葡萄SCARECROW Like 14-Like基因的表达特征及胁迫响应研究

为探索外源赤霉素(GA3)介导的无核葡萄果实膨大过程中的信号途径的调控基因,寻找验证主要调控元件,本研究以欧亚种无核葡萄品种‘无核白鸡心’(Vitis vinifera L.cv.Centennial Seedless)为材料,通过半定量RT-PCR技术分析属于GRAS基因家族的SCARECROW Like 14-Like(VvSCL14-Like)基因在葡萄不同组织器官和果实发育期的表达。通过启动子克隆、生物信息学分析、promoter∷GUS融合基因和GUS组织染色法对该基因的表达特征进行了研究。半定量RT-PCR结果表明,VvSCL14-Like基因主要在休眠芽中表达,在果实发育过程中无表达。利用GA3对葡萄幼果进行膨大处理,处理后1、3和7d的果实转录组结果表明VvSCL14-Like的转录水平无差异。对VvSCL14-Like启动子进行生物信息学分析,发现多个响应外源激素和逆境胁迫的作用元件。VvSCL14-Like启动子驱动的GUS基因,只在拟南芥萌发初期下胚轴处表达。以GA3和NaCl分别处理阳性拟南芥幼苗,48h后GUS基因均在叶柄和叶脉表达。干旱胁迫处理阳性拟南芥幼苗,15d后GUS基因只发现在根部表达。研究结果表明:VvSCL14-Like基因的表达具有组织特异性,参与外源赤霉素(GA3)和非生物胁迫响应过程,但不是外源赤霉素(GA3)介导的无核葡萄果实膨大过程的主要调控元件。     

葡萄GA受体基因GID1初探及其在果实GA处理条件下的差异表达

本研究通过分析在其他植物中已经确认的GA受体基因序列,对葡萄全基因组进行BLAST比对,获得了可能编码葡萄GA受体GID1的7个基因片段序列。经过聚类分析,根据其序列特征,分别设计特异性引物,以无核白鸡心葡萄(Vitis viniferaL.cv.Centennial seedless)不同组织器官为试材提取RNA,反转成cDNA-1链后,进行半定量RT-PCR,结果显示这些基因在成叶、幼叶、花序、新梢顶尖和休眠芽中存在差异表达。以30 mg/L的GA3在盛花后12 d处理无核白鸡心果穗,并于处理后1、3和7 d(果实第1次快速生长期),33 d(缓慢生长期),49 d(果实第2次快速生长期)进行采样,提取果实RNA,半定量RT-PCR结果显示除VvGID1-4和VvGID1-5外,果实中这些推测的GID1推测基因的表达水平在GA处理条件下均有上调或下调表达,推测上述研究结果为葡萄GA受体的全基因克隆与功能验证奠定了基础。     

葡萄VvSCL9基因和启动子的克隆及初步研究

以欧亚种无核葡萄品种‘无核白鸡心’(Vitisvinifera L.cv.Centennial Seedless)为材料,通过半定量RTPCR比较了VvSCL9基因在葡萄不同组织器官中的表达,利用转录组分析探索了葡萄果实中VvSCL9对外源赤霉素(GA3)处理的响应。通过全基因序列和启动子克隆、启动子生物信息学分析及转基因验证进一步研究了VvSCL9的表达特征及对不同胁迫的响应。结果表明,VvSCL9在葡萄梢尖、幼叶、成叶、老叶和花序等组织器官中均有表达,参与葡萄果实第一快速生长期的发育,但对外源GA3处理无显著响应。对克隆得到的VvSCL9启动子进行生物信息学分析,发现多个激素和逆境胁迫响应的作用元件。以GA3处理超表达VvSCL9的转基因烟草种子,转基因烟草种子的萌发率在前期低于对照。转基因烟草组培苗对100mmol/L NaCl的耐受性高于对照。研究表明,VvSCL9基因参与葡萄的营养生长和生殖生长,能够提高植物耐盐性,在一定程度上影响植物外源GA3的敏感性,但可能不是外源赤霉素(GA3)介导的无核葡萄果实膨大过程的主要调控元件。     

