孕激素受体在雌性山羊颈动脉体的分布

为了证实孕激素受体是否存在于雌性山羊颈动脉体。取雌性山羊的颈动脉体,经免疫组织化学SP法染色后,观察孕激素受体在颈动脉体的分布特点。结果表明,在雌性山羊的颈动脉体的Ⅰ型细胞、Ⅱ型细胞、血管内皮细胞均有不同程度的阳性染色。Ⅰ型细胞中PR强阳性产物分布于细胞膜,中等阳性产物分布于整个细胞质中;Ⅱ型细胞和血管内皮细胞有强阳性产物分布。证实孕激素受体在雌性山羊颈动脉体中分布广泛,提示颈动脉体可能接受孕激素的调节,这为研究孕激素非生殖调节功能及颈动脉体的神经内分泌调节机制提供了形态学依据。     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体表达的影响

目的探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体表达的影响及抗动脉粥样硬化可能的分子机制。方法体外培养SD大鼠血管平滑肌细胞，应用半定量逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术，测定罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体mRNA和蛋白表达的剂量、时间依赖的影响。结果基础状态下，血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体均有少量的表达。血管紧张素Ⅱ显著上调血管紧张素Ⅱ1型受体（P〈0.01）和下调2型受体的表达（P〈0．05）。浓度依赖实验表明，不同浓度罗格列酮（20、30和50μmol／L）干预12h均显著下调血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白的表达（P〈0．01），上调2型受体mRNA和蛋白的表达（P〈0．01和0．05）。时间依赖实验表明，30μmol／L的罗格列酮干预后，6h即出现明显的干预效应，24h时下调血管紧张素Ⅱ1型受体和上调2型受体mRNA和蛋白的作用最大，与血管紧张素Ⅱ组比差异有显著性（P〈0．01）。结论罗格列酮可呈浓度依赖和时间依赖性地下调血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白的表达，上调血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达，这可能是过氧化体增殖物激活型受体7激动剂罗格列酮发挥抗炎、抗动脉粥样硬化作用的重要机制。     

蒙药乌兰温都苏-11丸对自发性高血压大鼠Ang-Ⅱ受体AT1R、AT2R蛋白表达的影响

目的:研究乌兰温都苏-11丸对自发性高血压大鼠(SHR)心、肾、血管组织中AT1R、AT2R蛋白表达的影响。方法:SHR大鼠60只和同源相匹配的Wistar Kyoto(WKY)大鼠10只,随机分为模型组、对照组、缬沙坦胶囊组、丹参酮Ⅱ_A硫酸钠注射液组、乌兰温都苏-11丸低、中、高剂量组,每组10只。对照组和模型组给予蒸馏水,缬沙坦胶囊组、蒙药乌兰温都苏-11丸低、中、高剂量组每天同时按相应剂量灌胃药物、丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液组相应剂量腹腔注射药物。给药治疗4周后,采用蛋白质免疫印迹方法分别检测大鼠心、肾、血管中血管紧张素Ⅱ受体AT1R、AT2R蛋白表达水平。结果:Western blot的检测结果表明乌兰温都苏-11丸干预显著降低SHR大鼠心、肾、血管的血管紧张素Ⅱ受体AT1R蛋白表达水平,同时显著增加血管紧张素Ⅱ受体AT2R蛋白表达水平。结论:乌兰温都苏-11丸治疗能够明显抑制AT1R蛋白表达,并显著激活AT2R蛋白表达。其作用机制可能是可通过拮抗血管紧张素Ⅱ受体AT1R的同时激活血管紧张素Ⅱ受体AT2R调节高血压,对高血压引起的靶器官损伤有一定的防治作用。     

弥散性神经内分泌细胞标志物在不同生殖周期小鼠卵巢中的表达

【目的】研究卵巢内弥散性神经内分泌系统细胞的分布情况。【方法】采用间接免疫荧光染色法检测弥散性神经内分泌细胞广谱、共同的标志物S100蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)在不同生殖周期小鼠卵巢中的表达情况。【结果】S100蛋白和NSE在动情周期次级卵泡和囊状卵泡外膜细胞、妊娠期囊状卵泡外膜细胞和部分黄体细胞中表达,阳性细胞散在或成簇分布,一些细胞具有明显的突起,细胞核不着色。【结论】小鼠卵巢中存在弥散性神经内分泌细胞;弥散性神经内分泌物质在卵泡不同发育阶段发挥着不同的调控作用;在卵巢的发育过程中伴随着部分细胞神经内分泌化。     

