vvi-miR160s介导VvARF18应答赤霉素调控葡萄种子的发育

【目的】研究vvi-miR160家族（vvi-miR160s）及其靶基因在‘魏可’葡萄种子发育过程中的作用,探究其应答赤霉素（GA）调控葡萄果实无核的潜在机理。【方法】采用miR-RACE、生物信息学分析、RT-qPCR、RLM-RACE等方法,鉴定vvi-miR160家族成员及其靶基因,分析vvi-miR160s及其靶基因应答GA的时空表达模式及其潜在功能。【结果】花前GA处理强烈抑制‘魏可’葡萄胚珠及种子发育,高效诱导其无核,且无核率达99.8%。克隆鉴定了VvMIR160s前体基因序列（501 bp）及成熟体序列,且它们在不同物种间具有较高的保守性;基于vvi-miR160s序列,预测到靶基因VvARF18,利用RLM-RACE技术检测到vvi-miR160s对VvARF18的裂解位点在第10和第11位之间,裂解频度9/17,证明VvARF18是vvi-miR160s的真实靶基因。该靶基因编码683个氨基酸,在398—411位存在核定位信号,且该蛋白亚细胞定位于细胞核上。VvARF18与其他物种间序列的同源保守性较高,基因结构相似,其中VvARF18蛋白与茶、烟草、梅花等物种亲缘关系较近。VvARF18启动子中包含4种作用元件,且含有较多激素相关元件。RT-qPCR结果显示,随着葡萄果实的发育,vvi-miR160c/d/e呈现‘V’形表达趋势,在硬核种子发育期表达较低,而VvARF18表现出与前者相反的表达趋势,在硬核种子发育期呈现高表达,表明vvi-miR160c/d/e对VvARF18负调控,但vvi-miR160a/b与VvARF18表达水平却不存在明显负相关。GA处理极显著地上调了vvi-miR160a/b在葡萄硬核种子发育期的表达,同时也显著抑制了VvARF18在同时期的表达,且它们的表达水平呈负相关,表明GA处理促进了vvi-miR160a/b对VvARF18的负调控作用;相反,GA减弱了vvi-miR160c/d/e对VvARF18的负调控作用。【结论】在vvi-miR160家族中,vvi-miR160c/d/e可能介导VvARF18在葡萄种子发育的特定阶段调控种子的发育形成,而vvi-miR160a/b可能主要介导VvARF18参与调控GA诱导葡萄种子败育的过程。     

GA3介导miR171s及其靶基因VvSCLs调控葡萄种子发育的作用分析

【目的】鉴定vvi-miR171s成员及其靶基因,明确vvi-miR171s成员及其靶基因在葡萄种子发育中的重要作用及其响应赤霉素（Gibberellin,GA）调控种子发育的表达模式。【方法】以‘魏可’葡萄（‘Wink’）果实为试材,利用miR-RACE技术鉴定vvi-miR171a/b/e/f/g/h的成熟体序列;通过PsRNATarget软件预测vvi-miR171s的靶基因,利用生物信息学软件对其进行染色体定位、系统进化树、基因结构、保守结构域及motif分析;通过启动子作用元件分析预测vvi-miR171s及其靶基因的潜在功能;采用RLM-RACE和PPM-RACE验证vvi-miR171s对靶基因的裂解作用;利用qRT-PCR鉴定其应答外源GA₃在葡萄种子区中的表达模式。【结果】从‘魏可’葡萄果实中鉴定并克隆了6条葡萄vvi-miR171s成熟体序列,并用RLM-RACE和PPM-RACE鉴定到3条靶基因VvSCL6/15/22。靶基因的生物信息学分析显示,VvSCL6/22与苹果、桃子和樱桃同源基因遗传距离较近,而VvSCL15则与拟南芥、苹果、桃子和樱桃中的同源基因遗传距离相同,且VvSCLs的基因结构也与进化树中亲缘关系较近的基因相似;SCLs蛋白均具有GRAS结构域,鉴定到5个与GRAS结构域对应的保守motif,且它们含有的motif元件类型及排列顺序均相似,表明SCL家族结构较为保守。vvi-miR171s及靶基因的启动子均具有大量的GA、水杨酸（Salicylic acid,SA）和种子发育相关作用元件,表明它们可能参与响应GA、SA和种子发育过程;qRT-PCR表达分析显示,GA₃强烈抑制了种子区vvi-miR171a的表达,但同时显著上调种子区的VvSCL15和VvSCL22表达;vvi-miR171a和VvSCL15在对照组和GA₃处理后的种子/种子区均呈强烈的负相关,表明GA₃可能在葡萄种子/种子区显著增强vvi-miR171a对VvSCL15的负调控作用,从而介导葡萄种子发育。【结论】在‘魏可’葡萄中鉴定到vvi-miR171a/b/e/f/g/h 6个成员;均可裂解VvSCl6/15/22 3个靶基因;vvi-miR171a-VvSCL15可能作为主要的调控途径响应赤霉素并参与调控葡萄种子发育。     

