低浓度恩诺沙星对离体恒化器模型中人体肠道菌群的影响

 【目的】应用离体恒化器模型评价低浓度恩诺沙星对人体肠道菌群的影响,为制定微生物学日允许摄入量（ADI）提供依据。【方法】四套接种人体肠道菌群的离体恒化器模型中连续添加0、0.2、2及20 mg•L-1恩诺沙星8 d,采用细菌培养计数和PCR-DGGE方法研究细菌数量、耐药性、菌群结构和定植抗力的变化。【结果】2及20 mg•L-1恩诺沙星可抑制肠道总厌氧菌、总需氧菌和兼性厌氧菌、大肠杆菌、肠球菌的生长（P＜0.05或P＜0.01）;0.2、2及20 mg•L-1恩诺沙星均使总需氧和兼性厌氧菌、大肠杆菌耐药百分率增加（P＜0.05或P＜0.01）, 停药7 d后,总需氧和兼性厌氧菌、大肠杆菌耐药百分率呈下降趋势,但与对照组相比仍处于较高水平（P＜0.01）。20 mg•L-1恩诺沙星对肠道菌群结构的影响较大,使PCR-DGGE图谱发生明显变化,条带数、菌群多态性和相似性参数降低（P＜0.05或P＜0.01）;2和20 mg•L-1恩诺沙星可使肠道菌群对外源沙门氏菌的定植抗力明显下降。【结论】0.2 mg•L-1恩诺沙星（相当于3.67μg•kg-1体重）可对离体恒化器模型中的人体肠道菌群耐药性产生显著影响,说明中国现行规定的恩诺沙星和环丙沙星的ADI（6.2μg•kg-1体重）可能会对人体肠道菌群产生影响,主要为选择出耐药需氧和兼性厌氧菌。     

甘露寡糖、糖萜素及金霉素在肉仔鸡饲粮中添加效果的研究

采用 2× 4二因子试验设计方案 ,通过饲养试验和微生物试验 ,比较了甘露寡糖、糖萜素和金霉素对肉仔鸡生产性能及肠道菌群的影响。结果表明 ,(1)经过金霉素前处理 (5 0 0 mg· kg- 1 ) ,盲肠菌群数量无论是厌氧菌还是好氧菌都显著降低 (P <0 .0 5 ) ,且生产性能得到提高 (P <0 .0 5 )。 (2 )在肉仔鸡粮中添加 5 0 mg· kg- 1金霉素未表现出明显提高生产性能的效果 ,甘露寡糖能够改善肠道菌群状况 ,糖萜素对肠道菌群未表现显著影响 ,但能够显著提高生产性能。     

光合细菌对三角帆蚌肠道菌群及对蚌体生长的影响

于浙江绍兴官渡三角帆蚌养殖基地,设投放光舍细菌培养液和不投放光合细菌培养液网箱两个.定期对两网箱水样光合细菌、好氧菌总数和三角帆蚌肠道光合细菌、好氧菌总数、厌氧菌总数、乳酸杆菌、双歧杆菌等指标进行检测.结果表明:投放的光合细菌不能在水中长期定植;水体光合细菌浓度大于400 CFU·mL-1时抑制好氧菌的生长,低于该浓度则促进好氧菌的生长;三角帆蚌肠道光合细菌、好氧菌总数受水体光合细菌、好氧菌总数影响;三角帆蚌肠道高浓度的光合细菌(＞2664 CFU·g-1)抑制好氧菌、厌氧菌及其中的乳酸杆菌和双歧杆菌的生长,低浓度的光合细菌则促进它们的生长;高浓度的光合细菌(水体中浓度大于400 CFU·mL-1,肠道中浓度大于2664 CFU·g-1)促进三角帆蚌的生长,低浓度的光合细菌则抑制三角帆蚌的生长.     