‘峰后’葡萄果实发育与赤霉素(GA3)处理以及VvSEP3基因表达的关系

为了探明‘峰后’葡萄赤霉素(GA3)处理后促使果粒变长的原因和VvSEP3基因在果实早期发育中的作用,在开花前利用0.1mg/g GA3处理花序并通过原位杂交分析了VvSEP3基因的表达。结果显示:GA3处理提高了峰后葡萄的坐果,增加了果形指数,从开花后14d开始到开花后56d,GA3处理后的果实纵径始终大于同时期的对照果实,解剖学结构研究表明,中果皮的细胞膨大从开花后7d开始明显大于同时期发育的对照果粒。VvSEP3基因在开花期的柱头、花柱、横膈膜以及胚珠的珠心组织中有表达,开花后主要在子房壁中表达,当幼胚发育时在维管束组织和胚乳组织中有所表达。本研究显示GA3处理后明显增加峰后葡萄的果形指数,同时促进了果肉细胞的纵向生长从而使果粒变长;VvSEP3基因在子房壁细胞分裂与膨大过程中可能发挥重要作用,同时也可能参与了种子的形成和发育过程。     

不同膨大剂对无核白鸡心葡萄果实生长发育影响的研究

利用无核葡萄品种无核白鸡心为试验材料,以当前普遍使用的膨大剂赤霉素和吡效隆来进行试验。研究表明,盛花期蘸施吡效隆、盛花后10d蘸施50mg／L的赤霉素处理对无核白鸡心葡萄膨大效果最好,增产效果最明显,而且可使果实可溶性固形物含量增加,成熟期提前4-5d。用药剂处理过的无核白鸡心葡萄普遍出现果穗的果柄硬化变脆,并在穗轴上出现纵裂,但随着处理时间、浓度和处理次数的减少,硬化程度均有所减轻。     

外施赤霉素对‘峰后’葡萄坐果及VvAG基因表达的影响

为探明‘峰后’葡萄在赤霉素(GA3)处理促使葡萄座果率增加原因和VvAG基因在葡萄坐果过程中的作用,在开花前10d用0.02mg/g的GA3和赤霉素合成抑制剂PAC处理葡萄花序并通过石蜡切片观察葡萄早期果实发育结构的变化,通过RT-PCR分析了VvAG基因的表达。结果显示:GA3处理提高了葡萄座果率,PAC处理则降低座果率,而PAC+GA3处理可以恢复葡萄正常坐果。GA3处理在开花后0~10d幼果纵横径大于对照,而PAC处理则小于对照。进一步分析发现,GA3处理后中果皮细胞明显大于对照,而PAC处理则小于对照,说明GA3处理导致开花后0~10d幼果增大的原因是由于细胞分裂和中果皮细胞增大的缘故。VvAG基因的表达呈现出组织特异性,VvAG2在叶片,茎和卷须中均有少量表达,VvAG1和VvAG3则表达量很低,在花和果实中VvAG1和VvAG2有较高的表达,表明这2个基因对于葡萄花发育和坐果是必需的。VvAG3在花和果实中的表达量相对较低,但在GA3处理后表达上调;相反,在PAC处理后,VvAG3表达量下调,表明VvAG3在坐果过程中的表达可能受到赤霉素的调控。     

赤霉素对梨糖代谢及其关键酶基因表达的影响

为了研究赤霉素增强果实库强的机制,以‘翠冠’梨(Pyrus pyrifolia Nakai)为试材,研究了赤霉素(GA)处理下果实膨大过程中果糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇和可溶性总糖含量变化及山梨糖醇和蔗糖代谢关键酶基因转录水平的影响。结果表明,6-磷酸山梨糖醇脱氢酶基因(S6PDH)表达量前期较低,随着果实膨大逐渐升高,并且GA促进S6PDH在果实膨大中后期的表达;山梨糖醇代谢关键酶NAD-山梨糖醇脱氢酶基因(NAD-SDH)在果实膨大前期相对表达量很高,GA抑制了果实膨大前期NAD-SDH的表达。在蔗糖代谢中,酸性转化酶基因(SI)的表达量随着果实的膨大逐渐上升,在膨大中期达到高峰,然后开始下降,且果肉中SI表达量较果芯中的高,GA显著促进果实膨大期果实中SI的表达。果芯中蔗糖磷酸合成酶基因(SPS)表达量随着果实成熟而持续增加,果芯中表达水平较高于果肉中,GA显著提高果实膨大中后期SPS的表达水平。蔗糖合成酶基因(SS)在果实膨大前期和中期表达水平较高,GA处理抑制SS表达。GA处理显著提高梨果肉和果芯组织中的可溶性糖含量,GA诱导糖代谢相关酶的基因的表达,并在果芯和果肉中存在空间表达差异。     

