番茄叶霉病拮抗菌AYM-18抗菌物质的初步研究

[目的]探讨对番茄叶霉病具有较强抑制作用的拮抗菌AYM-18的抗菌物质,为利用该菌开发环境友好型的生物农药应用于番茄生产奠定基础.[方法]采用滤纸片法测定拮抗菌AYM-18的全细胞培养液、无菌滤液和菌体悬浮液对番茄叶霉病病原菌的抑菌活性,确定其抗菌物质的主要来源,并采用单因子试验测定其抗菌物质的稳定性及产生条件.[结果]拮抗菌AYM-18的全细胞培养液、无菌滤液对番茄叶霉病菌的抑菌效果明显,产生的抑菌带较早、较大;AYM-18菌株无菌滤液在pH 5～9、-20～80℃时均表现出很强的抑菌活性.AYM-18菌株抗菌物质产生的最佳培养条件为：培养基初始pH 6、接种量5％、28℃条件下培养36h.[结论]拮抗菌AYM-18对番茄叶霉病菌的拮抗作用源于其代谢物质,其抗菌物质具有一定的酸碱稳定性和热稳定性,产生条件温和,具有开发成生防制剂的潜力.     

番茄拮抗内生细菌102菌株的分离及其防病促生作用

通过对峙拮抗与盆栽试验,进行了番茄内生细菌的筛选与初步鉴定,并研究了内生细菌对番茄青枯病的防治效果与促进番茄生长的作用。结果表明:从健康番茄植株体内分离获得了对番茄青枯病病原菌具有拮抗作用的内生细菌102菌株,初步鉴定该菌株为土生克雷伯氏菌(Klebsiella terrigena);该菌株能在番茄植株体内定殖,对番茄青枯病室内盆栽防治效果达55.6%,并显著促进番茄植株生长,提高番茄产量。     

内生细菌对番茄青枯病的控病作用及其抗菌谱

对初步筛选出的10株番茄青枯病菌的内生拮抗细菌,通过平板拮抗和盆栽控病试验进一步筛选具有较好防效的菌株。平板拮抗试验结果表明,其中5株内生拮抗细菌(01-144,01-189,TR 03-081,TR 03-108,TR 03-124)对番茄青枯病有良好防效。对上述5株内生拮抗细菌进行盆栽控病试验,结果显示,利用拮抗菌的去菌发酵液对番茄青枯病的防治效果明显优于菌悬液;再利用这5株内生拮抗细菌的无菌发酵液作平板拮抗试验,得到对青枯病菌有较强抑菌活性的TR 03-081菌株,而且研究发现该菌株的无菌发酵液对玉米小斑病、烟草赤星病、茄子褐纹病等病害的病原菌也具有较强的抑菌活性,表明该菌具有较广的抗菌谱,鉴定结果显示该菌株为枯草芽孢杆菌。     

内生细菌对番茄青枯病的控病作用及其抗菌谱

对初步筛选出的10株番茄青枯病菌的内生拮抗细菌,通过平板拮抗和盆栽控病试验进一步筛选具有较好防效的菌株.平板拮抗试验结果表明,其中5株内生拮抗细菌(01-144,01-189,TR 03-081,TR 03-108,TR 03-124)对番茄青枯病有良好防效.对上述5株内生拮抗细菌进行盆栽控病试验,结果显示,利用拮抗菌的去菌发酵液对番茄青枯病的防治效果明显优于菌悬液;再利用这5株内生拮抗细菌的无菌发酵液作平板拮抗试验,得到对青枯病菌有较强抑菌活性的TR 03-081菌株,而且研究发现该菌株的无菌发酵液对玉米小斑病、烟草赤星病、茄子褐纹病等病害的病原菌也具有较强的抑菌活性,表明该菌具有较广的抗菌谱,鉴定结果显示该菌株为枯草芽孢杆菌.     

