杜仲愈伤组织诱导和植株再生体系的建立

【目的】研究在BA、NAA、IBA、2,4-D等激素作用下,杜仲愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽及丛生芽诱导生根各阶段的最佳培养基配方,建立杜仲植株再生体系,为杜仲转基因研究提供基础材料。【方法】以杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段为外植体,使用BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行杜仲愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽诱导生根培养基的最佳配方,建立杜仲植株的再生体系。【结果】杜仲愈伤组织诱导的培养基分别为:成熟胚MS+BA 2.0mg/L+NAA 2.5mg/L,诱导率77.8%;幼嫩胚MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率88.9%;叶片MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率100%;茎段MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为100%。愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L,不定芽诱导率为88.9%,增殖系数为3±1;杜仲在1/4MS的基本培养基中生根最好,生根率达80%,激素的存在反而会抑制生根。【结论】杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段均可通过愈伤组织途径诱导不定芽的形成,并诱导生根,建立杜仲愈伤组织再生体系,但不定芽的增殖系数较低。     

黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的组织培养快速繁殖

【目的】建立黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的组织培养快速繁殖体系。【方法】以黄芩的幼茎、幼叶及叶柄为外植体,在MS培养基上添加不同质量浓度的6-BA、2,4-D与NAA诱导愈伤组织及再生芽;在1/2 MS培养基上添加IAA、IBA或NAA激素,单独或者组合使用,诱导黄芩试管苗生根。【结果】幼叶和叶柄容易褐化死亡,而幼茎显示很好的脱分化和再分化效果;BA与NAA组合可以诱导幼茎外植体脱分化与再分化,而BA与2,4-D组合只能诱导愈伤组织发生。IAA诱导生根率最高,但是茎基部会形成愈伤组织,后期无法驯化成活;IBA及NAA均可以诱导根的发生,但是以IBA效果为佳。【结论】幼茎为最佳外植体,MS+BA0.5mg/L+NAA 0.5mg/L为最佳的愈伤组织诱导及再生芽的分化培养基。1/2MS+IBA 0.1mg/L为最佳的试管苗生根培养基,生根率为70.3%。     

半夏再生体系的建立

【目的】优化半夏再生条件,以获得优质半夏种苗.【方法】筛选出适宜的外植体后,使用3种激素2,4-D,KT,IAA利用正交设计法设置9个处理组对半夏愈伤组织进行诱导.选取长势良好,大小均一的半夏愈伤组织接于4种培养基中进行愈伤组织增殖.选取半夏叶柄诱导出的愈伤组织将其接于5种培养基中进行愈伤组织分化,观察不同培养基对半夏愈伤组织生根和出芽的影响,最后进行炼苗与移栽.【结果】在叶柄、叶片及块茎3种外植体中,叶柄是半夏愈伤组织诱导的最佳外植体;最有利于半夏愈伤组织诱导的培养基为MS+0.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L KT+1.0 mg/L IAA;在暗培养条件下,将半夏愈伤组织继代于MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L IAA中生长最快;MS+0.2 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA培养基最有利于半夏愈伤组织的生根和出芽.     

红掌组织培养再生体系的建立研究

[目的]建立红掌的组织培养再生体系。[方法]以红掌幼嫩叶柄为材料,筛选红掌愈伤组织诱导、不定芽分化、生根时的最佳激素配比。[结果]红掌叶柄愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D,此时愈伤组织诱导率可达80.0%;不定芽分化的最佳培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L KT,此时分化率可达96.7%;生根的最佳培养基为MS+1.0mg/L IBA,此时生根率可达86.7%。[结论]为红掌的快速繁殖提供了技术依据。     

