提高种鹅受精率的综合措施

提高肉用种鹅受精率是提高出雏率，取得较好经济效益的关键。肉用种鹅产蛋少，一般年产蛋在30～80枚。为能当年出栏，又受出雏时间和饲养期限制，所以可利用的种蛋每只鹅只有30枚左右。只有提高种蛋受精率，才能提高出雏率。笔者在实践中采取如下措施，可提高种鹅受精率。     

L929细胞无血清悬浮驯化机器在流产衣原体灭活疫苗中的应用研究

为了给规模化生产流产衣原体提供悬浮细胞培养方法,本研究通过逐步降血清悬浮驯化法使贴壁L929细胞逐步适应悬浮培养环境,最终获得了一株可无血清悬浮培养的L929细胞株;将流产衣原体接种于L929悬浮细胞上,研究不同的促感染试剂以提高收菌量,并选择出最佳的培养方法;制备流产衣原体灭活疫苗,以25 μL 、50 μL、100 μL的剂量免疫Balb/c小鼠,攻毒后检测其免疫保护效果。结果显示,当该L929悬浮细胞初始接种密度为5×105个/mL 时,培养72 h后细胞浓度可达到约7×106个/mL,细胞活力在95%以上;在细胞密度为6×106个/mL,接菌量为5.5×104 IFU/mL,加入脂质体2000的量为1.7 μL/mL、放线菌酮浓度为0.4 μg/mL时,菌量增殖倍数最大,48 h内约扩增了52倍。经流产衣原体悬浮细胞灭活疫苗免疫后,小鼠产生的抗体水平随免疫剂量的增加而提升;接种50 μL、100 μL疫苗组小鼠的脾淋巴细胞增殖水平、IFN-γ、IL-2的含量远高于接种25 μL疫苗和注射PBS组的小鼠;对免疫后的小鼠进行攻毒,接种疫苗组小鼠的脾脏、十二指肠、子宫中的流产衣原体基因组含量远低于未接种疫苗组小鼠。注射PBS组及接种25 μL疫苗组的小鼠子宫出现了不同程度的坏死及炎症,而其余两组小鼠的子宫无异常变化。结果表明,本试验成功驯化出１株L929悬浮培养细胞株,并且通过悬浮培养工艺制备的流产衣原体灭活疫苗免疫效果良好,接种50 μL、100 μL该灭活疫苗可以有效抑制流产衣原体的感染,该L929细胞全悬浮培养株的成功驯化为疫苗规模化生产提供了科学依据。     

流产衣原体检测技术与分型方法研究进展

流产衣原体(Chlamydia abortus)广泛分布于世界各地,能感染猪、牛、羊等多种家畜,引起孕畜流产,是危害畜牧业最严重的衣原体病原。针对流产衣原体抗体检测的血清学方法如间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等在兽医临床检测中广泛使用。以聚合酶链反应(PCR)为代表的病原分子生物学检测技术敏感性和特异性高,有效地弥补了血清学方法的不足。在流行病学研究中,进一步对流行菌株的分型分析在阐释流产衣原体遗传进化、毒力演变和跨物种传播以及疫情预警和疫苗研制等方面具有重要意义。论文就当前国内外广泛应用的流产衣原体检测技术和分型方法进行综述,可为我国动物衣原体病的诊断和防控提供参考。     

PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白在杆状病毒囊膜表面的共展示及展示蛋白的免疫原性分析

本试验旨在构建以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟双价基因工程亚单位疫苗候选株.利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组杆状病毒BacSC-Dual-ORF5-E2.该重组病毒带有His6标签,且胞质区域(CTD)和跨膜区域(TM)均来源于杆状病毒囊膜蛋白gp64的CTD和TM.对重组病毒进行western blot分析、激光共聚焦显微镜观察、免疫金电子显微镜检测、动物免疫试验以及淋巴细胞增殖试验.Western blot分析结果表明,重组杆状病毒中表达了重组GP5和E2蛋白;激光共聚焦显微镜检测表明,重组杆状病毒感染昆虫细胞Sf-9后在细胞膜上展示了重组GP5和E2蛋白;免疫金电子显微镜观察表明,重组GP5和E2蛋白展示在杆状病毒囊膜上;动物免疫试验表明,重组杆状病毒免疫小鼠后产生了抗PRRSV和抗CSFV的特异性抗体;淋巴细胞增殖试验表明,重组杆状病毒能诱发较强的细胞免疫应答.本试验成功构建表面展示PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白的重组杆状病毒,为下一步应用该重组杆状病毒作为双价亚单位疫苗预防PRRSV和CSFV的混合感染奠定基础.     