催产素在牛黄体神经内分泌细胞中表达

为了明确牛卵巢黄体中是否存在神经内分泌细胞及其与催产素表达的关系,采用免疫组化链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶法及双重酶标记对4例发情周期牛黄体中神经元特异性烯醇化酶和催产素的分布关系进行了研究。结果显示:黄体各区均含神经元特异性烯醇化酶和催产素样免疫反应阳性细胞,细胞形态类似,均呈现不规则的圆形、卵圆形、三角形或多角形,细胞核位于中央或偏于一侧,部分细胞有突起。双阳性细胞的形态与分布与OT阳性细胞基本一致。对于NSE-OT双阳性细胞和OT阳性细胞数目进行检验表明,二者在数量上无统计学差异。结果提示黄体中OT主要在神经内分泌细胞中表达。     

中国水牛垂体组织结构的研究

本研究通过纵、横和水平切片,对50头成年中国水牛(Bubalus bubalis)垂体进行了组织结构观察。染色方法有四种:H-E;PAS(Periodic Acid Schiff);桔黄G和PAS-桔黄G染色法。 远侧部发达,可明显地分为三个区:PAS阳性的嗜碱性细胞较集中于多血管的喙侧部,形成嗜碱性细胞区;染上桔黄G的嗜酸性细胞在尾侧部形成嗜酸性细胞区;两者之间为嗜碱性细胞和嗜酸性细胞混合区。细胞排列成团索状和滤泡状,毛细血管和血窦丰富。结节部完全包绕漏斗茎,血管非常丰富;细胞包括胞核深染胞质较少的未分化细胞、嫌色细胞及少量PAS阳性嗜碱性细胞,它们排成小管状或滤泡状;未见有嗜酸性细胞。中间部较发达,大部或全部包绕着神经部,其组织结构呈分叶状,细胞有嗜碱性细胞和嫌色细胞两种,排列成团索状和滤泡状,但小叶的周边有一层排列整齐的嗜碱性柱状细胞;未发现Wulzeu氏圆锥。神经部较小,正中隆起主要在前侧加厚。强PAS阳性的胶体见于成年中国水牛腺垂体各部及神经垂体。 本文还对中国水牛垂体各部分的形态结构、细胞分布和胶体出现情况等方面与牛及其他动物进行了比较。     

龙眼体细胞胚胎发生过程中特异表达蛋白的双向电泳分析

以龙眼品种红核子LC2胚性细胞系为材料,进行体细胞胚胎(简称体胚)发生及其同步化调控,获取体胚发生过程中各个主要发育阶段的培养物(胚性愈伤组织、球形胚、子叶形胚、早期成熟胚、中期成熟胚、晚期成熟胚),采用双向电泳对体胚发生过程中特异表达蛋白进行分析.结果表明:(1)龙眼胚性愈伤组织中,pI为4-5的酸性蛋白表达种类最多,在体胚发育的过程中逐渐消失,相反,pI为5-6的微酸性蛋白的表达逐渐增多;(2)体胚发育后期,尤其是成熟胚晚期,分子质量大的蛋白大量减少,分子质量较小的蛋白增多并逐渐积累;(3)虽然在各个发育阶段都会出现一些新的特异蛋白,但是没有改变蛋白质种类逐渐减少的趋势;(4)发现了一些有差异的特异蛋白点,尤其是成熟胚后期,有一系列大分子质量的蛋白消失,新出现了一部分分子质量较小的蛋白,其中几种表达量很大,可能与体胚发育有密切关系.     

虎杖苷抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖作用研究

研究虎杖苷对低氧性肺动脉高压的作用,探讨虎杖苷对防治肺动脉高压的作用机制。SD雄性大鼠实验分为三组:正常组,低氧组,低氧+虎杖苷组。通过病理染色观察肺组织改变,体外培肺动脉养平滑肌细胞,MTT检测细胞活力,Western blot检测增殖蛋白的表达。病理染色发现低氧肺血管中膜增厚,血管重构;MTT分析显示虎杖苷能显著降低缺氧PASMCs细胞活性。Western blot检测结果显示,虎杖苷抑制细胞增殖蛋白PCNA的表达。虎杖苷能抑制平滑肌细胞增殖,改善缺氧肺动脉血管的重构,可能开发作为肺动脉高压的治疗药物。     

