基于高通量测序技术鉴定栽培草莓资源携带的病毒种类

分析草莓种质资源的病毒携带情况,为草莓脱毒种苗的繁育和病毒病的防治提供依据。针对保存的86份栽培草莓材料,分别提取每份材料的叶片总RNA,将待测草莓总RNA混样,然后采用高通量测序技术进行测序。根据每种病毒的序列保守区设计引物,采用RT-PCR对高通量测序的结果进行验证。利用设计的引物分别对每份草莓品种材料进行RT-PCR检测,明确每份材料的带毒情况。测序结果表明,从86份草莓资源中检测出3种病毒,分别为草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,简称SMoV)、草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,简称SVBV)和草莓白化病毒(strawberry pallidosis-associated virus,简称SPaV),该结果与RT-PCR验证的结果相符。在所有86份供试样品中,28份材料带有病毒,病毒感染率为32.56%;其中,23份材料带有SVBV;11份材料带有SMoV;5份材料带有SPaV。单一病毒侵染样品18份,复合侵染材料共10份,草莓种苗带毒率高,草莓病毒病危害严重。     

草莓6种病毒多重PCR快速检测方法的建立

为快速鉴定草莓病毒病种类以预防病毒病扩散,根据草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,SVBV)、草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)、草莓轻型黄边病毒(strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)、草莓白化病毒(strawberry pallidosis-associated virus,SPaV)、草莓病毒1(strawberry virus 1,StrV-1)和芸薹黄化病毒(brassica yellows virus,BrYV)的基因保守区域设计特异性引物,建立了能够同时检测这6种病毒的多重PCR方法。该多重PCR反应体系中,2×SanTaq PCR Master Mix用量为10 μL,上下游引物(10 μmol/L)用量为4 μL,其中SVBV为0.25 μL、SMoV为0.50 μL、SMYEV为0.10 μL、SPaV为0.15 μL、StrV-1为0.50 μL和BrYV为0.50 μL,模板1 μL,ddH₂O为5 μL,总体积20 μL。多重PCR反应程序设定为:94 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,53 ℃退火30 s,72 ℃延伸120 s,最后72 ℃延伸10 min,循环数为35。该检测体系的灵敏度可以达到10⁷ copies/μL。该多重PCR方法可以同时实现6种草莓病毒的高效快速检测,为草莓病毒病的早期发现和针对性防治提供了技术支持。     

新疆地区四种草莓病毒病原的检测

【目的】研究新疆草莓病毒病病源种类及田间发生情况,建立主要病毒病原多重RT-PCR检测体系,为无病毒草莓生产提供理论和技术支持。【方法】利用已报道的4种草莓主要病毒病原4对特异性引物,分别对新疆主要草莓种植区采集表现疑似病毒病症状的草莓样品共450份,采用单一反转录PCR(RT-PCR)及多重PCR对采集的样品进行检测,分析新疆草莓病毒病的发生情况。【结果】感染新疆草莓有3种主要病毒,南北疆15个不同栽培区均能检测出这3种病毒,每个采集地的病毒检出率均在26%以上。所有样品中病毒总检出率为64.22%;其中,草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,SVBV)检出率最高,为51.78%;草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)检出率为23.78%,草莓轻型黄边病毒(strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)检出率为9.33%,草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus,SCV)没有检出。病毒复合侵染率达18.45%,两种病毒病复合侵染检出率为16.67%,三种病毒病复合侵染检出率为1.78%;所有样品中对3种病毒的多重RT-PCR与单一RT-PCR检测结果一致。【结论】新疆草莓受SVBV、SMoV和SMYEV三种病毒危害,单一病毒病感染率以及两种以上病毒复合侵染侵染率都较高,在无病毒种苗的培育和生产中加强病毒检测。     

