西瓜、丝瓜、甜瓜和豇豆等多种植物体内定殖;拮抗和防病作用测定发现,该菌株对多种植物病原真菌具有较强拮抗作用.菌液浸种处理后对黄瓜、甜瓜和蕃茄苗期立枯病有78.96%以上的抑制效果,并对这些蔬菜有较明显的促生作用. 相似文献
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[目的]探讨木霉菌与内生细菌防治甜瓜枯萎病的协同增效作用。[方法]在离体和活体条件下,研究了木霉菌T23和Ta22分别与内生细菌B6和B20-006复合使用对甜瓜枯萎病的防治效果。[结果]内生细菌B6和B20-006不论是与木霉菌T23复合处理还是与Ta22复合处理的防治效果均高于4个生防菌单独处理,其中B6+T23和B20-006+Ta22 2个复合处理的相对防效分别高达82.2%和81.0%。[结论]应用内生细菌与木霉菌复合防治甜瓜枯萎病有明显的协同作用。 相似文献
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土壤活性水一号剂型内含多种有益菌类。在陕西西安阎良区进行的甜瓜根部冲施试验表明,其可促进瓜蔓伸长、根系生长、叶面积系数增加、植株抗病性增强,最终提高甜瓜产量品质,尤以幼苗期、初果期两次施用效果明显。土壤活性水一号剂型价格低廉,使用方便,增产提质作用明显,可在陕西渭北甜瓜种植区推广应用。 相似文献
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为了比较不同砧木对甜瓜部分生理指标和果实品质的影响,筛选适合甜瓜生长的良好砧木。以‘新盛玉’甜瓜为材料,采用田间试验、植物生理生化测定方法,研究了不同砧木嫁接对甜瓜生长过程中叶片生理指标和果实品质的影响。嫁接能提高甜瓜3个生长时期叶片叶绿素含量,提高叶片POD、SOD、CAT和PPO活性,降低叶片MDA含量,但不同的嫁接组合表现有差异;3个处理中,越瓜砧木嫁接苗果实可溶性固形物、可溶性糖、可溶性蛋白和维生素C含量最高,自根苗其次,南瓜砧木嫁接苗最低;小区产量最高的为越瓜砧木嫁接苗,其次为南瓜砧木嫁接苗,自根苗最低。综合相关指标来看,越瓜砧木表现优于南瓜砧木,可以作为‘新盛玉’甜瓜的良好砧木。 相似文献
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以能抗瓜类枯萎病的黑籽南瓜、西葫芦和瓠瓜为砧木嫁接西瓜 ,嫁接后的西瓜植株表现光合作用速率和根系吸收面积增加 ;叶片中束缚水 /自由水比值增加 ,水势降低 ,根系和叶片中的过氧化物酶 (POD)、根系中苯丙氨酸解氨酶 (PAL)活性增强 相似文献
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新疆伽师瓜高效再生系统建立及抗真菌病基因转化 总被引:1,自引:0,他引:1
成熟子叶切块作为外殖体,经过组织培养获得再生植株。以MS作为基本培养基,取3日龄子叶块外殖体,选用MS 6-BA1.5 mg/L IAA0.3 mg/L诱导丛生芽,最高诱导率可达78%。而且分化再生过程,6-BA的浓度逐渐降低。在生根培养时,用MS 0.3 mg/L NAA诱导生根率较高,根系粗壮。在建立甜瓜高效再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因导入新疆甜瓜中,经卡那霉素的抗性筛选,获得转化的再生植株。用PCR反应及Southern-blot检测,进一步研究了再生植株的基因整合与表达情况。经PCR扩增反应和Southern-blot检测均得到了与阳性对照一致的特异性带,可初步证明外源基因已整合到了甜瓜基因组中。 相似文献
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抗病基因转化新疆伽师瓜研究 总被引:1,自引:1,他引:0
成熟子叶切块作为外殖体,经过组织培养获得再生植株。以MS作为基本培养基,取3日龄子叶块外殖体,选用MS+6-BA1.5mg·L-1+IAA0.3mg·L-1诱导从生芽,最高诱导率可达78%。分化再生过程中,6-BA浓度逐渐降低。在生根培养时,用MS+0.3mg·L-1NAA诱导生根率较高,根系粗壮。在建立甜瓜高效再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因导入新疆甜瓜中,经卡钠霉素的抗性筛选,获得转化的再生植株。通过PCR反应及Southern Blot检测,进一步研究了再生植株的基因整合与表达情况,获得与阳性对照一致的特异带,可初步证明外源基因已整合到甜瓜基因组中。 相似文献