木聚糖酶基因(XynB)肠道特异表达载体的构建及鉴定

将黑曲霉属XynB基因和猪RELMβ基因核心启动子区克隆到pcDNA3.1(-)中,构建携带绿色荧光和Myc双标记的肠道特异表达载体pcDNA3.1-RELMβ-XynB-Myc-GFP。利用脂质体介导将载体转染人结肠癌细胞(HT29)和人肝癌细胞(Bel7402),荧光显微镜检测发现,该载体可在HT29细胞特异表达绿色荧光蛋白;对转染该表达载体的HT29细胞进行RT-PCR检测和WB分析,结果表明,XynB基因在HT29细胞中正常转录,并且在细胞内检测到目的蛋白表达。     

NDV HN蛋白的结构与功能

新城疫病毒 (ＮＤＶ)属副粘病毒科腮腺炎病毒属成员 ,为反义负链ＲＮＡ病毒。本病毒囊膜为双层类脂膜 ,膜表面的两个纤突糖蛋白负责介导病毒吸附侵入宿主细胞。病毒侵入宿主细胞需要经过两个步骤 :先由Ⅱ型糖蛋白粘附蛋白 (ＨＮ)特异识别细胞表面唾液酸受体、水解唾液酸。同时 ,激活Ⅰ型糖蛋白(Ｆ)促使细胞膜发生融合。ＨＮ蛋白在融合过程中起到促进Ｆ蛋白的融合作用。所有副粘病毒都具有Ⅱ型糖蛋白 ,具有血凝素和神经氨酸酶活性的称为ＨＮ ,在没有神经氨酸酶活性的病毒属中 ,如麻疹病毒属 ,则称为Ｈ。在肺病毒属中同源的附着蛋白无血凝素活…     

低氧胁迫下斑马鱼鳃中核糖体蛋白基因家族的表达分析

为研究斑马鱼核糖体蛋白应对低氧胁迫的生物学功能，对低氧胁迫和常氧条件下斑马鱼（Danio rerio）鳃组织进行转录组分析，利用高通量测序检测了低氧胁迫与常氧条件下斑马鱼鳃转录组中核糖体蛋白家族基因的表达差异。结果表明：在两个不同浓度的低氧胁迫下，斑马鱼鳃组织中60个核糖体蛋白基因的表达量显著上调。其中大亚基核糖体蛋白基因35个，小亚基核糖体蛋白基因25个。在低氧胁迫下斑马鱼鳃中显著差异表达基因GO富集的前15条通路中，均包括核糖体蛋白基因，且其中的5条通路与核糖体蛋白组装合成相关。在富集到“translation”GO通路中，富集到44个核糖体蛋白基因。另外，利用前期筛选出的低氧条件下斑马鱼鳃中显著低表达的2个miRNAs，针对低氧下表达量显著上调的60个核糖体蛋白基因进行靶基因预测，结果表明：斑马鱼miR-455-3p可以同时靶向核糖体蛋白基因rpl13和rplp1来调控斑马鱼对低氧环境的适应。     

健脾补土组方对体外神经元低氧/复氧后PI3K、Akt、Caspase-3表达的影响

目的 观察健脾补土组方对新生SD鼠神经元体外培养低氧/复氧后的凋亡情况以及PI3K、Akt、Caspase-3表达的影响,探讨其减少神经元凋亡的作用机制。方法 原代分离培养新生SD鼠神经元,随机分为正常血清对照组、低氧模型组、神经生长因子组、健脾补土组。将标本低氧诱导24 h,再复氧培养4 h进行造模。用流式细胞术检测神经元凋亡情况,RT-qPCR法检测PI3K、Akt、caspase-3 mRNA的表达,免疫细胞化学法和Western blot法检测PI3K、Akt、caspase-3蛋白的表达。结果 与正常对照组相比,低氧模型组神经元凋亡率显著增加,PI3K、Akt mRNA与蛋白表达显著减少,Caspase-3 mRNA与蛋白表达显著增加;与低氧模型组比较,神经生长因子组、健脾补土组神经元凋亡率均显著减少,PI3K、Akt mRNA及蛋白表达显著增强,Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著较少（P<0.01）;与神经生长因子组比较,健脾补土组神经元凋亡率显著减少,PI3K、Akt mRNA及蛋白表达显著增加,Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著降低。结论 健脾补土组方能减少脑缺血后神经元的凋亡,其作用机制可能与其通过上调PI3K和Akt的表达水平,最终抑制在细胞凋亡中起关键作用的因子Caspase-3的表达有关。     

