文冠果同源异型变异株的发现

该文对北京林业大学苗圃内发现的一文冠果的同源异型自然变异株进行了形态及解剖学观察．结果发现：这一花器官变异植株的花明显小于正常株的花,且不能完全开放,始终呈半开状．花重瓣多轮,仅具花萼和花瓣,不具雄蕊和雌蕊．因为雄蕊和雌蕊全部特化为花瓣状,部分特化的内轮花瓣上留有花药的残迹,花药内的花粉发育是不正常的．与此相关的营养体特征是变异株的叶片大,厚且颜色呈深黑绿色．     

外源大豆总DNA导入木豆品种的研究

用大豆总DNA通过花粉管导入木豆品种ICPL87091和ICP7035中，在D3代出现茎色，花色，叶色，叶型等变异的植株，从中选择农艺性状优良的12个单株进行全基因组原位杂交分析。用大豆桂品24-2号的DNA经地高辛标记后作为探针，对大豆桂品24-2号（供体），木豆ICPL87091（受体）和ICP7035（受体）以及用大豆总DNA通过花粉管通道转导的木豆转化株的基因组DNA，进行分子杂交探查，大豆探针可以探查出一些木豆转化株内有很强的杂交信号，比较受体，供体和转化株的原位杂交图谱，发现有7个木豆转化株的DNA与供体大豆DNA有很高的同源性片段，有5个转化株的木豆DNA与供体大豆DNA有杂交信息但信号弱，表明来自供体大豆总DNA的部分序列已整合到木豆基因组里并在其后代的性状里得到表达。     

文冠果传粉生物学特性研究

为准确掌握文冠果开花生物学规律,对宁夏银川植物园引种的文冠果(Xanthoceras sorbifolia Bunge)优良株系传粉生物学特性进行了研究。结果表明:文冠果为杂性花,即可孕花(两性花)与不孕花(雄花)同株,盛花期短,花粉活力较低,其繁育系统属于兼性异交、部分自交亲和、需要传粉者。     

应用RAPD技术对鸡柔嫩艾美耳球虫不同地理株的多态性研究

利用RAPD技术对鸡柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)GZ株、HB株、JL株及HB株与JL株杂交虫株FZ1进行了研究。结果表明：E．tenella不同地理株间及同一地理株亲代与子代间均存在DNA多态性。其中不同地理株间种内变异程度较大(SI=O．6225--O.6977)。而同一地理株子代与亲代间也发生遗传变异，但变异程度不大(SI=O.9813--0．991O)。同时对本室培育的HB株与儿株的杂交虫株FZl的基因组DNA进行RAPD分析。发现该杂交株与其亲本HB株、JL株的相似值为O.8215，O.7916，大于HB株与JL株间相似值(O．6977)。小于传代虫株间的相似值(O.9813--O.991O)，且其扩增务带显示出与亲本株间的相似，且又有不同，表明试杂交虫株是1株既具有两亲本株的遗传性状，又发生了变异的虫株。     

RFLP缩减杂交技术的改良与水稻雄性不育细胞质基因组差异片段的克隆

对基因组RFLP缩减杂交技术进行了改良，即用连接成大分子的Driver DNA与Tester DNA杂交、再利用PCR纯化试剂盒对大片段DNA回收率低的原理去除大部分Driver DNA以及与之杂交的非特异性Tester DNA片段.经过PCR扩增和克隆，获得多态性片段，可快速获得在亲本间有差异的分子标记．用该技术对水稻野败型雄性不育细胞质和正常细胞质DNA进行RFLP缩减杂交，获得了2个在不育系细胞质DNA与保持系细胞质DNA间的差异片段。     

牵牛花杂交F2代的RAPD多态性分析

从50个引物中筛选了5个引物对园叶牵牛4个亲本及各杂交组合F2单株的总DNA进行RAPD扩增,共产生了83条DNA扩增带,它们的分子量在200～2 500bp之间.同一引物在不同的供试材料上具有不同的指纹图谱,扩增带的变幅在1～15之间,多态性也随引物的不同而异.3个杂交组合F2基因组的DNA均有不少片段来自双亲中的共有片段,部分来自母本,另一部分则来自父本,还有极少的一部分 是双亲均不具备的特异性片段,而双亲中原有的部分片段(特异性片段)在子代中却已消失.     