番茄灰霉病菌内生拮抗细菌的筛选及鉴定

以从植物中分离的内生细菌为材料,筛选对番茄灰霉病菌等有拮抗作用的菌株,并对其抑菌活性、抑菌谱进行分析并明确其分类地位。以番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌和番茄枯萎病菌等植物病原菌为指示菌,采用平板对峙法和生长速率法对所分离的12株细菌的抑菌活性进行测定,并对具有较好拮抗活性的菌株的抑菌广谱性进行分析。结果表明,所分离菌株中,GZ-5对番茄灰霉病菌的抑制效果最好,GZ-3次之,其发酵液对番茄灰霉病菌FQ-1的抑制率分别可达86.6%,83.0%,且2个菌株对黄瓜灰霉病菌、番茄枯萎病菌等9种病原菌也有较好的拮抗活性;通过对2个菌株形态学观察、生理生化测定及16S r DNA序列分析等,初步将GZ-5菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌,GZ-3菌株为地衣芽孢杆菌。     

石蒜根际拮抗细菌HH1的筛选鉴定及其抑菌活性研究

[目的]以小麦赤霉病菌(Fusarium gramiuearum)为筛选靶标,分离石蒜根部土样中的拮抗细菌并研究其抑菌特性及机制。[方法]通过抑菌活性筛选拮抗菌株,根据菌落及细胞形态观察、生理生化试验结果和16S rRNA基因序列分析进行菌种鉴定,并对拮抗菌株产活性抗真菌成分的最佳培养基和培养条件进行优化。通过显微观察拮抗菌发酵上清液对病原菌生长的影响,对活性物质的热稳定性、酸碱稳定性及对蛋白酶K敏感性进行测定。[结果]共获得有稳定拮抗效果的菌株7株。以其中1株对小麦赤霉病菌具有较好拮抗作用的细菌HH1作为进一步研究的对象,鉴定其为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。抑菌试验发现菌株HH1能够分泌抑制小麦赤霉病菌孢子和菌丝生长的物质。沉淀菌株HH1发酵上清液中活性物质的最适硫酸铵饱和度为60%。优化了菌株HH1产活性抗真菌成分的培养基和培养条件。对活性物质热稳定性、酸碱稳定性及对蛋白酶K敏感性的测定结果显示:拮抗物质在p H中性和低于70℃的条件下较稳定,70℃以上的温度和蛋白酶K处理抗菌物质,其抑菌活性显著下降。[结论]初步推测菌株HH1所产拮抗物质可能是蛋白质类。     

培养条件对Bacillus cereus 357生长及产生拮抗物质的影响

为了了解Bacillus cereus 357菌株生长及产生拮抗物质的影响因子,对Bacillus cereus 357菌株在KMB、PDA、LB、Davis、SMA和淡薄培养基等6种培养基上的生长及产生的拮抗物质的生物活性进行检测和比较.结果发现在这六种培养基中,KMB培养基最适合该菌株的生长,所产生的拮抗物质生物活性最大;但相同菌量相应的拮抗物质生物活性却以Davis培养基为最高;同时研究发现利用液体培养基培养与固体培养基培养对拮抗物质的产生没有影响.另外,在不同温度、不同pH值等培养条件下对B.cereus 357菌株的生长及产生的拮抗物质活性进行测定,结果表明在37℃和pH 7.5的培养条件下,该菌株产生的拮抗物质抑菌活性最大.生长曲线分析表明该菌株在对数生长终期达到最大生物活性.为今后大量制备Bacillus cereus 357产生的拮抗物质和进行生长条件的深入分析提供了实验基础.     

