从麦胚清蛋白分离制备高活性抗氧化肽

【目的】探究能有效地从小麦胚芽清蛋白二步双酶酶解物中分离得到高活性抗氧化肽的工艺。【方法】以小麦胚芽清蛋白为原料,DPPH自由基清除率和Fe²⁺螯合能力为抗氧化活性的评价指标,通过胰蛋白酶进行酶解,依次采用超滤膜和凝胶过滤色谱（Sephadex G-75）对酶解产物进行分离纯化,筛选出活性较高的组分;采用碱性蛋白酶对获得的活性较高组分进行酶解,通过凝胶过滤色谱（Sephadex G-15）和反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离纯化其酶解产物;采用质谱技术（ESI-TOF MS/MS）对抗氧化活性最高的组分进行结构鉴定。【结果】分离得到3个活性组分（峰）P_a、P_b、P_c,采用DPPH法和Fe²⁺螯合能力测定法测定其抗氧化活性的结果都显示,在3个组分中,提取率为23.1%的组分P_b抗氧化活性最强（P＜0.05）,因此选取组分P_b进行下一步碱性蛋白酶酶解。该酶解物经Sephadex G-15分离后得到P_d和P_e两个组分（峰）,经抗氧化活性测定,选取提取率为52.1%的高抗氧化活性组分P_d（P＜0.05）进一步通过RP-HPLC进行疏水性分离,得到P₁、P₂、P₃、P₄、P₅五个活性组分（峰）,其中提取率为7.3%的组分P₃的抗氧化活性最强（P＜0.05）,其DPPH自由基清除率和Fe²⁺螯合能力的EC₅₀值分别为1 mg·mL^-1、0.6 mg·mL^-1。最后通过质谱技术（ESI-TOF MS/MS）鉴定组分P₃的结构,得到其氨基酸序列为AREGETVVPG,分子量为1 013.51 Da,纯度约为85%,与用化学方法合成的多肽AREGETVVPG（纯度95%以上）的抗氧化活性相比,结果没有显著差异（P>0.05）。【结论】二步双酶酶解结合超滤膜、凝胶过滤色谱和RP-HPLC等蛋白分离纯化技术为直接得到单一的高活性抗氧化肽提供了技术参考。     

高效液相色谱-串联质谱法分离鉴定类球红细菌红色素

利用反相高效液相色谱/二极管阵列检测器/电喷雾质谱联用技术研究类球红细菌红色素,分离鉴定出一种组分,属于类胡萝卜素。采用C30色谱柱,在甲醇-乙腈-MTBE(3 1 1,V/V/V)为流动相,流速为1 mL·min-1,检测波长为475 nm的色谱条件下,类球红细菌红色素中有11个色谱峰在55 min内得到显著分离。借助反相高效液相色谱-电子喷雾离子源质谱联用(RP-HPLC-ESI-MS/MS)法初步确鉴定出这11个色谱峰中一种主要组分,为Philosamiaxanthin,其相对分子质量为566.5。     

小麦叶片蛋白质组的2D-LC分离及Nano LC-MS/MS分析

 【目的】二维液相色谱（2D-LC）与双向电泳（2-DE）技术具有互补性,本文旨在探讨利用2D-LC和纳升级液相色谱串联质谱（Nano LC-MS/MS）技术分离鉴定小麦叶片蛋白质组的新方法。【方法】小麦叶片蛋白经提取、脱盐后,进行第一维阴离子交换分离;收集洗脱组分进行SDS-PAGE分析,并对非高丰度蛋白组分进行第二维反相液相色谱分离;随机选择含较低吸收峰的部分组分经胰蛋白酶水解后进行Nano LC-MS/MS 分析;将串联质谱数据通过MASCOT搜索NCBInr和EST数据库,并对二级质谱获得的蛋白序列进行MS BLAST分析。【结果】经第一维阴离子交换色谱分离,收集得到15个组分,其中第15组分包含小麦叶片丰度最高的蛋白——1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（RuBisCO）;其余14个组分经反相液相色谱分离,共收集1 551个组分,获得1 867个色谱峰;随机对其中6个含较低吸收峰的收集组分酶解和Nano LC-MS/MS 检测,9种蛋白得到鉴定。【结论】结果初步表明,利用2D-LC和Nano LC-MS/MS技术可有效地分离和鉴定小麦叶片蛋白质组,为更深入全面地研究小麦叶片蛋白质组奠定基础。     