草莓镶脉病毒粒子提取及电镜观察

从受感染的草莓(Fragaria sp)植株中提取了草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)粒子并对其进行了电镜观察.用CTAB法从草莓叶片中提取总核酸,设计SVBV外壳蛋白基因特异性引物,利用PCR方法对杭州地区的草莓镶脉病毒感染情况进行检测.检测结果表明,在杭州地区大田种植的草莓中存在SVBV感染现象.从4株受感染草莓植株中分离克隆了SVBV的CP基因片段并测序;序列比较分析发现它们与已报道的美国SVBV分离物的CP基因(序列号NC_001725)核苷酸同源性为91％.利用差速离心法从上述草莓植株的叶片中提纯SVBV病毒,在透射电镜下观察到SVBV病毒粒子呈球形,直径约为40～55 nm.     

草莓4种主要病毒检测及SVBV贵州分离物基因组测定及分析

[目的]为了解贵州地区草莓(Fragaria×ananassa)栽培品种中4种主要病毒的发病率和草莓褪绿斑驳病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)贵州分离物与其他分离物的遗传进化关系,对贵州省贵阳市和黔东南州凯里市大棚草莓植株和草莓组培苗进行4种主要草莓病毒检测。[方法]克隆SVBV的全长基因组序列及CP编码的核酸序列后测序并分析。[结果]采集的77份草莓样品检测出SVBV和草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)2种病毒,未检测到草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus,SMoV)和草莓蚀刻病毒(Strawberry crinkle virus,SCV),其中SVBV的检出率为19.5%,SMYEV为2.6%;SVBV-GZ(GenBank登录号:MH894295)全基因组序列为7859bp,基因组结构推测有7个开放读框构成,基于SVBV基因组核酸序列的系统发育分析表明SVBV-GZ与SVBV-BJ (GenBank登录号:KR080547)亲缘性较近。[结论]基于SVBV CP氨基酸序列的系统发育分析发现,贵州不同地区草莓SVBV不同分离物与其他中国不同地区分离物同源性较高,可能是由于贵州从全国范围调运草莓种苗造成。     

草莓斑驳病毒的分子杂交检测

为探索分子杂交技术在草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus,SMoV)检测中的运用,利用CTAB法从草莓叶片中提取总核酸,并以此为模板,利用特异引物扩增SMoV非编码区序列,经克隆、测序获得SMoV非编码区序列。系统进化分析结果显示:本研究中的分离物与GenBank中已报道的分离物的亲缘关系较远,独立形成1个小的进化支。以带有病毒特异片段的质粒为模板,运用PCR技术制备了地高辛标记的cDNA探针。以草莓感染SMoV叶片为试材,利用地高辛标记探针可有效检测草莓叶片中的SMoV,草莓总核酸样品稀释10倍后仍可有效检测。     

上海地区四种草莓病毒的检测分析

草莓病毒病常常会给草莓生产造成严重危害,主要表现为开花结果异常、品质劣化、产量下降,果实商品性降低等。为了明确上海地区草莓病毒病的分布和为害情况,对来自上海金山、奉贤、浦东3个草莓产区抽样采集的137份疑似病毒感染样品,采用RT-PCR技术进行分子检测分析并测序。结果表明:137份抽检样品中有88份检出病毒,总检出率达到64.2%,其中,草莓镶脉病毒(SVBV)和草莓斑驳病毒(SMoV)检出率较高,分别达到40.9%和43.8%;草莓轻型黄边病毒(SMYEV)仅在浦东新区采集的样品中检出,检出率达到1.5%;草莓皱缩病毒(SCV)在3个地区均未检测到;SVBV和SMoV两种病毒复合侵染率为21.2%,且症状明显。测序结果显示,在上海地区至少存在2个不同的SVBV病毒小种,3个不同的SMoV病毒小种。本研究可为掌握上海地区草莓产业草莓病毒病的流行情况以及制定有效的防控策略提供重要参考。     