耐盐丰产小麦品种德抗961的耐盐生理机制

以山农215953(SN215953)为对照,室内200 mmol/L NaCl模拟盐胁迫条件,从幼苗生长和光合机构两个方面研究了德抗961的耐盐生理特性。结果表明:盐胁迫条件下德抗961(DK961)地上部生物量(鲜重、干重)、相对含水量均高于SN215953,而其株高显著大于SN215953,这有助于对细胞内的盐分进行稀释,即“稀盐”性,保护细胞质不受离子毒害。同时,德抗961叶片的希尔反应活力和Ca2+-ATPase活性受抑制的程度较小,光合能力相对较高。分析认为,以上两个方面可能是德抗961抗盐性强的重要原因。     

Heterosis and Combining Ability for Major Yield Traits of a New Wheat Germplasm Shannong 0095 Derived from Thinopyrum intermedium

The wheatgrass, Thinopyrum intermedium （Host） Barkworth ＆ DR Dewey, shows many beneficial characteristics, such as big spikes and high resistance to many diseases. To transfer the beneficial genes of this species, many wheat- Thinopyrum intermedium alien chromosome lines were developed. Of them, Shannong 0095 （SN0095）, a disomic substitution, has long spikes and flag-leaves, and thus may be an important genetic resource for wheat yield improvement. In order to realize its heterosis and combining ability on major yield traits, a 7 ×7 complete diallel design was made according to Griffing＇s Method-1. The results showed that heterosis for spike length （SPL）, flag-leaf area （FLA）, number of spikes per plant （NSP）, number of spikelets per spike （NSL）, kernels per spike （KPS）, 1 000-kernel weight （TKW） and grain yield per plant （GYP） existed in all the crosses by SN0095, but heterobeltiosis occurred only for KPS, TKW, and GYP. The relative mid-parent heterosis （RMH） and relative high-parent heterosis （RHH） for GYP, which valued as high as 35.32 and 29.92% respectively, were the highest among all the traits mearsured. Though additive and non-additive gene effects and cytoplasmic effects （or cytoplasmic-nuclear interaction effects） were found in governing all the traits measured above, additive gene action played a predominant role. The results also showed that SN0095 was the best-general combiner for SPL and FLA, and high-general combiner for NSP amongst all the parents. Estimates of specific combining ability （SCA） showed that SN0095 could also make high-SCA combinations for GYP, such as SN0095 × Jimai 19 （JMI9）. SN0095 could be a unique and important parent in hybrid wheat breeding programs.     

水稻基因差异表达与杂种优势的关系分析

【目的】分析水稻强、弱优势组合的基因差异表达模式特征,探讨其与杂种优势之间的关系。【方法】以扬稻6号、明恢63、特青配置的9个杂种F1为材料,利用差异显示PCR技术（differential display polymerase chain reaction,DD-PCR）分别分析分蘖期（叶片）、孕穗期（幼穗）、抽穗期（剑叶）的基因差异表达模式。【结果】同一时期内强优势组G1（父本扬稻6号）、中优势组G3（父本特青）以及弱优势组G2（父本明恢63）在母本特异表达（UNP1）、父本特异表达（UNP2）、F1特异表达（UNF1）、F1特异缺失表达（ABF1）4个基因差异表达模式上存在明显差异;相关分析表明分蘖期叶片UNP2与单株产量呈极显著正相关,来自父本的基因特异表达有利于提高杂种优势;同一优势组在不同时期的表达模式也存在明显差异,反映了基因的时空表达特征;获得19个G1、G2间特异性差异表达的基因片段,分布在除第12染色体以外的其余11条染色体上,主要涉及物质合成与运输、能量代谢、糖类代谢等重要途径。【结论】水稻强、弱优势组合F1在不同生育期基因表达模式存在显著差异,表型性状的差异可以从基因表达模式上得以反映。     

水稻中介体亚基OsMed6的表达及进化分析

中介体复合物是真核生物RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)通用转录装置的重要组成部分,是基因特异性转录因子与启动子信息传递的桥梁.本研究对水稻(Oryza sativa)中一个假定的中介体亚基OsMed6的表达和进化进行了分析.通过整合分析不同来源的基因芯片数据,发现OsMed6在各个组织(器官)里都有表达.构建了OsMed6与...     