豆玉1号(大豆-白糯玉米)的创制选育及其生物学特性

将供体大豆的染色体及其片段和受体玉米细胞中的染色体进行染色体杂交,创制并培育成染色体杂交当代植株。其中一株当代杂交株产生剧烈变异,与对照玉米比较,生物学性状发生明显变化。该当代杂交株没有发育出雄穗,只能采用其他品种玉米(K12)的花粉进行授粉,从而获得F1种子。再经过多年的遗传育种,套袋自交至F12,选育出性状变异表现优异的自交系——豆玉1号。对该大豆-白糯玉米F12(豆玉1号)自交系品种的创制、选育过程和生物学特征和特性进行了简要的介绍。     

EMS诱变小麦河农822的SSR及SDS-PAGE鉴定

为给小麦育种提供基础材料,利用SSR技术和高分子量麦谷蛋白SDS-PAGE对由EMS诱导河农822获得的矮秆、短芒、密穗、棒状穗、早熟等8个小麦性状变异株进行鉴定。结果表明:在DNA水平,除矮秆变异株外,其余均缺失了1条50~190 bp的片段,各个不同性状突变株均增加了3~4条44~574 bp的片段;在蛋白质水平,不同性状突变株高分子量麦谷蛋白亚基在Glu-1B和Glu-1D位点呈现出缺失和新增亚基2种情况。这表明突变材料与对照相比,不仅在生物学形态存在明显差异,而且在DNA和蛋白质水平上也产生了突变,为小麦突变产生提供了充分的分子生物学证据。     

外源DNA导入玉米引起后代性状变异的研究

采用浸胚法将大豆DNA导入玉米自交系,获得变异植株D0代及D1代植株。考察D0代变异株及D1代植株的性状,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)对D0代植株及其供体进行了过氧化物同工酶分析,从而初步证实了大豆DNA的功能片段已整合到了受体基因组内并得到了表达。     

北疆高寒地区文冠果栽培技术

文冠果系无患子科文冠果属落叶小乔木或大灌木,也可栽培为高大乔木。文冠果是我国特有的优良木本油料树种,种子含油量为45％-50％,种仁含油量为70％。油黄色而透明,食用味美,具药用功效,油饼可作饲料和肥料。文冠果株形优美,花、叶俱佳,花序大、花朵密,花期可持续20多天,具有较高的观赏价值,是优良的绿化树种。     

三角枫不同变异株系的AFLP分析

为了探明三角枫不同变异株系的遗传差异,采用AFLP分子标记技术对三角枫3种不同变异株系进行基因组DNA差异性分析。结果表明:1)在3个测试样品的相似性中,红色系与原株系共有谱带率为0.856 4,黄色系与原株系的共有谱带率为0.708 5。2)对扩增的特异片段经测序与比对得出1个序列对于多聚半乳糖醛酸酶的活性具有调控作用。3个测试样品间的遗传基础均存在不同的差异性。     

Chloroplast transformation in Chlamydomonas with high velocity microprojectiles

Bombardment of three mutants of the chloroplast atpB gene of Chlamydomonas reinhardtii with high-velocity tungsten microprojectiles that were coated with cloned chloroplast DNA carrying the wild-type gene permanently restored the photosynthetic capacity of the algae. In most transformants of one of the mutants, a fragment with a 2.5-kilobase deletion was restored to normal size by a homologous replacement event; in about 25 percent of the transformants the restored restriction fragment was 50 to 100 base pairs smaller or larger than that of wild type. About one-fourth of the transformants of this mutant contained unintegrated donor plasmid when first examined. This plasmid persisted in four different transformants after 65 cell generations of continuous liquid culture but was lost from all transformants maintained on plates of selective medium. The restored wild-type atpB gene remains in all transformants as an integral part of the chloroplast genome and is expressed and inherited normally.     

适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法

[目的]研究适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法,为冬季无法获得幼叶和其他幼嫩材料时从事桃基因组研究打下了基础。[方法]以8种野生桃冬季1年生休眠枝的韧皮部为试验材料,采用改进的CTAB法提取基因组总DNA,与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析,并进行了AFLP验证分析。[结果]从野生桃韧皮部提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280均为1.8~2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化,其AFLP分析条带清晰,多态性好。[结论]该法提取的野生桃韧皮部基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