大鲵糖肽组分的高效液相色谱分析及其抗氧化活性研究

利用高效液相色谱方法对大鲵糖肽进行分析,使用Sino Chrom C18反相柱和紫外可变波长检测器,并测定大鲵糖肽的羟基自由基清除能力。结果表明：大鲵糖肽组分的最佳液相色谱检测条件为：检测波长280 nm;流动相为V（乙腈）∶V（甲醇）∶V（0.1%三氟乙酸）=5∶5∶90;流速1.0 mL/min;进样量20μL。大鲵糖肽在5.78μg/mL浓度时,羟基自由基的清除率达60.19%,具有较好的抗氧化活性。     

反相液相色谱在多肽及蛋白质分离分析中的应用

反相液相色谱由于具有分辨率高、重复性好、回收率高等优点,在多肽及蛋白质研究领域中得到了广泛的应用。简要介绍了反相液相色谱及其分离机理,以及在多肽和蛋白质研究中分离纯化、肽图分析等方面的应用。     

红褐林蚁多肽的免疫活性及镇痛、抗感染作用

对红褐林蚁的多肽蛋白质进行了分离和制备,并对其免疫活性、镇痛及抗感染作用进行了研究.红褐林蚁水提物经SephadexG-50凝胶过滤层析分离得到组分Ⅰ和组分Ⅱ,经紫外检测均为蛋白质;每个组分经反相高效液相色谱分离和制备,组分Ⅰ得到a,b,c3个组分,其中组分a含量最高;组分Ⅱ得到d,e,f3个组分,其中组分e含量最高.淋巴细胞转化试验结果显示：组分a和组分e能抑制淋巴细胞增殖,表明其具有免疫活性;热板法所致小鼠痛阈值的变化和二甲苯诱发小鼠耳肿胀试验显示：红褐林蚁多肽试剂具有镇痛和抗感染作用.     

高效液相色谱法分离纯化小皱蝽抗菌肽AMP-1

用昆虫生理盐水浸提小皱蝽成虫,浸提液冻干后,酸提取法制备粗提液,固相萃取（SPE）初分级分离,活性洗脱组分反相高效液相色谱（RP－HPLC）纯化,进一步凝胶渗透色谱（GPS）及反相高效液相反谱（RP－HPLC）纯化,分离得到一抗菌肽,茚三酮反应黄色,命名为AMP－1。在190nm-225nm短波紫外区,AMP－1有紫外吸收。     

脂肪酶和酯酶指纹分析在嗜酸耐热菌快速鉴定中的应用

【目的】采用反相高效液相色谱建立嗜酸耐热菌的脂肪酶和酯酶指纹图谱,为建立基于脂肪酶和酯酶指纹分析的嗜酸耐热菌快速鉴定方法提供参考。【方法】将5个脂肪酶和酯酶底物直接与嗜酸耐热菌反应,通过反相高效液相色谱检测得到了9株嗜酸耐热菌的脂肪酶和酯酶指纹色谱图,并对色谱数据进行系统聚类分析。【结果】所得脂肪酶和酯酶指纹图谱能将脂环酸芽孢杆菌和芽孢杆菌明显分为2个类群,且同一属的2个不同种的细菌也能得到正确归类。【结论】脂肪酶和酯酶指纹分析能够用于嗜酸耐热菌的快速鉴别,且简便快速、重现性好、经济成本低,具有广阔的应用前景。     

福美双混剂HPLC分析方法的研究

采用ＯＤＳ２Ｃ１８色谱柱,反相高效液相色地,在只改变检测波长而其它色谱条件不变情况下,完成了福美双混剂中福美双,稻瘟灵和甲霜灵３个农药组分含量的测定。     

非食用色素酸性橙Ⅱ的检测方法研究进展

对食品中酸性橙Ⅱ的检测方法进行了综述,其中包括基于高效液相色谱(HPLC)的检测方法,如HPLC法、反相高效液相色谱(Re-HPLC)法、高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)法、超高效液相色谱(UPLC)法,以及其他检测方法,如酶联免疫(ELISA)法、薄层色谱扫描法、荧光光谱检测法和极谱法,以期为酸性橙Ⅱ检测方法的改进提供依据。     