鹿茸口服液对小鼠免疫功能的影响

研究鹿茸口服液(Pilose Antler Oral Liquid,PAOL)对小鼠免疫功能的影响。用环磷酰胺复制免疫抑制小鼠模型,100只昆明种小白鼠随机分成10组,分别为生理盐水对照组、免疫抑制对照组、免疫抑制小鼠4个灌胃剂量组(0.4 mL/d、0.2 mL/d、0.1 mL/d、0.05 mL/d)以及正常小鼠4个灌胃剂量组(0.4 mL/d、0.2mL/d、0.1 mL/d、0.05 mL/d);测定脾脏重量和腹腔巨噬细胞吞噬功能,比色法测定血清溶血素(HC50),MTT法检测植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPS)分别诱导的脾脏T、B淋巴细胞转化功能。结果表明,鹿茸口服液0.05 mL可显著增加正常小鼠溶血素水平,其溶血素值达256.067(P<0.01),其中鹿茸口服液0.4 mL、0.2 mL、0.1 mL三个剂量组能够显著提高免疫抑制小鼠溶血素抗体水平(P<0.01);鹿茸口服液0.4 mL、0.1 mL、0.05 mL三个剂量组对正常小鼠T淋巴细胞转化都有较强的促进作用(P<0.01),鹿茸口服液0.1mL剂量组能够显著提高免疫抑制小鼠T淋巴细胞转化功能(P<0.01),0.4 mL剂量鹿茸口服液在促进免疫抑制小鼠B淋巴细胞转化上也体现出明显的效果(P<0.05);其次灌服鹿茸口服液能够增加正常小鼠脾指数,但腹腔巨噬细胞对中性红的吞噬能力相对于对照组没有提高。试验证实,鹿茸口服液能够提高正常小鼠和免疫抑制小鼠机体的免疫功能。     

催产素在牛黄体神经内分泌细胞中表达

为了明确牛卵巢黄体中是否存在神经内分泌细胞及其与催产素表达的关系,采用免疫组化链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶法及双重酶标记对4例发情周期牛黄体中神经元特异性烯醇化酶和催产素的分布关系进行了研究。结果显示:黄体各区均含神经元特异性烯醇化酶和催产素样免疫反应阳性细胞,细胞形态类似,均呈现不规则的圆形、卵圆形、三角形或多角形,细胞核位于中央或偏于一侧,部分细胞有突起。双阳性细胞的形态与分布与OT阳性细胞基本一致。对于NSE-OT双阳性细胞和OT阳性细胞数目进行检验表明,二者在数量上无统计学差异。结果提示黄体中OT主要在神经内分泌细胞中表达。     

应激性因素引发奶牛球虫病的诊治及预防措施

1发病情况 2004年12月下旬，其奶牛场从新西兰一次性购入育成母牛500头。奶牛进场入舍后第6天起，部分牛舍的奶牛开始出现散发病例，发病年龄在膘情差的小育成牛之间。病牛精神沉郁，体温正常或略升高，粪便稀薄而带血，进而消瘦贫血，发病头数由少增多，而且相继死亡4头。该牛购入时期，正值严冬季节，长途疲劳运输，又改变了环境，而且发病奶牛的牛舍又不保温（舍内温度零下15℃），     

饲养绒用山羊应注意的几个问题

宝清县种畜场自1995年从辽宁盖县引入绒用山羊以来,经过精心的饲养管理,该羊表现出了良好的生产性能,并获得了较理想的经济效益。为进一步促进养羊事业的发展。笔者现就在养好绒用山羊中应注意的几个问题总结如下。     

建设畜禽养殖园区应注意的问题

地势、地形：地势高燥，至少高出当地历史洪水的水线，地下水位应在2米以下。避风向阳，空气流通良好，地面要平坦，稍有坡度(1％～3％较为理想)，以便排水，防止积水和泥泞。地形开阔整齐，园区的面积要根据畜禽种类，饲养管理方式，集约化程度的饲料供应情况等因素来确定。在确定园区面积     

分枝杆菌分型三重PCR检测方法的建立及应用

本研究旨在建立一种快速鉴定分枝杆菌的三重PCR方法,并比较分析其在临床检测中的可靠性。根据已发表的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌rv 3036c基因,结核分枝杆菌rv 1970f基因(RD7)和牛分枝杆菌pncA基因的序列,改造并设计合成了3对特异性扩增引物,建立了一种能对分枝杆菌样品进行初步鉴定的三重PCR方法。结果显示该方法可针对rv 3036c、rv 1970f和pncA基因分别扩增出大小为500、125和249 bp的目的片段,能特异性检测出结核分枝杆菌(500和125 bp两条带)和牛分枝杆菌(500和249 bp两条带),并可将结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与其他分枝杆菌加以区分。本方法的检测灵敏度为50 pg/μL模板基因组DNA。对86株抗酸染色阳性菌进行三重PCR鉴定,鉴定结果与细菌16S rDNA和ITS序列测定结果一致,检测准确度为100%,优于生长特征和生化试验鉴定。