吐鲁番无核白葡萄延迟成熟初步研究

吐鲁番优越的光热条件和独特的气候资源,为葡萄提供了得天独厚的生长条件,造就了吐鲁番葡萄无与伦比的优良品质。无核白是吐鲁番古老的种植品种,果粒晶莹剔透、甘甜爽口,深受人们喜爱。根据市场需求,延长无核白鲜食葡萄的供应期,初步探索研究无核白葡萄延迟成熟、采收,利用植物生长调节剂赤霉素(GA3)在低浓度下促进细胞的分裂、分化和延缓衰老的作用,在无核白葡萄进入转色期时喷施不同浓度的赤霉素(GA3),通过对比不同赤霉素(GA3)浓度处理下无核白葡萄的百粒重和可溶性固形物含量(Bir%),得出赤霉素(GA3)浓度20 ppm的处理可以有效减缓果实发育,降低可溶性固形物的积累,延迟无核白葡萄成熟。     

吡效隆(CPPU)和赤霉素(GA)对辽峰葡萄果实膨大和无核化的影响

本试验以辽阳地区栽培的品种‘辽峰’葡萄为试材,于盛花期用3个浓度的赤霉素(GA)处理花序,之后两周用以9个浓度的赤霉素(GA)+吡效隆(CPPU)处理花序,讨论不同浓度GA和CPPU对品种‘辽峰’果实膨大和无核化的影响。研究结果表明:50 mg/L浓度GA对‘辽峰’果实的无核化影响最大,其无核率较低浓度GA高,平均可达到29.27%;10 mg/L的CPPU可以促进果粒膨大,而2 mg/L的CPPU可以提高果实的可溶性固形物。GA总浓度过高或过低都不利于果粒的膨大和果实品质,本试验表明25mg/L+25mg/L浓度的GA在供试处理试验中表现最佳,其果粒的膨大和果实品质最好。     

棉花新陆早17号愈伤组织中盐响应相关基因的表达分析

[目的]愈伤组织是一种研究植物生长发育及基因调控的理想实验材料,开展盐胁迫对棉花愈伤组织基因表达影响的研究,有助于阐明棉花愈伤组织基因的表达特性.[方法]对棉花新陆早17号品种非胚性愈伤和胚性愈伤进行盐胁迫处理,采用半定量RT-PCR技术,对棉花不同基因GhATPase-b、GhBADH、GhNHX1和GhP5 CS盐响应相关基因在不同NaC1浓度胁迫0、14和28 d时的表达情况进行分析.[结果]100 mmol/LNaC1促进棉花非胚性愈伤和胚性愈伤的生长分化;在新诱导的非胚性愈伤中,GhNHX1的表达水平先降低后小幅升高,而GhA TP ase-b、GhBADH及GhP5CS相对表达量随处理时间延长均呈上调表达;在继代多次的非胚性愈伤中,GhNHX1与GhBADH在处理期间相对表达量先降低后升高,GhATPase-b与GhP5CS相对表达量随处理时间延长均呈上调表达;胚性愈伤中,仅GhA TPase-b的表达量随处理时间增加持续升高,其余基因在处理期间相对表达量先降低后升高.[结论]适量NaC1可促进棉花非胚性愈伤和胚性愈伤的生长分化;不同阶段的棉花愈伤组织基因表达模式的不同,表明这些愈伤组织可能采用不同的机制响应NaCl的胁迫.     

光质对火焰无核愈伤组织形成及再分化的影响

以火焰无核葡萄无菌苗的叶片、叶柄、茎段为外植体,研究了红光、蓝光、白光、暗培养4种处理对葡萄离体再生愈伤组织形成及再分化的影响。结果表明:暗培养和红光处理有利于火焰无核愈伤形成,火焰无核的愈伤组织在红光及白光处理50 d时SOD酶活性达到最大,分化潜力较高。     