适用变性梯度凝胶电泳分析的石油污染土壤微生物DNA模板制备的研究

[目的]为了快速、简便和经济地获得理化性质不同的石油污染土壤中微生物总DNA,以用于后续微生物群落结构分析及动态监测。[方法]采用3种提取方法对石油污染土壤中细菌总DNA进行提取,并通过DNA产量、纯度、片段大小、基因组完整性等对提取得到的DNA质量进行评价;并对16S rDNAV3可变区的PCR扩增产物进行DGGE分析。[结果]采用3种方法均能从石油污染土壤中提取得到相应的细菌DNA片段,且针对同一种提取方法,土壤理化性质的差异对DNA提取效果影响不明显,但不同方法提取得到的DNA在浓度和纯度上存在明显差异。采用3种方法提取得到的DNA量分别可达98.3、79.9和43.8 ng/μl。[结论]选取方法1提取基因组DNA并进一步纯化,纯化后的DNA分别采用引物F27/R1492和F357/R518进行16S rDNA及116S rDNAV3可变区的扩增,获得了条带清晰、浓度高、无污染的DNA目的片段;对其PCR扩增产物进行DGGE分析,得到的DGGE图谱可直观反应石油污染土壤中微生物的多样性及优势种群。     

不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹 DNA提取效果的比较研究

为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量.结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃＞肌肉＞刚毛＞血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求.综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用.     

转TGEV-S基因玉米中目的基因的PCR检测及优化

为提高转基因玉米中目的基因的检出效率,以猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白（TGEV-S）转基因玉米为材料,利用PCR方法检测样品中的目的基因.通过对PCR反应体系中4种不同DNA聚合酶和8种退火温度进行比较,建立和优化了转基因玉米中TGEV-S基因的PCR检测方法.对450株转基因玉米叶片DNA和种子DNA中的TGEV-S基因片段进行检测,并设计33对引物检测插入转基因玉米基因组DNA中的质粒pBAC9020DNA片段.结果显示,LA Taq酶对叶片DNA和种子DNA中TGEV-S片段的PCR扩增敏感性和特异性均优于其他Taq聚合酶,且退火温度为53～55℃时扩增效果较好.分别对450份转基因玉米叶片DNA和种子DNA检测结果显示阳性率分别为82.5％和76.3％.利用33对引物进行的PCR扩增及测序结果显示质粒pBAC9020基因片段已全部插入该玉米基因组DNA中.本试验建立的转TGEV-S基因玉米PCR检测方法敏感性和特异性高,为转基因玉米阳性植株的检测奠定了坚实的基础.     

鞣制皮张DNA的提取

采用5种方法从鞣制的野猫(Felissilvestris)皮和漠猫(F.bieti)皮中提取DNA,用Cytb基因的通用引物进行PCR扩增,并对扩增结果进行测序,以检验提取效果。结果显示,鞣制皮张中的DNA含量少,高度降解,且含有大量的酶抑制物。用酚-氯仿法可以得到DNA,但需要采用DNAIQTM系统(Promega)的磁珠纯化策略进一步彻底纯化才能达到最佳扩增效果。此外,PCR引物设计时应尽量缩短扩增片段长度以便提高扩增成功率。     

DNA干扰现象及其作用机理研究进展

与体内某一基因相同的DNA序列可特异性抑制细胞内靶标基因的表达,这种现象称之为DNA干扰(DNAi)。DNAi是随着转录后基因沉默现象而在烟草属植物上被发现,之后在一些动植物及其细胞上也被发现。在原核生物中也存在DNAi现象,且原核生物的Ago在体外也能实现DNAi。原核生物DNAi的机理主要是Ago以DNA为向导切割DNA或RNA,而真核生物可能是基因转录后抑制、基因组甲基化和启动子结合的转录抑制等。本文还对DNAi的进一步研究和应用进行了讨论和展望。     

外源DNA导入水稻后代变异性的SSR分析

采用花粉管通道法,将高粱DNA导入水稻,获得了34个稳定的变异品系,从60对SSR引物中筛选出17对,对供体高粱、受体水稻及其外源DNA导入后代稳定材料进行了SSR分析,结果表明,高粱DNA导入水稻可以引起广泛的变异,在分子水平上产生了遗传多样性,聚类分析可将其分为五类,各类有其特有的遗传变异性。接受外源DNA三个片断,两个片断及一个片断的株系分别被聚成一类,与其他类的遗传差异分别为0.467,0.389及0.347,变异程度依次递减;未接受外源DNA两个片断的株系被聚成另一类。因此,接受外源DNA片断的多寡是水稻后代稳定品系变异程度的基础,也是它们分类的标准。     

猪毛干部位基因组DNA的三种提取方法比较

通过比较三种猪毛干基因组DNA提取方法,改进了提取猪毛干基因组DNA的技术方法。将DNA提取物进行琼脂糖凝胶电泳、紫外可见分光光度计及PCR扩增分析,结果表明,在毛干中能成功提取到基因组DNA,其浓度和纯度足以满足分子生物学技术试验的要求,该技术还可以减少对动物的伤害,在样品不易获得的濒危动物研究中尤为适用。