铜绿假单胞菌FJAT-346对番茄枯萎病的生防作用

为明确铜绿假单胞菌FJAT-346菌株在植物病害生物防治中的实用价值,对该菌株的抑菌谱及其对番茄枯萎病的生防效果和机理进行了研究。结果表明:FJAT-346菌株对香蕉、番茄、西瓜、甜瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌等均有良好的离体拮抗效果。该菌株对番茄枯萎病的盆栽防效可达81.57%。FJAT-346菌株能使番茄枯萎菌菌丝扭曲变形、细胞壁破裂、纠集成团停止生长,但对孢子萌发的抑制作用不大。FJAT-346产生的抑菌物质可以被饱和度为70%的硫酸铵完全沉淀下来,初步判断该物质为大分子蛋白。在盆栽试验中,FJAT-346菌悬液对番茄出苗具有显著的促进作用,对番茄苗株高、根长和鲜重也有不同程度的促进作用。     

茄果类蔬菜内生芽孢细菌的筛选及初步评价

采用稀释涂平板法,从辣椒、黄瓜、豇豆及番茄植株体内分离到内生芽孢细菌187株,其中拮抗菌28株。室内平板对峙培养显示,5个菌株ha-1 a、ha-15、ha-21、X9、X10对生产上常见的10种病原真菌和2种病原细菌有强烈的拮抗作用;通过液体培养基摇床培养及平板-抑菌圈法,测定5个菌株分别在5种不同的培养基中抗菌物质的生成情况,结果表明ha-21菌株在5种培养基中都能产生抗菌物质,PN是最适培养基;硫酸铵分离表明ha-21产生的抗菌物质为复合物,有较好的温度稳定性,上清液中的抗菌物质经121℃高温处理活性不变,对番茄青枯病仍有强烈的抗生作用。盆栽试验表明:ha-21对黄瓜立枯病的防效为88%,使出苗时间提前3~4 d。     

番茄早疫病菌拮抗菌筛选

为进一步筛选番茄早疫病菌生防菌,通过叶片表面接触法,从广东茂名地区健康番茄植株叶片表面分离筛选拮抗菌,获得具有对峙生长拮抗作用的菌株52株,对拮抗作用最强的前6株菌进行液体培养,提取离心上清滤液进行抑菌活性测试。结果表明,6株拮抗菌均能产生胞外抑菌物,有5株拮抗菌的胞外物抑菌率达70%以上,最高抑菌率为78.12%。     

对番茄早疫病拮抗菌的筛选

通过拮抗菌—番茄早疫菌平板对峙拮抗试验和拮抗菌液体培养对番茄苗期早疫病的作用试验 ,筛选出 94 - 16 2 ,94 - 16 1,94 - 2 2 2 ,94 - 134′ ,94 - 54′ ,94 - 2 2 7为抑菌效果较好的菌株。在平板对峙拮抗试验中 ,拮抗菌对番茄早疫病菌有致畸作用。细菌计数也表明 ,PDA培养基较NA培养基更适合这些菌株的培养     

番茄青枯病菌拮抗细菌的筛选及鉴定

[目的]筛选出番茄青枯病菌的拮抗细菌,为番茄青枯病的防治提供参考.[方法]从番茄青枯病发病田块中的无病植株根际土壤中筛选获得拮抗细菌,通过形态和培养特征的观察、生理生化的测定和16S rDNA系列分析鉴定其分类地位,并通过盆栽试验验证其防效.[结果]从湖南省张家界市采集的番茄田土壤在NA培养基中分离出104株细菌,有6株细菌对青枯病菌有拮抗活性,其中1株拮抗菌菌株88号对青枯病病原菌有较强拮抗效果,抑菌圈达7.2 mm,其发酵液温室盆栽防效达96.4％,该菌株初步认定为伯克氏属(Burkholderiasp.).[结论]菌株88号在防治番茄土传病害上具有很好的应用前景.     