草莓栽培过程有害病毒种类与防治技术

草莓(Fragaria × ananassa Duch.)营养价值丰富,是世界上广泛栽培的重要经济作物。但由病毒侵染引起的草莓病害给生产带来了巨大的经济损失,严重制约了草莓产业的健康发展。据此本文对目前已报道的22种主要草莓病毒进行了分类,详细介绍了草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus, SMoV)、草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus, SVBV)、草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus, SMYEV)和草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus, SCV)四种在生产上危害最为严重的病毒,并综述了国内外草莓病毒性病害的防治方法,同时对未来草莓病毒性病害的防治工作进行了展望,以期为从事草莓栽培工作的生产技术人员提供参考。     

草莓叶片不同保存方法对RT-PCR检测 草莓斑驳病毒效果的影响

植物样本保存方法不当易导致样本枯萎和腐烂，严重影响病毒检测结果。为提高PCR法检测草莓斑驳病毒（strawberry mottle virus，SMoV）的效果，明确待检测植物样本的有效保存条件，将经过RT-PCR检测感染SMoV的草莓叶片作为试验材料，设置自然风干保存、硅胶干燥保存和氧化钙（CaO）干燥保存3种不同的干燥保存条件。采用试剂盒法提取各处理草莓叶片总RNA，设计特异性引物进行RT-PCR检测。比较得到最佳干燥保存条件后，再以几种常见的低温、干燥保存为对照，分析草莓叶片不同保存方法对草莓斑驳病毒PCR检测效果的影响。电泳结果显示，含有SMoV的草莓叶片在CaO干燥保存条件下PCR检测效果最好，且操作简单易行。该方法可以为高效、便捷的保存带毒草莓叶片样本提供参考，适用于田间大量样品的采集，提高检测效率。     

草莓镶脉病毒外壳蛋白的原核表达及多抗血清制备

PCR扩增得到了草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的外壳蛋白(coat protein,cp)基因,将SVBV cp基因克隆到原核表达载体pET-32a上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用终浓度为0.05 mmol·L-1的IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳及Western-blot分析表明,SVBV cp基因在大肠杆菌中得到了融合表达。利用Ni2+-NTA亲和树脂纯化重组融合蛋白,免疫家兔获得了重组蛋白的多抗血清。以此多抗血清建立了Dot-ELISA检测方法,结果表明,制备的特异性多抗血清可以快速检测出感病草莓样品中的SVBV。     

国内外草莓生产现状与发展趋势

2012年,世界草莓的产量为726.9万t,栽培面积30万hm2,其中中国的产量占1/3。虽然中国的草莓产量最高,但在生产中也存在不少问题,如缺乏安全生产技术、品种退化严重、生产劳动强度大、新技术应用不够等。我国草莓发展的主要趋势为：安全生产是重中之重,培育脱毒大苗是实施高效生产的前提,提高内在品质是占领市场的基础,转变栽培模式,提高生产效率是增加效益的保障,新品种、新模式将带领草莓产业新发展。     

利用草莓试管苗托叶再生植株

利用脱毒草莓试管苗叶柄基部的托叶在“MS＋6-BA 1.0～2.0 mg.L^-1”培养基上不经过愈伤组织阶段,直接再生了草莓试管植株,植株再生率达100%,每个托叶最高分化试管苗数达12.5株;提高了脱毒草莓试管苗的继代增殖倍数,提高了脱毒草莓试管种质材料的利用率,降低了脱毒草莓试管苗的成本。     

红花草莓及其杂交育种研究

用红花草莓品种“粉红熊猫”(PinkPanda)与栽培草莓品种吐德拉、鬼怒甘、久能早生进行正反交,草莓品种×粉红熊猫组合后代的红花株数∶白花株数比例约为12∶,得到了一批花瓣颜色为微粉、浅粉、粉红色、红色、深红色等不同程度红色的红花草莓共363株,为培育观花观果兼食用、花色多样、花色鲜艳、重瓣性强等更具观赏性的红花草莓新品种奠定了基础。并介绍了新近引入国内的红花草莓“粉红熊猫”的生物学性状和应用状况。     