缺氧诱导因子和促红细胞生成素及其受体基因在绵羊各组织中表达量

【目的】研究缺氧诱导因子(HIF)及其下游靶基因促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在绵羊正常生理状况下各组织的表达,为靶向调控或缓解绵羊缺氧应激的研究提供组织学依据。【方法】采用实时荧光定量PCR方法,检测4只新疆细毛羊14种组织中HIF、EPO和EPOR基因的相对表达量。【结果】HIF-1α和HIF-2α基因均在绵羊肺组织的相对表达量最高,且极显著高于其它组织(P<0.01);在肺脏HIF-2α基因的表达量约为HIF-1α表达量的5.2倍。EPO基因在绵羊肾脏的相对表达量最高且显著高于垂体、结肠、脾脏、盲肠、肝脏、肾上腺、瘤胃、下丘脑以及心脏(P<0.05)。EPOR基因在肺脏的表达量最高,肺脏和睾丸的相对表达量显著高于脾脏、下丘脑、肾脏、心脏等组织(P<0.05)。【结论】HIF-1α、HIF-2α和EPO及其受体基因在绵羊的肺部或肾脏的高表达,可能是绵羊缺氧应激感受及其调控的重要器官。     

家蚕蛹期特异基表达因BmCP283鉴定及其启动子的克隆分析

【目的】鉴定家蚕蛹期特异基因及其启动子,为家蚕变态发育人为调节及蛹生物反应器开发提供支撑。【方法】基于芯片表达数据分析及RT-PCR验证,筛选家蚕蛹期特异表达基因;利用PCR方法克隆家蚕蛹期特异表达基因上游的启动子序列,并利用转基因技术验证启动子的活性及时期特异性。【结果】筛选获得了在家蚕蛹期特异表达的表皮蛋白基因BmCP283;所克隆的BmCP283上游启动子区序列长2 004 bp,利用此序列所构建以红色荧光蛋白基因dsRed为报告基因的转基因蚕中,BmCP283启动子驱动的dsRed只在蛹后期表达,且主要表达于翅等组织中。【结论】BmCP283为家蚕蛹期特异表达基因,克隆获得的BmCP283启动子的启动活性具有蛹期特异性。     

绿盲蝽雷帕霉素靶蛋白的克隆、抗体制备及在蜕皮激素诱导下的应答

【目的】克隆绿盲蝽（Apolygus lucorum）雷帕霉素靶标全长基因（AlTOR）,研究AlTOR时空表达特性及在外源蜕皮激素（20E）诱导下的应答响应,进一步获得原核表达的重组蛋白及制备多克隆抗体,分析该抗体的特异性,为后续研究AlTOR蛋白功能打下基础。【方法】RACE法克隆AlTOR基因序列全长,qRT-PCR分析AlTOR表达特性以及在20E及其抑制剂U73122诱导下的应答响应;将含有AlTOR序列T载体经EcoR I及Xho I双酶切,构建原核表达载体pCzn1-AlTOR,经20℃、0.5 mmol·L^-1 IPTG诱导表达、变性、复性和蛋白纯化后,以获得AlTOR重组蛋白,最后再通过免疫,制备AlTOR蛋白多克隆抗体,Western blot评价该抗体的特异性。【结果】AlTOR的开放阅读框编码包含435个氨基酸,具有典型的TOR基因序列特征,即SIN1结构域、高度保守的CRIM结构域及PH域;AlTOR在绿盲蝽不同日龄、不同组织中均有表达,且在1日龄以及脂肪体中表达量最高;20E可诱导绿盲蝽不同日龄若虫期AlTOR的表达,同时也能诱导成虫头、翅、卵巢和脂肪体中AlTOR表达上调,分别上调200.00%、118.89%、20.53%和60.82%,而U73122在中肠和卵巢中会显著抑制AlTOR的表达。经双酶切的重组克隆载体可成功亚克隆到pCzn1载体上,命名为pCzn1-AlTOR;IPTG诱导的重组质粒可特异性表达一个约36 kD的蛋白,且主要以包涵体形式存在;经Ni-IDA亲和层析纯化后,仅在36 kD附近有一条明显的特异性条带。进一步免疫及间接ELISA方法确定抗血清对TOR蛋白的效价,Western blot分析表明制备的多克隆抗体可以特异性与AlTOR重组蛋白及绿盲蝽3龄若虫总蛋白结合,说明制备的AlTOR多克隆抗体特异性较好,可以用于后续的蛋白研究。【结论】AlTOR在绿盲蝽体内的表达谱显示出发育阶段特异性和组织特异性;20E及其抑制剂诱导后,AlTOR呈现出相反的应答反应;本研究获得的AlTOR重组蛋白的多克隆抗体具有高特异性。