农作物秸秆“五化”综合利用

正农作物秸秆作为农业生产的主要副产品,产量大、分布广。我国每年可收集利用的秸秆资源总量庞大,据估算,我国农作物秸秆理论产量为年产9亿吨左右,是可供进一步开发利用的宝贵资源。加快秸秆禁烧和综合利用工作,是加快生态文明建设的重要举措,对资源节约,保持农业生态平衡,加快农业循环经济和新兴产业发展,促进农村一二三产业深度融合,促进农业发展和农民增收具有十分重要的意义。长期以来,由于对秸秆资源开发     

畜牧业改革需从供给侧发力

正畜产品供给关系国计民生,保供给是硬约束。我国畜牧业正处在改革开放以来的一个新的转型期,需从供给侧"为发展而增长"的改革取代需求侧的"为增长而增长"改革。推进畜牧业供给侧结构性改革要从优化产业布局,调整品种结构、产品结构、产业结构着手,加强优质供给,减少无效供给,扩大有效供给,使畜牧业产业结构更加优化,从而实现畜牧业一二三产业交叉融合的现代产业体系基本形成,创新能力明显提高,优质     

如何提高母兔受胎率

常言道：“母兔好，好一窝；公兔好，好一群。”种公免饲养水平的高低对母兔的受胎、产仔数有直接的影响。     

如何搞好母猪防疫

搞好母猪防疫工作,不仅可防止母猪发生传染病,而且还可提高其产仔猪成活率,提高养猪的经济效益。一、按照技术规程要求,根据母猪不同生长时期适时地接种相应的疫苗1.后备母猪防疫通常情况下,仔猪10日龄左右注射大肠杆菌苗,仔猪出生半个月至断奶后1周预防黄、白痢病的发生与流行;12日龄左右注射链球菌苗;15日龄左右注射水肿病疫苗;30日龄左右接种猪瘟、副伤寒、肺疫和丹毒疫苗,可有效预防各种疫病发生。2.成母猪配种前防疫对母猪(含产后24～25天泌乳母猪)在配种前15～20天要分期注射兰、细、伪三联苗及乙脑苗和猪瘟三联疫苗等,以预防母猪不孕…     

高温季节如何防止猪中暑

夏季炎热,如果管理不当,猪会因太阳长时间照射,或因猪舍狭窄,通风不良,或在车船运输过度拥挤等闷热潮湿的环境中,会突然晕倒,甚至立即死亡,各种年龄猪均可发病,特别是肥猪皮下脂肪较厚易发生。     

如何科学养殖家兔

在进行兔类养殖时,养殖者需了解其基本养殖常识与规律,如此才能获得好的养殖回报。     

基于Sentinel⁃2影像与MaxEnt模型识别云南华坪县芒果种植区

云南省华坪县作为我国芒果的主要产地之一,近年来大力发展芒果种植业以及周边产业,促进了当地农业与旅游业的快速发展。为了更加科学高效地在空间尺度上对芒果种植区进行规划与管理,采用多时相Sentinel-2遥感影像构建多种植被指数,结合辅助地形因子与已挂果投产的芒果种植区野外调查点数据,通过MaxEnt模型对华坪县已投产芒果种植区进行分类识别,最后根据不同的阈值对预测结果进行二值化分类与精度评价。结果表明：二值化分类精度最高的阈值规则为10 percentile training presence,对应的阈值为0.257,分类总体精度为93.72%;在该阈值规则下估算已挂果投产的芒果种植区面积约为1.07万hm²,与研究时段内华坪县已有挂果投产的芒果种植区面积1.13万~1.20万hm²相近。因此,所选取的植被指数与地形因子组合在利用MaxEnt模型进行已投产芒果种植区的识别应用中取得了较好的效果,能为其他地区类似的研究应用提供借鉴,同时能为芒果种植业的发展与规划提供数据参考与决策支持。     

特殊医学用途婴儿配方食品中乳铁蛋白的检测

建立特殊医学用途婴儿配方食品中乳铁蛋白的高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）检测方法。试样中的乳铁蛋白经磷酸盐缓冲液提取,肝素亲和柱净化后,用反相-HPLC分离,以0.1%三氟乙酸和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,HPLC仪紫外检测器检测,外标法定量。结果表明：在乳铁蛋白质量浓度50～500 μg/mL范围内,检测结果呈现良好线性关系;该方法的检出限为5 mg/100 g,定量限为15 mg/100 g,平均回收率为93.9%;同一质量浓度乳铁