恩诺沙星在健康及实验性感染乳房炎奶山羊间的比较药动学

 每毫升 10 6菌落形成单位的金黄色葡萄球菌悬液 1ml单侧乳房内接种 ,人工诱发奶山羊乳房炎。 15只泌乳期健康奶山羊 ,按给药途径随机分为 3组 ,采用交叉试验设计 ,分别进行静注、肌注和乳房灌注恩诺沙星 (2 .5mg·kg-1)对健康和人工感染乳房炎的奶山羊进行比较药动学研究。采用HPLC法测定血中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的浓度 ,用统计矩原理处理药物浓度 时间数据。结果表明 ,实验性乳房炎可以使静注给药后恩诺沙星在奶山羊的消除缓慢 (P <0 .0 5 ) ,消除半衰期 (t1/ 2 β)由 1.32± 0 .2 6h增至 1.77± 0 .12h ;使肌注给药恩诺沙星的吸收、生物转化和代谢均发生显著变化 (P <0 .0 1) ,药 时曲线下面积 (AUC)由 3.0 4mg·h-1·L-1增至 4 .36mg·h-1·L-1,代谢率 (f)由 4 4 .0 6 %降至 2 4 .0 2 % ,环丙沙星的AUC由 1.2 9降至 1.0 1mg·h-1·L-1;使乳房灌注给药恩诺沙星的平均滞留时间 (MRT)由 1.86h增至 2 .2 9h(P <0 .0 5 ) ,f由 4 5 .73%降至 30 .0 6 % (P <0 .0 1)。     

纳豆芽孢杆菌分离纯化及对大白鼠肠道微生态系统的影响

研究了大白鼠肠道细菌的分离纯化,SD大白鼠口服纳豆芽孢杆菌1周后粪便中细菌、厌氧菌群和需氧菌群的变化,及纳豆芽孢杆菌与肠道细菌在体外的生长竞争表现.结果表明,肠道厌氧菌群中的双歧杆菌、乳酸杆菌、梭菌和拟杆菌数量均有不同程度增多,其中双歧杆菌从8.510±0.449 Log10N cfu/g增加至9.278±0.244 Log10N cfu/g;而肠杆菌、肠球菌等需氧菌群数量则明显减少,肠杆菌从8.213±0.426 Log10N cfu/g减少到7.709±0.372 Log10N cfu/g.体外竞争试验表明,纳豆芽孢杆菌能促进肠道厌氧菌群的生长,而抑制需氧菌群的生长.可见,纳豆芽孢杆菌能有效调整大白鼠肠道菌群数量的变化,起到维持肠道微生态平衡的作用.     

健康家兔肠道中乳酸菌的分离鉴定

本试验选用MRS、MRS+10%家兔硬粪浸出液和MRS+10%泡菜汁3种选择培养基,对健康家兔肠道的乳酸菌群分别进行需氧和厌氧培养,根据可培养细菌菌落特征、染色特性、显微镜形态观测,共分离出7株乳酸菌株,其中需氧菌2株,厌氧菌5株。结合生化试验初步鉴定,需氧菌株分别为乳酸乳球菌和短乳杆菌,厌氧菌株分别为嗜酸乳杆菌,嗜粪乳杆菌,肠乳杆菌,乳酸乳杆菌和弯曲乳杆菌。本实验为弄清健康家兔肠道的有益菌群,以便下一步制作更易于在畜禽的肠道中定植存活的复合动物微生态制剂做准备。     

褐菖鲉肠道菌群初步分析

采用稀释定量方法,分别用TCBS、EMB、卵黄甘露醇高盐琼脂、肠道菌计数培养基、BBL、亚硫酸盐—多粘菌素—磺胺嘧啶、乳杆菌选择性培养基、厌氧琼脂8种培养基,分离并计数褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)肠道菌群的数量,挑选优势菌株进行细菌生化鉴定,初步分析褐菖鲉肠道正常菌群的分布情况。结果显示,褐菖鲉肠道厌氧菌的数量远远大于好氧菌,并以兼性厌氧菌为主。好氧菌中大肠菌群居多,弧菌不多见;厌氧菌中多见双歧杆菌。葡萄球菌数量稀少,未检测到产气荚膜梭菌。     

复方溴氯海因消毒剂的性能

研究了复方溴氯海因消毒剂的稳定性、刺激性、毒性及其对细菌、病毒、细菌芽胞的杀灭效果.结果表明,室温下本品有效期至少为1a,对皮肤无刺激性,半数致死量(LD50)为2787mg·kg-1.18-22℃条件下,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、溶血性链球菌的杀灭率达99.9%,分别需7.5、5.0、7.5mg·L-1有效溴氯海因作用10min;对枯草杆菌黑色变种芽胞杀灭率达99.9%,需200mg·L-1有效溴氯海因作用60min;对猪水泡病强毒、猪瘟病毒和猪细小病毒灭活率达100%,分别需1500、150和1500mg·L-1有效溴氯海因作用30min.     