枯草芽孢杆菌B-FS01鞭毛蛋白FCD基因克隆与拮抗活性

以从油菜菌核病菌感染的油菜茎秆上分离得到的广谱性拮抗菌枯草芽孢杆菌为研究对象,克隆了该菌B-FS01鞭毛蛋白FCD基因片段,其序列长为952 bp (GenBank登录号为EF362756).根据FCD序列同源性分析, B-FS01属于以DB9011菌株为代表的亚组,而该亚组菌株普遍具有抗真菌活性.平板抑菌活性试验表明, B-FS01对小麦赤霉病菌具有较好的拮抗活性,高分辨率质谱分析发现其可能产生一些脂肽类抗菌物质.     

深海链霉菌拮抗香蕉枯萎病菌活性菌株的筛选及鉴定

为寻求防治香蕉枯萎病的药物新资源,从90株深海链霉菌中筛选到拮抗香蕉枯萎病病原菌的活性菌株,通过其菌块及发酵液抑制香蕉枯萎病病原菌菌丝生长和孢子萌发活性筛选法,对活性菌株220362进行形态、细胞壁成份及16SrRNA基因序列鉴定。结果表明:筛选获得24株拮抗香蕉枯萎病病原菌活性的深海链霉菌菌株,活性率高达26.7%,其中8株归类为链霉菌粉红类群,3株菌株在20%盐浓度下代谢最佳拮抗香蕉枯萎病病原菌活性物质;菌株220362拮抗活性强,嗜盐性高,产生的拮抗物质稳定,初步鉴定为链霉菌属的1个新种。     

番茄灰霉病菌拮抗放线菌的筛选

从4种土样中分离放线菌,通过平板对峙测定了放线菌对番茄灰霉病菌的拮抗作用、抗菌谱以及发酵产物的活性.结果表明:以番茄灰霉菌为靶标菌,通过平板对峙法明确了15株拮抗效果较好的放线菌,其中以E054、C126、E001、S043、W105菌株对番茄灰霉病菌的拮抗作用强,拮抗带宽为7.6～11.0 mm,对番茄灰霉病菌的生长抑制率为59.41％ ～71.27％;它们对供试的其他病原真菌也具有较好的拮抗作用.用高氏1号培养液培养10株拮抗放线菌,只有E001、W006、W085的发酵无菌滤液有较弱的拮抗作用,其他菌株的则无拮抗作用.     

ARDRA方法在荧光假单胞菌分离鉴定中的应用

【目的】探索荧光假单胞菌的分类方法，分离筛选拮抗性较强的荧光假单胞菌。【方法】利用紫外下产生荧光的特性，采用梯度稀释及鞭毛染色的方法，对采自云南、海南、山东和新疆的488份植物根际土壤进行分离筛选，分离菌株进行ARDRA分析，采用室内平板对峙法筛选对植物病原真菌具有较强拮抗作用的菌株，并对其进行生理生化分析和分子鉴定。【结果】分离筛选到102株紫外下产生荧光的杆状单极生鞭毛菌株。ARDRA分析产生荧光假单胞菌类型、恶臭假单胞菌类型以及一个未知的谱带类型。以油菜立枯病菌作为靶标菌，筛选到25株具有拮抗作用的菌株，其中TC222产生的抑菌圈最大，进一步的生测结果表明该菌株对9种重要的植物病原真菌如番茄灰霉病菌等具有很强的拮抗活性。TC222的 16S rDNA核苷酸序列与荧光假单胞菌PfO-1同源性达到99%，其最终鉴定为荧光假单胞菌。【结论】ARDRA方法在分子水平上为荧光假单胞菌的分离鉴定探索了一条新途径；TC222菌株具有拮抗多种植物病原真菌的能力，显示了良好的应用前景。     