vvi-miR160s介导VvARF18应答赤霉素调控葡萄种子的发育

【目的】研究vvi-miR160家族（vvi-miR160s）及其靶基因在‘魏可’葡萄种子发育过程中的作用,探究其应答赤霉素（GA）调控葡萄果实无核的潜在机理。【方法】采用miR-RACE、生物信息学分析、RT-qPCR、RLM-RACE等方法,鉴定vvi-miR160家族成员及其靶基因,分析vvi-miR160s及其靶基因应答GA的时空表达模式及其潜在功能。【结果】花前GA处理强烈抑制‘魏可’葡萄胚珠及种子发育,高效诱导其无核,且无核率达99.8%。克隆鉴定了VvMIR160s前体基因序列（501 bp）及成熟体序列,且它们在不同物种间具有较高的保守性;基于vvi-miR160s序列,预测到靶基因VvARF18,利用RLM-RACE技术检测到vvi-miR160s对VvARF18的裂解位点在第10和第11位之间,裂解频度9/17,证明VvARF18是vvi-miR160s的真实靶基因。该靶基因编码683个氨基酸,在398—411位存在核定位信号,且该蛋白亚细胞定位于细胞核上。VvARF18与其他物种间序列的同源保守性较高,基因结构相似,其中VvARF18蛋白与茶、烟草、梅花等物种亲缘关系较近。VvARF18启动子中包含4种作用元件,且含有较多激素相关元件。RT-qPCR结果显示,随着葡萄果实的发育,vvi-miR160c/d/e呈现‘V’形表达趋势,在硬核种子发育期表达较低,而VvARF18表现出与前者相反的表达趋势,在硬核种子发育期呈现高表达,表明vvi-miR160c/d/e对VvARF18负调控,但vvi-miR160a/b与VvARF18表达水平却不存在明显负相关。GA处理极显著地上调了vvi-miR160a/b在葡萄硬核种子发育期的表达,同时也显著抑制了VvARF18在同时期的表达,且它们的表达水平呈负相关,表明GA处理促进了vvi-miR160a/b对VvARF18的负调控作用;相反,GA减弱了vvi-miR160c/d/e对VvARF18的负调控作用。【结论】在vvi-miR160家族中,vvi-miR160c/d/e可能介导VvARF18在葡萄种子发育的特定阶段调控种子的发育形成,而vvi-miR160a/b可能主要介导VvARF18参与调控GA诱导葡萄种子败育的过程。     

‘阳光玫瑰’葡萄无核化研究进展

有核葡萄的无核化生产是目前市场上无籽葡萄的重要来源。‘阳光玫瑰’葡萄糖度高、香味浓，深受市场推崇，近几年在我国发展迅猛，但自然坐果率较低、存在大小果，商品性不高，通过植物生长调节剂进行无核、膨大等处理后，果实无核、果肉硬脆、果粒整齐，果实商品性大幅提高。综述了‘阳光玫瑰’葡萄无核化生产概况、无核生产技术，详细分析了‘阳光玫瑰’葡萄无核化生产所用药剂赤霉酸、氯吡脲、噻苯隆和链霉素的使用浓度、处理时间，及处理后对果实品质的影响，以期为‘阳光玫瑰’无核化高效栽培体系提供借鉴或指导。     

四川地区赤霉素和链霉素处理对巨峰葡萄无核化及果实发育的影响

为了对四川地区巨峰葡萄无核化栽培提供一定的科学指导,本实验以巨峰葡萄为试材,分别在初花期和盛花后12 d进行2次处理,研究不同浓度赤霉素(GA3)和链霉素(SM)对巨峰葡萄无核率和果实发育的影响.结果表明:各处理都能使巨峰葡萄的无核率大幅度提高,GA3和SM混合处理产生的无核效应明显大干单独使用GA3;GA3 50 mg/L、GA3 100 mg/L与SM 100 mg/L、SM200mg/L搭配的2个组合均实现了完全无核化.从无核果实综合性状来看,两次处理的最佳方案为GA3100mg/L+SM 200 mg/L.     

