牛源多杀性巴氏杆菌主要荚膜群和脂多糖基因型两组三重PCR检测方法

为掌握国内牛源多杀性巴氏杆菌流行的主要荚膜群及脂多糖基因型,建立了检测多杀性巴氏杆菌(Pm)及其A、B荚膜群的三重PCR(PmAB-3PCR)以及检测3个脂多糖基因型的三重PCR(LPS-3PCR)方法,检验了其特异性和敏感性,用感染Pm小鼠的组织和人工污染Pm的牛鼻拭子样品进行了临床模拟检验,并对30株P m进行了PCR检测和传统血清学分型比较。结果显示:PmAB-3PCR特异性好,PmAB-3PCR和LPS-3PCR的DNA检测限分别为10~100 pg和1 ng,二者对菌液的检测限分别为200~2000 CFU和2000~20000 CFU。模拟临床样品PmAB-3PCR检测结果与细菌分离结果100%一致。PmAB-3PCR与琼扩试验的符合率为84%,二者检出的阳性率分别为88%和72%,差异不显著(P>0.05);LPS-3PCR与琼扩试验的符合率为60%,检出的阳性率分别为90%和50%,差异显著(P<0.05)。结果表明,建立的两组三重PCR方法准确高效且重复性好,可取代常规血清学方法用于国内牛巴氏杆菌病的诊断、流调和疫苗株筛选。     

供用电行为的法律分析

为规范供用电行为,本人根据学习我国关于电力法律、行政法规和规章,提出供用电行为的法律分析,可供供电人和用电人在实施供用电行为时参考。我国《合同法》第176条规定:“供用电合同是供电人向用电人供电,用电人支付电费的合同。”因此,实施供用电合同的行为就是供电人卖电、用电人买电的行为,即一种买卖行为,而买卖行为则是典型的民事行为。但是,供用电行为又是一种特殊的买卖行为,也即一种特殊的民事行为。其特殊性,主要是由供用电过程中所必须遵循的自然和社会的客观规律决定的。根据我国关于电力法律、行政法规和规章的规定,其供用电的…     

家禽弯曲杆菌的控制策略

弯曲杆菌是一种感染人和动物的重要食源性病原细菌.家禽是人弯曲杆菌病的主要污染来源,因而控制家禽弯曲杆菌对保障人类健康和食品安全具有重要意义.本文对近年来在家禽弯曲杆菌方面的一些最新控制措施进行了简要综述,特别是弯曲杆菌疫苗的研制及抑制弯曲杆菌药物方面的进展.     

犬瘟热病毒Lederle株H,N全基因序列分析及表达研究

采用RT-PCR方法自犬瘟热病毒Lederle株基因组RNA中扩增出H基因(1 911 bp)和N基因(1 707 bp)片段,序列测定和分析表明与Onderstepoort株、CDV3株等疫苗毒株的同源性在95%以上,而与野外分离株的同源性介于90%～95%;以获得的H,N全基因片段为模板,分别扩增H基因近3′端996 bp的基因片段以及N基因中间高度保守区562 bp的基因片段,经克隆测序后分别插入原核表达载体pET-32a中进行表达,结果显示H片段和N片段分别表达大小约为57 kD和37 kD的融合蛋白,Western blotting检测结果显示,表达蛋白均可与CDV抗血清发生阳性反应,提示原核表达产物具有与CDV抗血清结合的免疫反应性。     

应用PCR方法检测鸡传染性贫血病毒

根据鸡传染性贫血病毒(CIAV)基因组序列，设计一对引物扩增基因组上nt358～nt1042之间684bp DNA片段。在CIAV感染MDCC-MSBl细胞系中提取核酸为模板可扩增出相应DNA片段，且以感染细胞核酸为模板反应敏感性可达1fg，而以其他病原核酸为模板扩增结果均为阴性。应用该PCR方法对实验感染鸡肝脏、脾脏、胸腺、肾脏、法氏囊、骨髓、白细胞、泄殖腔棉拭子等不同样品进行检测，均可扩增出相应DNA片段。证明我们建立的PCR方法敏感性特异性强，可用于临床感染不同组织CIAV的检测。     