番茄灰霉病菌拮抗稀有放线菌的分离及其抑菌物质分析

为筛选新型有效的番茄灰霉病菌天然抑制产物,采用平板对峙法和菌丝生长速率法从44株采自辽宁各地的放线菌中筛选植物病原真菌拮抗放线菌,通过孢子萌发生长法和系统发育树分析番茄灰霉病菌拮抗放线菌的抑菌活性和分类地位,测试高抑菌活性菌株无菌发酵液活性物质的稳定性,并以高分辨率飞行质谱扫描鉴定稀有放线菌发酵液的抑菌产物。结果表明,筛选到13株具有抑菌活性的放线菌,其中SA32、SA33、SA37、SA39、SA45、SA51这6株菌对番茄灰霉病菌的生长及其孢子萌发有抑制效果,SA37和SA45对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率分别高达75.13%和79.27%,对番茄灰霉病菌孢子萌发的抑制率分别高达86.25%和93.43%。系统发育树分析表明,SA45聚类于稀有放线菌北里孢菌属,其余5株菌均聚类于链霉菌属。对比高活性菌株SA37和SA45发酵液在-20～120℃、pH值1～14和3种酶(蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶)处理条件下的抑菌稳定性表明,SA45发酵液的抑菌活性和稳定性均高于SA37。高分辨率质谱分析不同溶剂提取的SA45活性物质表明,SA45发酵液中不存在已报道的活性物质。综上所述,北里孢菌SA45发酵液对番茄灰霉病菌具有高效和稳定的抑菌活性,可能存在新型抑菌物质,其菌株及发酵液具有较高的应用价值和研究价值。     

植物土传疾病拮抗菌的筛选及其生防潜力评价

通过筛选出对植物土传疾病具有良好拮抗效果的菌株BS-17,对其生防效果进行测定,旨在为开发植物土传疾病广谱抗菌生物制剂提供一定依据。采用平板对峙法,筛选出对9种常见植物土传疾病具有拮抗效果的拮抗菌,抑菌率均在80%以上。利用形态学、生理生化及分子生物学的方法对其进行了鉴定,并对拮抗物质产生的位置以及性质进行初步研究;通过土壤定殖试验对其生防潜力作出评价。通过形态学、生理生化及分子生物学的方法鉴定菌株BS-17为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。该菌产生的主要抗菌物质分布于胞外,拮抗物质对热、pH值、紫外线以及蛋白酶均不敏感。此外,菌株BS-17具有较好的产纤维素酶及蛋白酶的能力。土壤定殖试验证明,该菌表现出良好的定殖能力以及抑制病原菌生长的能力。菌株BS-17作为生防菌用于防治植物土传疾病,具有较好的开发和利用价值。     

水稻稻瘟病拮抗链霉菌的筛选

为从自然生态环境中寻找对水稻稻瘟病菌有拮抗作用的链霉菌,采用平板对峙法,从土壤中筛选出4株对稻瘟病菌有明显抑制作用的链霉菌St-10、St-85、St-107、St-120,通过测定拮抗带宽度并对拮抗菌株发酵液拮抗性的测定,最终得到1株高拮抗活性物质菌株St-10,抑菌率为52.0%。但试验分离到的菌株能否用于田间防治水稻稻瘟病,还需要进一步研究。     

内生菌HT5产生抗菌物质培养基及发酵条件优化

内生菌HT5发酵无菌滤液对番茄早疫病菌的菌丝生长和孢子萌发均有强烈的抑制作用。试验以内生菌HT5发酵液无菌滤液对番茄早疫病菌的抑菌活性作为优化指标,测定菌株HT5产生抗菌物质培养所需的碳源、氮源、无机盐,并通过均匀试验对菌株产生抗菌物质的培养基配方进行了优化,同时利用正交试验对菌株产生抗菌物质的发酵条件进行了优化。结果表明,菌株HT5产生抗菌物质的最佳碳源、氮源和无机盐分别为葡萄糖、酵母浸膏和硫酸镁;最优培养基组合配方为:葡萄糖22.3 g/L,酵母浸膏29.9 g/L,硫酸镁5 g/L;最佳发酵条件组合为:温度28℃,接种量4%,pH值6.5,转速150 r/min,装液量50 mL,培养时间6 d。