四种植物生长调节剂对玫瑰香葡萄无核化及果实品质的影响

【目的】用不同浓度及配比的植物生长调节剂对玫瑰香葡萄进行无核化处理,研究植物生长调节剂对玫瑰香葡萄无核化及果实品质的影响,为广西玫瑰香葡萄生产提供有效的无核化处理技术。【方法】以4种不同浓度、配比的植物生长调节剂赤霉素（GA3）、吡效隆（CPPU）、脱落酸（ABA）和氯毗脲（KT-30）对玫瑰香葡萄进行无核化处理,试验共设7个植物生长调节剂处理,以清水为对照。选取长势一致的花序,于花前2d对花穗进行第1次浸泡处理,15d后再浸泡一次。葡萄成熟后测定单果重、颗粒大小、果形指数、果实硬度、无核率、可溶性固形物含量等指标。【结果】7个植物生长调节剂处理均不同程度地提高了玫瑰香葡萄的无核率,其中以处理1的效果最好,果实无核率达86．0％;7个植物生长调节剂处理均能获得与常规有核栽培大小及品质基本一致的果实。【结论】生产上宜在玫瑰香葡萄开花前2d用20mg／LGA,处理花穗,15d后再用10mg／LGA,＋2mg／LKT-30＋10mg／LABA处理一次,能获得与常规有核栽培大小及品质基本一致的无核化果实。     

GA3和TDZ对‘巨玫瑰’葡萄果皮涩味的影响

为研究赤霉酸（gibberellic acid,GA3）和噻苯隆（thidiazuron,TDZ）对葡萄果皮涩味的影响,以‘巨玫瑰’葡萄为试材,在果实生理落果初期和膨果初期分别用不同浓度的GA3（T1: 12.5 mg/kg GA3; T2: 25 mg/kg GA3; T3: 50 mg/kg GA3）和TDZ（T4: 1.25 mg/kg TDZ; T5: 2.5 mg/kg TDZ; T6: 5 mg/kg TDZ）及其混合液（T7: 25 mg/kg GA3+2.5 mg/kg TDZ）浸蘸果穗,定期检测葡萄果皮中涩味物质含量的变化,并通过石蜡切片观察果皮中单宁细胞的分布情况。结果表明：不同浓度GA3及混合液处理的单宁细胞分布较少,不同浓度TDZ处理的果皮中单宁细胞分布密集,且层数较多,颜色较深;果实成熟时GA3及混合液处理的果皮中可溶性单宁、不溶性单宁、单宁总量、类黄酮和总酚的含量均低于对照,花色苷含量均高于对照;而不同浓度的TDZ处理的果皮中可溶性单宁、不溶性单宁、单宁总量、类黄酮、总酚和花色苷含量均高于对照。综合评价不同处理的涩味物质总量,结果为T6＞T4＞T5＞CK＞T7＞T2＞T3＞T1。说明GA3处理降低葡萄果皮涩味的效果最好,且以12.5 mg/kg GA3处理的效果最佳,混合液处理次之,TDZ处理不利于果实涩味的降低。上述结果为利用植物生长调节剂改善鲜食葡萄果实涩味提供理论依据。     

葡萄全基因组DELLA蛋白基因家族鉴定及其应答外源赤霉素调控葡萄果实发育的特征

【目的】明确DELLA蛋白基因在葡萄基因组数据库中的数量、结构和组织表达差异,探究DELLA蛋白在葡萄赤霉素(GA)信号传导及葡萄无核果实发育机理中的作用机制。【方法】基于拟南芥、水稻等植物中的DELLA蛋白基因,利用HMMER程序和NCBI的CDD程序鉴定葡萄基因组中的DELLA蛋白基因;以‘白罗莎里奥’葡萄品种为试材,采用PCR技术克隆3个DELLA蛋白基因的c DNA全长序列;通过启动子作用元件分析预测其潜在功能;利用生物信息学软件对其染色体定位、基因结构、系统进化、理化特性、亚细胞定位及蛋白互作等进行分析;利用农杆菌介导的烟草瞬时表达技术分析DELLA蛋白的亚细胞定位情况;采用q RT-PCR方法检测葡萄DELLA蛋白基因应答GA在果皮、果肉、种子(或种子区)的时空表达特征。【结果】鉴定得到3个葡萄DELLA蛋白基因,克隆并验证其精确序列,分别命名为Vv GAI1(VIT_201s0011g05260)、Vv RGA(VIT_214s0006g00640)及Vv SLR1(VIT_211s0016g04630),其染色体定位、开放阅读框(ORF)大小、编码氨基酸数量分别为:Chr1、1 773 bp、590个;Chr14、1 710 bp、569个;Chr11、1 599 bp、532个。基因结构分析表明其DNA序列均无内含子,只有1个外显子,基因结构高度保守。进化分析显示Vv GAI1与Vv RGA亲缘关系较近,被聚类为一组,而Vv SLR1为另一组。3个基因的启动子均含有响应赤霉素和胚乳发育相关的作用元件,表明它们可能参与响应GA信号传导和胚乳发育过程。亚细胞定位结果显示3个DELLA蛋白均定位于细胞核。q RT-PCR结果显示除果皮中Vv SLR1在近成熟期具有表达高峰外,其余均在幼果期高表达,且外源GA处理均不同程度降低了3个DELLA蛋白基因在葡萄果皮、果肉和种子区的表达,尤以种子区下调水平最为显著。蛋白互作分析表明3个DELLA蛋白均为葡萄GA信号传导的核心作用元件,均可能与GIDI1和SLY1互作参与葡萄GA信号传导。【结论】葡萄基因组中含有3个DELLA蛋白基因家族成员;不同物种间DELLA蛋白结构高度保守;GA可能通过负调控这3个成员参与葡萄果皮、果肉和种子区的发育,且3个成员均可能通过应答GA信号调控葡萄无核果实的发育。     