氨苄青霉素单抗鉴定与酶联免疫检测方法的初步研究

利用碳化二亚胺(EDC)法将氨苄青霉素(AMP)与匙孔嘁血蓝蛋白(m cKLH)偶联制备免疫原免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,建立分泌氨苄青霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞染色体数目为97~104条,3D12株亚型为IgG2 a,用其制备的腹水ELISA效价达到2×106。亲和常数为3×10-10mol/L,抗体相对分子质量为1.54×105,与其他抗生素的交叉反应率小于0.01%。采用间接竞争ELISA方法建立检测AMP的标准曲线,在0.5~100 ng/mL范围内呈线形相关,回归方程为Y=0.056 9X+0.130 8,相关指数R2=0.994 8,以10%抑制率对应的浓度计算,该方法对AMP的检测限为0.3 ng/mL,对市售消毒纯牛奶模拟样品最低检测限为0.4 ng/mL。     

抗菌肽的研究进展（上）——基本特性及其活性影响因素

抗茵肽(antlbacterial peptide)是生物细胞特定基因编码、经特定外界条件诱导产生的一类多肽。具有分子量小、热稳定、杀菌范围广、作用机制独特等特点。更为重要的是，抗菌肽对真核细胞几乎没有作用，只作用于原核细胞和发生病变的真核细胞。这可能的原因是由于高等动物细胞膜中的胆固醇阻碍抗菌肽的疏水面插入磷脂双分子层：也可能是由于微生物与高等动物细胞膜的膜外结构的区别。     

蛋鸡大肠杆菌病的诊治

北京市通州区某蛋鸡场的部分产蛋鸡 30 0日龄时突然出现以一侧眼睛失明、头面部肿胀、拉绿色稀便、低发病率、高死亡率为主要特征的疾病。经细菌培养、生化鉴定和回鸡试验证明该病是由 O119血清型大肠杆菌引起。1　发病情况和大体病变发病鸡场共饲养 3批不同日龄的海赛克斯产蛋鸡群、鸡群的日龄分别为 1 60、30 0、450天左右 ,每批2 0 0 0只左右。 2 0 0 0年 1月初 ,30 0日龄左右的鸡群开始陆续发病 ,发病鸡的临床表现为病鸡头面部肿胀 ,眼睑肿胀 ,眼睛失明 ,拉绿色稀便 ,采食量降低。发病鸡发病率、死亡率逐渐增高 ,发病后第 4天 ,死亡率…     

生长抑素卵黄抗体对北京油鸡血中胰岛素样生长因子-Ⅰ和甲状腺激素水平的影响

选用1日龄北京油鸡60只,随机各半分为试验组和对照组。试验组自7日龄起,每10 d自颈部皮下注射 生长抑素卵黄抗体(SS-IgY)制剂1mL;对照组做生理盐水平行处理。采用RIA法、双抗法测定不同生长阶段鸡只血 中胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ),甲状腺激素(T3和T4)浓度,结果为:与对照组相比,试验组鸡只血中IGF-Ⅰ和T4 浓度极显著增高(P<0.01),血中T3浓度无显著差异。试验中,血中IGF-Ⅰ水平的动态变化与SS-IgY促进鸡只周增 重表现出的促生长效率曲线变化相似,两者间有较强相关(R=0.87)。上述结果表明,SS-IgY能有效提升北京油鸡血 中IGF-Ⅰ和T4水平,并因此导致试验组鸡只增重较快。     

胸膜肺炎放线杆菌ApxIA毒素蛋白免疫原性分析

为鉴定胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）ApxIA毒素蛋白N端疏水区和C端Ca^2＋结合区的免疫原性，参照apxIA基因序列（D16582）设计4条引物，用于扩增APP血清10型参考菌株（D13039）基因组DNA中长约3．2kb的apxIA基因及其N端（1．4kb）和C端（1．8kb）基因片段，经克隆测序后分别插入原核表达载体pET-32a中进行表达，表达的融合蛋白大小分别约为125Ku、65Ku和80Ku。表达产物免疫小鼠后的攻毒保护试验结果显示，ApxIA表达蛋白对APP血清10型（D13039）攻毒可提供完全保护，而对APP血清1型（4074）攻毒仅能提供部分保护，与提纯的Apx1毒素蛋白免疫保护效果相当；ApxIA-N端表达蛋白免疫保护活性显著高于ApxIA-C端表达蛋白，提示ApxIA蛋白免疫活性位点多位于N端，在Apx1毒素蛋白的保护性抗原活性中发挥更重要作用。