Effects of Plant Protein Hydrolysate on Emergence and Growth of Rice Seedlings

With the rise of organic agriculture, researches on the production of slow-release organic fertilizer from natural organic materials have attracted much attention. Plant protein and peptides have potential applications in agricultural production. The effects of bioactive peptides derived from plant protein on rice seed germination and seedling growth and development were systematically studied using bioassays and greenhouse growth experiments. The feasibility of phytoprotein peptide application in the rice seedling stage was discussed. The results showed that the phytoprotein peptides had no adverse effects on rice, and the application when applied to rice seedlings, phytoprotein peptides within a certain concentration range produced obvious promotion effects on the growth and development of rice seedlings, which were more pronounced in the underground part of the plants. Phytoprotein peptides increased root length and dry matter accumulation and improved the robustness of rice seedlings. A 40 g·mol~(-1)·L~(-1) dose of phytoprotein peptides increased root length, plant fresh weight, plant dry weight, root fresh weight and root dry weight by 59.24%, 20.14%, 26.32%, 51.57% and 81.70%, respectively compared to the control. In addition, the phytoprotein peptides significantly increased the chlorophyll content, root activity and nitrate reductase activity of rice seedlings, as well as superoxide dismutase, peroxidase, catalase and β-1, 3-glucanase activity in rice leaves, which could improve stress resistance. Plant peptides were simple to produce and costeffective. Reasonable development and excavation of plant protein and protein hydrolysate peptide in China's agricultural application had a good practical basis and value significance.     

米糠肽的研究与应用

介绍了米糠蛋白的性质及其活性肽在降血压、阿片样拈抗活性、抗氧化、免疫调节等方面的作用,并概述了米糠蛋白及肽在食品行业的应用状况及发展前景.     

贻贝抗菌肽的分离纯化

[目的]从贻贝中提取具有抗菌作用的多肽。[方法]以紫贻贝为原料,采用0.5%的乙酸直接提取方式提取抗菌肽,再经过Sephacryl S-100聚丙烯酰胺凝胶色谱进行纯化,收集各馏分并用滤纸片扩散法测定其抗菌活性及对各种细菌的最低抑菌浓度,使用SDS-PAGE测定抗菌肽的分子质量,测定其在100℃条件下不同处理时间和不同pH条件下抗菌活性的变化。[结果]使用0.5%的乙酸作为提取液粗提取抗菌肽具有较高的提取效率,使用Sephacryl S-100纯化抗菌肽,可将抗菌肽纯化为单一物质。分离纯化出的贻贝抗菌肽具有较强的抗菌性,分子质量为5 908,且具有耐高温、耐酸碱的性质。[结论]该研究为抗菌肽的大规模生产奠定了基础。     

糙米发芽过程中蛋白酶活力及含氮物质的变化

以糙米为原料,研究其发芽过程中蛋白酶活力及蛋白质含量、组成、水解度和肽含量等降解产物的变化。结果表明:糙米经48h发芽,与未发芽前相比,蛋白酶活力增加3.39倍,蛋白质水解度提高5.37倍,肽总量升高38.68%,水解度与肽含量间相关系数达0.9606;清蛋白和球蛋白含量下降74.76%,谷蛋白和醇溶蛋白含量增加95.68%,游离氨基酸含量升高2.17倍,非蛋白氮含量增加。糙米发芽72h时,蛋白酶活力增幅减小,蛋白质水解度及肽含量继续升高,而清蛋白增多,谷蛋白减少。SDS-PAGE测定结果显示,糙米发芽过程中,大分子量的蛋白质组分降解,小分子量的多肽类成分增加,游离氨基酸含量显著升高;发芽48h前蛋白质的转化与降解趋势平缓,之后其变化极显著。因此,糙米发芽48h是其含氮物质变化的重要转折点。     

The relation between major histocompatibility complex (MHC) restriction and the capacity of Ia to bind immunogenic peptides

The capacity of purified I-Ad, I-Ed, I-Ak, and I-Ek to bind to protein derived peptides that have been previously reported to be T cell immunogens has been examined. For each of the 12 peptides studied strong binding to the relevant Ia restriction element was observed. All the peptides bound more than one Ia molecule; however, for 11 of 12 peptides, the dominant binding was to the restriction element, whereas in one instance the dominant binding was to a nonrestriction element. When the peptides were used to inhibit the presentation of antigen by prefixed accessory cells to T cells, an excellent correlation was found between the capacity of a peptide to inhibit the binding of an antigen to purified Ia and the capacity of the peptide to inhibit accessory cell presentation of the antigen. Thus, the binding of peptide to purified Ia is immunologically relevant, and Ia seems to be the only saturable molecule on the surface of the accessory cell involved in antigen presentation. Inhibition analysis also indicated that all peptides restricted to a particular Ia molecule competitively inhibited one another, suggesting that each Ia restriction element has a single binding site for antigen. Cross-linking of labeled peptides to Ia followed by electrophoretic analysis and autoradiography suggested that this single binding site is made up of portions of both alpha and beta chains of Ia.     