豌豆离体再生体系建立及遗传稳定性研究

【目的】提高速豌豆诱伤组织和不定芽的诱导率,建立豌豆高效离体再生体系.【方法】以半无叶型豌豆品种‘陇豌1号’和蔓生型豌豆品种‘S3008’的茎段为外植体,研究不同基因型、培养基激素配比对愈伤组织诱导、分化的影响.【结果】‘陇豌1号’茎段愈伤组织诱导率和分化率较高,分别达到88.7%和76.7%,‘S3008’茎段最高愈伤组织诱导率和分化率分别为86.7%和74.7%.诱导愈伤组织最适培养基是MS+2mg/L TDZ+0.2mg/L 2,4-D;诱导不定芽形成的最适培养基为MS+2mg/L TDZ+1mg/L 6-BA,平均不定芽数为4.3;在不定芽诱导生根培养基(1/2MS+20g/L蔗糖+1.5mg/L ABT)上,生根率为74.0%,移栽后再生植株成活率达86.0%.两个豌豆品种都能得到再生植株且繁殖系数高.【结论】本培养体系适宜豌豆离体再生.通过染色体分析,再生植株染色体数和供体亲本材料一致,初步表明再生植株遗传稳定.     

翠绿1号假俭草种子愈伤诱导和植株再生

本研究以优良品系翠绿1号假俭草的种子为外植体,成功地建立了再生体系.基本培养基为MS,在添加了2,4-D 1.5 mg/L的培养基上最适于种子愈伤诱导,愈伤诱导率为99%,黄色颗粒愈伤诱导率为4.8%,愈伤最佳继代培养基为MS+2,4-D 1.5 mg/L;在最佳分化培养基MS+ KT 2.5 mg/L上,黄色愈伤分化率为99%,芽最佳生长培养基为MS+ BA2.0 mg/L+NAA0.7 mg/L;试管苗最佳生根培养基为MS+NAA0.6 mg/L,生根率达到99%;生根的试管苗移栽到装有田园土的土盆中,其存活率达到88%.     

婆婆纳组织培养再生体系的建立

以婆婆纳(Veronica didymaTenore)的叶片、茎节、茎段、顶芽为外植体,接种在附加2,4-D、6-BA、NAA等不同质量浓度和组合的培养基中进行离体培养,并比较了不同培养基上不同外植体的诱导率。结果表明,诱导愈伤组织的最佳外植体是叶片,诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D0.01 mg/L+6-BA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L,愈伤组织诱导率为100%。诱导愈伤组织分化的最适培养基为MS+2,4-D0.01 mg/L+6-BA0.75mg/L+NAA1.75 mg/L,分化率为90%。诱导生根的培养基为l/2MS+NAA0.2 mg/L,生根率为90%。     

马齿苋的组织培养和植株再生

用马齿苋的幼嫩叶片和茎段建立了马齿苋组织培养及植株再生系统。最适愈伤组织诱导培养基为MS 6-BA 0.5 mg/L 2,4-D 0.5 mg/L或2,4-D 1.0 mg/L,愈伤组织诱导率均可达100%。将生长良好的愈伤组织块转入分化培养基中以诱导不定芽的分化,其最适分化培养基为MS 6-BA 4.0 mg/L NAA 0.2 mg/L,分化率达到87.5%。再生苗在1/2MS IBA 2.0 mg/L的培养基上诱导生根,经过15d培养,100%生根成苗。     

南方型紫花苜蓿Millennium组织培养及其再生

以南方型紫花苜蓿Millennium种子发育5~7 d无菌苗的子叶、下胚轴为外植体,对紫花苜蓿愈伤组织诱导和植株再生进行了研究。结果表明,在愈伤组织诱导中,下胚轴为最佳外植体材料,出愈率随着2,4-D质量浓度的增加呈明显的升高趋势,最佳愈伤组织诱导培养基为2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,诱导率达到100%。紫花苜蓿诱导最佳愈伤组织的分化培养基为MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L,下胚轴愈伤组织分化率达到58%,子叶愈伤组织分化率达到40%。将苗切下转接到1/2 MS+20 g/L蔗糖质量浓度时,培养6 d即可诱导生根,诱导生根率达到100%,完成植株再生仅需60~70 d。成功地建立了南方型Millenni-um紫花苜蓿子叶和下胚轴的离体培养再生途径,并获得了再生植株。     