杂种黄秋葵茎尖及试管苗培养的研究

采用茎尖和试管苗培养的方法,以黄秋葵生长点为材料,进行了生长点的生长、分化芽的生根和试管苗的生根继代增殖培养,以及试管苗的移栽与定植的研究。结果表明:1/2MS+ZT0.2mg·L-1+NAA0.3mg·L-1是生长点伸长生长的理想培养基;MS+6-BA0.7mg·L-1+AgNO30.8mg·L-1+NAA0.1mg·L-1是生长芽分化培养的理想培养基;1/3MS+ABT0.6mg·L-1+蔗糖10g·L-1+IAA0.4mg·L-1是分化芽生根培养和生根继代增殖培养的理想培养基。试管苗移栽成活率为94.7%;定植成活率为97.4%;定植的试管苗保持了杂种黄秋葵的杂种优势。     

健康鸽与腹泻鸽肠道菌群比较研究

试验分别对健康鸽和腹泻鸽粪便中的肠道菌群进行了定量和定性分析,以揭示健康鸽与腹泻鸽粪便中正常菌群数量的变化与发病机制的关系。结果发现,腹泻鸽的需氧菌数量是健康鸽的100多倍,而厌氧菌的数量是健康鸽的10%左右,这与健康鸽的肠道需氧菌和厌氧菌的正常比例有明显的差异。     

恩诺沙星及其代谢产物在奶牛乳中的消除规律

 【目的】研究乳房炎奶牛单剂量乳房灌注1%恩诺沙星（50 ml/头）后乳中药物浓度的变化规律。【方法】采用HPLC法测定乳中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的浓度,用统计矩原理处理药物浓度—时间数据。【结果】在给药区恩诺沙星和代谢产物环丙沙星均于给药后2ｈ左右乳中浓度达到最高值,分别为（13.16±3.10）μg?ml-1和（2.79±0.94）μg?ml-1,然后逐渐下降;12 ｈ后检测不到恩诺沙星,24 ｈ已检测不到环丙沙星。对于非给药区,恩诺沙星给药后1ｈ左右乳中浓度达到最高值（0.19±0.02）μg?ml-1,然后逐渐下降;6 ｈ后检测不到恩诺沙星,而代谢产物环丙沙星于给药后4 ｈ乳药浓度可达最高峰（0.51±0.07）μg?ml-1,24 ｈ已检测不到乳药浓度。给药区代谢物环丙沙星的消除半衰期较恩诺沙星长,平均为（1.67±0.20）h,平均滞留时间（MRT）亦长。在本试验条件下,建议临床休药期不少于3 d。【结论】恩诺沙星吸收较迅速 ,代谢较快、清除较快 ,表明恩诺沙星与环丙沙星在乳中不会形成残留。     

圆齿野鸦椿种子外植体的快繁体系

以圆齿野鸦椿的成熟种子为外植体,研究组培繁殖育苗技术,以筛选最适的培养基配方.结果表明:(1)激素种类和含量对种子无菌株系建立的影响不同,BA含量为0.5-2.5 mg.L-1时,种子的成活率随BA含量的升高而下降,而NAA对其影响不大,种子无菌株系建立的最佳培养基为MS+0.5 mg.L-1BA+0.3 mg.L-1NAA+7.5 g.L-1琼脂+20 g.L-1蔗糖;(2)在细胞分裂素含量相同的情况下,芽的增殖系数随着生长素含量的增加呈先增大后减小的趋势,在MS+1.0 mg.L-1BA+0.5 mg.L-1NAA+1.0 mg.L-1IAA+7.5 g.L-1琼脂+20 g.L-1蔗糖培育基上,发芽率达50%,增殖系数为3.70,芽饱满健壮;(3)细胞分裂素和生长素适当的配比是芽增殖的关键,最佳培养基为MS+2.0 mg.L-1BA+0.3 mg.L-1NAA+1.0 mg.L-1IAA+7.5 g.L-1琼脂+20 g.L-1蔗糖,增殖倍数达5.0;(4)一定含量的NAA有利于诱导长根,而IBA则不同,培养基中NAA的含量为0.1 mg.L-1,IBA的含量为0.5 mg.L-1时,生根率达95%,根长为3.51 cm.     