乳清蛋白抗氧化肽对H_2O_2所致人胚肺成纤维细胞MRC-5过氧化损伤的保护作用

【目的】探讨纯化后的乳清蛋白抗氧化肽P4对人胚肺成纤维细胞(human lung fibroblast)MRC-5过氧化损伤的保护作用及可能的作用机制。【方法】采用H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型,应用四唑蓝快速比色法(MTT法)检测细胞存活率,通过检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,来确定P4对过氧化损伤MRC-5细胞的保护作用,并利用电镜观察细胞形态学变化。【结果】1mmol·L-1H2O2孵育24h可显著诱导MRC-5细胞损伤,使细胞存活力下降到22.47%,细胞经不同浓度的抗氧化肽P4(4、20、100μg·mL-1)与H2O2共孵育后,特别是100μg·mL-1(高剂量组)抗氧化肽P4可使细胞存活率达到44.77%。同时,提高乳清蛋白抗氧化肽P4的浓度,可促进受损的MRC-5细胞修复,提高了SOD、CAT、GSH-Px酶活性,降低MDA含量。扫描电镜和透射电镜观察结果也表明,一定浓度的乳清抗氧化肽对MRC-5细胞具有保护作用。【结论】乳清抗氧化肽通过拮抗H2O2而对MRC-5的过氧化损伤具有保护作用。     

稻穗ATP酶活性与籽粒灌浆的关系

对杂交水稻威优35,威优64和常规稻78130强弱势粒ATP酶活性的测定、考种及稻穗不同部位枝梗ATP酶的电镜细胞化学观察表明,水稻灌浆期间籽粒ATP酶活性与灌浆速度呈正相关。ATP酶主要定位于稻穗枝梗筛管细胞质膜和细胞间隙周围的细胞壁表面,并具有较高的活性。灌浆前期,稻穗上部枝梗筛管细胞质膜上的ATP酶活性比下部强;其韧皮组织的胞间连丝比下部多;其韧皮部中可观察到大量物质从伴细胞向细胞间隙转移。在稻穗下部则几乎没有观察到这种现象。     

制备米糠蛋白降血压肽最佳用酶的筛选

试验以筛选制备米糠蛋白降压肽最佳用酶为目的。选用碱性蛋白酶、碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、蛋白酶K和双酶复合水解米糠蛋白,以血管紧张素转化酶（ACE）抑制率为主要指标,筛选出制备米糠蛋白降压肽的最佳用酶。结果表明,米糠降压肽ACE抑制率的大小与酶的种类及配比有关,筛选出碱性蛋白酶Alcalase为试验用酶,在酶解温度45℃,加酶量3 000 U.g-1,酶解pH8.5,米糠蛋白底物浓度3%酶解2 h时达到最大抑制率为71.1%。     

双酶直接酶解米糠制备短肽的工艺优化

 【目的】建立在中低温度下直接酶解米糠制备短肽的优化工艺。【方法】采用二次回归正交旋转组合设计优化直接酶解米糠制备短肽的工艺条件,其中总糖含量测定采用蒽酮比色法,水解度（degree of hydrolysis,DH）采用pH-stat法,蛋白质回收率采用凯氏定氮法。【结果】确定直接酶解米糠制备短肽最佳工艺条件为：米糠先经糖酶（viscozyme）反应2 h去除糖类杂质,然后用碱性蛋白酶（alcalase）和胰蛋白酶双酶水解,最适pH 8.2,温度45℃,alcalase与胰蛋白酶酶活比59﹕41,总酶活5 750 U/g底物,水解时间3 h。在此条件下,DH为23.04%,蛋白质回收率为84.33%,酸溶性多肽（TCA-SN）为68.40%,短肽分子量主要集中在1 000 D以下。【结论】在中低温和偏中性（pH 8.2）条件下,采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶直接酶解米糠制备短肽,与先提取蛋白后酶解制备短肽的方法相比,具有操作步骤简单、蛋白质利用率高等特点,是一种制备米糠肽的新途径。     

N-Formylmethionyl peptide receptors on equine leukocytes initiate secretion but not chemotaxis

The chemotaxis of leukocytes appears to be initiated by the binding of chemotactic factors to the surface of these cells. N-Formylated peptides induce chemotaxis and lysosomal enzyme secretion of leukocytes; because these peptides are available in a purified radiolabeled form, they have been useful in the characterization of receptors for chemotactic factors. Equine polymorphonuclear leukocytes secrete lysosomal enzymes but do not exhibit chemotaxis in respone to the N-formylated peptides, even though they have a high-affinity cell surface receptor for these agents. The specificity of the equine receptor resembles the specificity of the receptor on chemotactically responsive leukocytes from other species. Equine polymorphonuclear leukocytes may thus be an excellent model for the study of the events that lead to a biological response following receptor occupancy.