加拿大披碱草×肥披碱草杂种F1幼穗组培再生体系的研究

[目的]筛选适宜加拿大披碱草×肥披碱草种间杂种F1愈伤组织诱导、幼苗分化和生根的最适培养基。[方法]以加拿大披碱草×肥披碱草种间杂种F1幼穗为外植体,以MS为基本培养基,添加不同的激素和营养物,探讨了2,4-D、6-BA、NAA与IBA4种激素不同浓度对杂种F1愈伤组织的诱导、分化及生根的影响,建立了组培再生体系。[结果]激素2,4-D对杂种F1愈伤组织诱导起决定性作用。适宜杂种F1愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+CH300.0 mg/L+2,4-D2.0 mg/L,诱导率达100%;适宜幼苗分化的最佳培养基为:MS+CH300.0 mg/L+6-BA2.0 mg/L+NAA0.4 mg/L,分化率达73.3%;适宜生根的最佳培养基为:MS+CH300.0 mg/L+IBA0.5 mg/L,生根率达86.7%;组培苗经过炼苗移栽得到了完整植株。[结论]杂种F1组培再生体系的建立为新种质的保存奠定了基础。2,4-D适宜浓度为2.0 mg/L。     

蓼蓝组织培养再生体系的建立

[目的]建立蓼蓝组织培养再生体系。[方法]以半野生蓼蓝种子、幼叶和茎段为外植体,探讨不同浓度植物激素配比的培养基对其愈伤组织诱导、继代、分化及生根的影响。[结果]以蓼蓝茎段为外植体进行组培是适宜的;诱导和继代最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L,平均诱导率可达73.33%;分化最佳培养基为6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,平均分化率可达51.67%;生根适宜的培养基为1/2 MS+NAA 0.5 mg/L,生根后移栽成活率达100%。[结论]该研究为优良蓼蓝快速繁殖提供了新的途径,并为其种质资源的保存与利用提供了依据。     

柳枝稷的组织培养技术研究

[目的]探索柳枝稷的不同组培条件,优化其诱导和分化培养基。[方法]以柳枝稷幼穗为外植体进行组织培养获得组培苗,建立相应的植株再生系统。[结果]愈伤组织诱导培养基为MS＋5．00mg／L2,4-D＋0．15mg／L6．BA＋3．00％蔗糖＋0．75％琼脂;继代与增殖培养基为MS＋4．00mg／L2,4-D＋3．00％蔗糖＋0．75％琼脂;分化培养基为MS＋0．2mg／L KT＋3．00％蔗糖＋0．75％琼脂;生根培养基为1／2MS＋0．80％蔗糖＋0．70％琼脂。愈伤组织诱导和继代培养阶段培养温度为24℃,在分化和生根培养阶段培养温度为28℃。幼穗外植体的出愈率达95％,愈伤组织增殖率在800％-1000％以上,分化率达80％以上,生根率在98％以上。经炼苗后,获得的组培苗的移栽成活率达95％以上。[结论]采用优化激素搭配的培养基可得到高效的诱导率、分化率和生根率。     

金花茶离体培养体系的建立

[目的]通过愈伤组织发生途径建立金花茶(Camellia nitidissima)的离体培养体系,为金花茶的快速繁殖和种质资源保存提供理论和技术支持.[方法]在金花茶种子萌发阶段以沙子替代培养基进行无菌萌发,以其成熟植株的茎尖、茎段和叶片为外植体,在WPM培养基上添加不同种类和浓度激素进行愈伤组织诱导、愈伤组织分化及生根培养.[结果]金花茶成熟种子去壳、去皮、取出胚乳后在添加无菌液的湿润沙子中培养,平均萌发率为95.40%,平均萌发时间为19.10 d;WPM+2.00 mg/L 6-BA+0.50 mg/L 2,4-D是金花茶子叶、胚轴愈伤组织诱导的适宜培养基;WPM+2.00 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA是愈伤组织分化的适宜培养基,分化系数为4.56;1/2WPM+0.50~1.00 mg/L IBA是金花茶生根的适宜培养基,生根率为45.40%~54.00%,生根时间为19.80~20.90 d.[结论]金花茶离体培养可通过胚轴诱导产生愈伤组织进而分化成完整植株.     