配制型草莓酸奶的研制

向牛乳中加入食用乳酸和草莓汁，使乳中的蛋白质凝聚形成稠密的凝胶体，同时加入稳定剂以保证产品的稳定性。     

盆栽草莓的花果分级标准

通过对盆栽草莓的抽样调查,测定了草莓果横径、果纵径、单果重、花茎长度、花朵数、花蕾数、果数、果实盖度、株数等指标,并将以上各个指标分成3个等级,利用生物统计对数据进行分析,选取的最优级盆栽草莓的指标为:果横径4．2-5．5 cm,果纵径4．5-5．8 cm,单果重24．1～32．6 g,果数15—20个,花茎2．8—3．6 cm,花朵数6～7朵,花蕾数6～8个,果实盖度40％～50％,盆株数3～4株。     

结合内标的RT-PCR技术检测草莓轻型黄边病毒(SMYEV)

草莓(Fragaria ananassaDuch)是蔷薇科(Ro-saceae)草莓属(Fragaria)多年生草本植物.在长期的生产过程中,草莓同其他无性繁殖植物一样,易感染病毒,从而造成草莓品种的种性退化.     

精胺对草莓贮藏保鲜的效应

以不同浓度的精胺对草莓果实进行处理。结果表明:各种处理均可降低草莓的腐烂率。其中0.2mmol/L精胺的处理效果最佳,至贮藏第3d,腐烂率仅为12.50%,比对照同期减少37.50%,且可减缓草莓可溶性固形物、总糖和可滴定酸在贮藏期间的代谢速度。     

日光温室草莓果实生长发育过程中糖、酸和Vc变化动态的研究

为了得到日光温室草莓果实发育过程中营养成分的变化动态规律，以全明星及丰香为试材，研究了草莓果实从落花后1周到成熟整个生长发育过程中各种营养成分的变化。结果表明，果实发育过程中总糖和蔗糖含量逐渐增加，从白熟期到成熟期增加最快；酸含量逐渐减少；Vc含量先降后升，在半红期达到最大，成熟期略有下降。     

不同配比复合膜对草莓采后品质的影响

用1%的壳聚糖分别与0.2%的魔芋葡甘聚糖、明胶、变性淀粉混合制成复合膜,对草莓进行涂膜处理后,研究室温（温度（25±2）℃,相对湿度30%～50%）贮藏过程中的感官评定、失重率、可溶性固形物、抗坏血酸含量、颜色等的变化。结果表明,壳聚糖复合膜对草莓采后保鲜效果要优于对照单一膜,其中壳聚糖与魔芋葡甘聚糖复合膜效果最佳。     

Study of Embryo and Endosperm Development of Strawberry

The fertilization and development process of embryo and endosperm of strawberry,Gelila snd Xiaoshi which were broadly cultivated in Harbin were investigated by optical microscopy, fluorescence microscopy and transmission electron microscopy.The papilla cells ranked in grid orid on its stigma and the flourishing transmitting tissue appeared in the center of its thin and long pistillary.There was only one crassinucellate hemianatropous ovule with Polygonum type embryo sac and single integument in each ovary.The germination of pollen and the pathway of pollen tube growth could be clearly observed with fluorescence microscopy:stigma→transmitting tissue in pistillary→intine of ovary placenta→the surface of ovule→micropyle.The development of embryo was consistent with most dicotyledons:zygote→2-cell proembryo→proembryo shaped like a ball→proembryo shaped like a heart→proembryo shaped like a torpedo→proembryo formed two cotyledons.The embryo was orthotropous and its development was asterad type.The endosperm development beloged to nuclear type as following:primary endosperm nuclcus→free endosperm nucleus→endosperm cell →endosperm assimilated gradually by embryo.There was a special struc-ture around it during the development of Gelila embryo.