植物生长调节剂对赤霞珠葡萄果实品质的影响

【目的】研究不同质量浓度ABA、GA₃和6-BA处理对赤霞珠果实品质的影响,为利用植物生长调节剂改善酿酒葡萄果实品质提供理论依据。【方法】以欧亚酿酒葡萄(Vitis viniferal L.)品种赤霞珠（Cabernet sauvignon）为试材,于转色期前7 d分别对果实进行不同质量浓度ABA、GA₃和6-BA处理,研究葡萄果实主要品质指标的变化。【结果】（1）在葡萄果实成熟过程中,100和200 mg/L ABA处理均可显著提高果实总糖、总花色素苷和类黄酮含量,降低总酸、单宁和总酚含量,但2个处理之间无显著差异。（2）不同质量浓度GA₃处理总体上使葡萄果实中的总糖、总花色素苷和类黄酮含量有所提高,总酸、单宁和总酚含量降低,但不同质量浓度GA₃处理对果实总糖和总酸的影响差异不显著;而400 mg/L GA₃处理显著提高了果实中的总花色素苷和类黄酮含量,降低了单宁和总酚含量。（3）不同质量浓度6-BA处理使赤霞珠果实中的总糖含量略有提高,但各处理之间差异不显著;400 mg/L 6-BA处理使果实成熟过程中的总花色苷和类黄酮含量显著降低,单宁和总酚含量有所提高。【结论】100和200 mg/L ABA处理对赤霞珠葡萄果实部分品质指标有显著的改善作用;400 mg/L GA₃处理对果实着色具有促进作用,而400 mg/L 6-BA对果实着色具有明显的抑制作用。     

无核葡萄胚挽救中影响胚发育的因子

 【目的】提高无核葡萄胚挽救育种效率。【方法】以12个无核葡萄品种或株系的自然授粉胚珠和6个杂交组合的胚珠为试材,研究不同配方的培养基、不同培养基相态、低温处理、光照和暗培养对无核葡萄的胚发育率的影响。同时,研究花后不同时间取样,摘取果粒取出胚珠培养的适宜时间。【结果】在供试的8种培养基中,Nitsch＋GA3 0.5 mg?L-1＋IAA 1.5 mg?L-1和MM3培养基最适宜于无核葡萄离体幼胚的发育,其次是ER培养基。在供试的固相、液相和固液双相的3种相态培养基中,以固液双相培养基进行无核葡萄品种底来特离体胚珠培养为最好。在胚珠离体培养阶段进行低温培养,降低了胚发育率。暗培养有利于幼胚的发育,可提高胚发育率。不同无核葡萄品种和组合在花后摘取果粒,取出胚珠进行离体胚挽救的适宜时间不同,无核白为35 d、森田尼无核为40 d、火焰无核为40 d、底来特为60 d、黎明无核为55 d、无核紫为70 d、优无核为50 d、皇家秋天为70 d、奇妙无核为60 d、奥迪亚无核为40 d、红宝石无核×贵妃玫瑰为70 d。【结论】本研究中不同无核葡萄品种进行胚挽救宜选择Nitsch＋GA3 0.5 mg?L-1＋IAA 1.5 mg?L-1、MM3或ER培养基,在（25±2）℃常温下进行固液双相暗培养,有助于提高胚挽救效率。