养殖场分离的耐氟喹诺酮类药物的大肠杆菌基因突变研究

【目的】探讨从养殖场动物、环境和饲养员分离的大肠杆菌的gyrA 和parC 基因突变特征。【方法】用琼脂稀释法测定环丙沙星和恩诺沙星对菌株的最小抑菌浓度。PCR扩增gyrA 和parC 基因的喹诺酮耐药决定区，扩增的片段长度分别为525 bp和487 bp，PCR产物直接测序。【结果】在63株突变株中，在GyrA 亚基发生的氨基酸替代有Ser83→Leu（62株）和Asp87→Asn（52株）、Asp87→Tyr（2株）、Asp87→His（2株）；ParC 亚基的氨基酸替代有Ser80→Ile（47株）、Ser80→Arg（2株）和Glu84→Val（3株）、Glu84→Lys（4株）、Glu84→Gly（5株）、Glu84→Ala（1株）。环丙沙星对菌株的MIC小于0.125μg·ml-1时，GyrA和ParC亚基均没有任何变异；环丙沙星的MIC为0.125～0.25 μg·ml-1时，GyrA亚基出现单一氨基酸替代；环丙沙星的MIC为0.5～32μg·ml-1时，出现GyrA 83位和87位双替代或者GyrA83和ParC80位双替代；环丙沙星的MIC为4～128μg·ml-1，发生GyrA 双替代和ParC单替代；环丙沙星的MIC在16～128μg·ml-1，发生GyrA双替代和ParC 双替代。【结论】不同来源的耐氟喹诺酮类药物的大肠杆菌GyrA和ParC具有多种氨基酸替代类型，而且GyrA和ParC突变位点的数量与菌株对氟喹诺酮类耐药水平呈正相关。     

柴蕉茎尖培养无菌株系建立与芽苗增殖

以柴蕉吸芽茎尖为外植体,进行无菌株系建立与芽苗增殖研究。试验结果表明,先将柴蕉吸芽接种于液体诱导培养基1/2 MS+4 mg.L-1BA+0.5 mg.L-1NAA+30 g.L-1蔗糖,7 d后转到1/2MS+4 mg.L-1BA+0.5 mg.L-1NAA+30 g.L-1蔗糖+1 mg.L-1AC中,可以有效减少外植体的褐变;在MS+4 mg.L-1BA+0.3 mg.L-1NAA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂+80 g.L-1腺嘌呤培养基上采用薄切片进行继代增殖,出芽率高且芽苗粗壮。     

中草药制剂对蛋鸡肠道酶活和肠道微生物的影响

选择1200只蛋鸡随机分成5组,对照组为空白对照,饲喂基础日粮,试验组是在基础日粮中添加不同剂量的黄芪多糖(APS)和小檗碱(Ber)复合制剂(处理组Ⅰ饲喂基础日粮+100mg·kg-1黄芪多糖、30mg·kg-1小檗碱,处理组Ⅱ饲喂基础日粮+200mg·kg-1黄芪多糖、30mg·kg-1小檗碱,处理组Ⅲ饲喂基础日粮+100mg·kg-1黄芪多糖、60mg·kg-1小檗碱,处理组Ⅳ饲喂基础日粮+200mg·kg-1黄芪多糖、60mg·kg-1小檗碱)。结果表明,中草药复合制剂对处理组Ⅲ、Ⅳ的十二指肠的淀粉酶活有极显著的影响(P0.01),对处理组Ⅰ的空肠淀粉酶活和处理组Ⅰ、Ⅱ的回肠淀粉酶活有显著影响(P0.05);对处理组Ⅱ的十二指肠蛋白酶活和处理组Ⅲ、Ⅳ的十二指肠和回肠蛋白酶活有显著影响(P0.05);在肠道微生物方面,中草药复合制剂对各处理组的盲肠各种微生物都有显著影响(P0.05),对直肠的处理组Ⅰ和Ⅱ的各微生物有一定的影响。添加中草药复合制剂能增加肠道中的酶活,有效地改善肠道微生态区系的平衡。     

水牡丹的组织培养与快速繁殖

研究了水牡丹幼嫩花序离体培养中愈伤组织和芽诱导的适宜培养基和6-BA与2,4-D浓度,诱导培养基中6-BA和2,4-D的最佳组合。结果表明:水牡丹幼嫩花序离体培养中愈伤组织和芽诱导以MS为基本培养基,加入2．0 mg·L-16-BA,配合1．0 mg·L-1KT和0．2 mg·L-1NAA效果最好,继代增殖培养以MS为基本培养基,激素以0．5 mg·L-16-BA和1．0 mg·L-1KT, 0．1 mg·L-1NAA时效果较佳。水牡丹离体培养和快繁中无需另作生根培养。但移栽成活率只有60％左右。     

化学激活对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

 探索了离子霉素结合细胞松驰素B（cytochalasin B, CB）、放线菌酮（cycloheximide, CHX）以及6-二甲基嘌呤（6-dimethylaminopurine, 6-DMAP）等化学物质，对猪卵母细胞激活后发育的影响。试验1，体外成熟卵母细胞分别用15、20、25、30 mol·L-1的离子霉素处理40 min或电激活（1.3 kV·cm-1，80 s,1次脉冲），结果表明，20 mol·L-1组的激活率（69.93±5.80）%显著高于15 mol·L-1组（P <0.05），但与其它各组差异不显著（P >0.05）。试验2，卵母细胞采用20 mol·L-1离子霉素分别激活10、20、30、40、50 min，再用2 mmol·L-1 6-DMAP处理6 h，其中，40 min组的卵裂率、囊胚率[（72.40±13.02）%、（25.37±11.43）%]较高，但与其它各组差异不显著（P >0.05）。试验3，卵母细胞经离子霉素（20 mol·L-1、40 min）激活后，分别用7.5 g·ml-1 CB、10 g·ml-1 CHX、2 mmol·L-1 6-DMAP、7.5 g·ml-1 CB +10 g·ml-1 CHX和7.5 g·ml-1 CB +2 mmol·L-1 6-DMAP处理6 h，2 mmol·L-16-DMAP组的激活率、卵裂率和囊胚率[（86.05±4.29）%、（61.77±8.10）%和（21.62±3.31）%] 显著高于7.5 g·ml-1 CB组（P <0.05）与另外几组差异不显著（P >0.05）。试验4，卵母细胞由离子霉素（20 mol·L-1、40 min）激活后，用2 mmol·L-1 6-DMAP分别处理3.5、5.5、7.5 h，5.5 h组的卵裂率和囊胚率[(66.59±14.36)%和(25.40±10.16)%]高于另外两组，但差异不显著（P >0.05）。结果表明，离子霉素（20 mol·L-1、40 min）+6-DMAP（2 mmol·L-1 、5.5 h）为最佳激活方案。离子霉素激活卵母细胞后，CB与CHX、6-DMAP的互作对卵子的发育有抑制作用。     

皱叶酸模的试管苗培养研究

为了对野生资源进行保护,同时满足人们的需求,以具生长点的皱叶酸模茎段为材料,采用植物组织培养方法,对生长点的分化培养、分化芽生根培养、试管苗移栽、定植进行了研究。结果表明:MS+NAA0.05mg·L-1+6-BA2.0mg·L-1+蔗糖30g·L-1是皱叶酸模生长点分化培养的理想培养基;诱导分化芽生根的理想培养基是MS+IAA0.2mg·L-1+蔗糖30g·L-1;最佳的分化模式是先生根,再加入液体形式的最适分化培养基;试管苗移栽成活率高达100%,定植的试管苗保持了野生植株的生物学性状。     

哈路比葡萄柚茎段的组培快速繁殖

以成年态葡萄柚的茎段为材料,研究不同激素组合、基本培养基对丛生芽增殖的影响,以及再生苗生根、炼苗与移栽技术。结果表明:(1)WPM+6-BA 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.2mg·L~(-1)+蔗糖40g·L~(-1)为初代培养的最佳培养基,腋芽诱导率达78.33%;(2)继代增殖的最适培养基为WPM+6-BA 0.75mg·L~(-1)+NAA0.2mg·L~(-1)+蔗糖40g·L~(-1),增殖系数达4.93,芽长达2.62cm;(3)培养基1/2WPM+NAA 0.1mg·L~(-1)+IBA 1.0mg·L~(-1)+蔗糖40g·L-1+AC 0.1%的生根效果最好,生根率达63.33%,株高3.03cm,根粗壮;(4)生根苗移栽成活率达78%以上。