灯盏花组培快繁与植株再生

[目的]建立较为系统的灯盏花组培体系,培育、壮大和发展灯盏花这一独具特色和优势的产业。[方法]以灯盏花（Erigeron breviscapus）的叶片为外植体,用不同浓度的激素6-BA、2,4-D、KT和NAA对其进行愈伤组织的诱导和再生植株的研究。[结果]诱导愈伤组织最佳的培养基是MS＋KT0．5mg／L＋2,4-D10mg／L和MS＋2,4-D0．5mg／L＋6-BA0．5mg／L,诱导率为100％;二者相比,前者长出的愈伤组织较为紧密,而后者松散性好;MS＋6-BA0．5mg／L＋10％香蕉汁是诱导芽最佳的培养基,达87％;加入0．3mg／L NAA的1／2MS培养基对生根最有利,生根率达83％。[结论]生长素与细胞分裂素的合理配比有利于快速构建灯盏花培养体系。     

虎尾兰组培快繁技术研究

[目的]寻求虎尾兰组培快繁的最佳培养基。[方法]以虎尾兰幼叶为外植体,采用2种不同浓度的消毒剂进行处理,探讨外植体最佳消毒方法。以MS为基本培养基,研究添加不同浓度的2,4-D、6-BA和NAA对虎尾兰幼叶愈伤组织诱导、芽分化诱导及生根的影响,确定虎尾兰组培快繁的最佳培养基。[结果]虎尾兰外植体最佳消毒方式为70%酒精10 s＋0.1%升汞5 min,外植体污染率为7.7%;虎尾兰愈伤组织诱导最适宜培养基为MS＋0.25 mg/L 2,4-D,出愈率为100%;诱导芽分化的最适宜培养基为MS＋0.5 mg/L 2,4-D＋2.0 mg/L 6-BA,分化率为76%;根培养的最适宜培养基为MS＋4.0 mg/L NAA,生根率达到100%,试管苗成活率达95%。[结论]该研究为虎尾兰组培快繁的大规模工厂化生产提供了科学依据。     

蓬莪术的离体快繁研究

[目的]探索蓬莪术的离体快繁技术。[方法]以蓬莪术嫩叶、块茎和根为外植体,接种在以MS为基本培养基,外加不同浓度激素组合的培养基上进行愈伤组织诱导、增殖和分化培养;以幼芽为外植体,进行幼芽的增殖、生根培养和移栽等。[结果]诱导蓬莪术叶、块茎和根的愈伤组织形成的最适培养基为MS＋2,4-D1.0 mg/L＋6-BA0.5～1.0 mg/L＋NAA0.3 mg/L,其中蓬莪术叶诱导率最高,达96%;愈伤组织增殖和分化培养还有待进一步研究。幼芽最适增殖培养基为MS＋6-BA3.0 mg/L＋NAA0.1 mg/L＋KT1.0 mg/L,其增殖倍数达3.5以上;而生根培养基以1/2 MS＋NAA1.0 mg/L＋6-BA0.5 mg/L为最佳,生根率达100%,其移栽成活率达85%以上。[结论]该研究结果为蓬莪术的快速繁殖及工厂化生产奠定了基础。     

红姬凤梨离体培养植株再生关键技术研究

[目的]建立红姬凤梨组织培养快繁体系。[方法]以MS培养基为基本培养基添加植物生长调节剂,对红姬凤梨叶片进行愈伤组织诱导,并进行芽分化、芽的继代增殖和生根培养。[结果]叶鞘愈伤组织诱导以MS＋2,4-D0．5mg／L＋BA3．0mg／L＋KT2．0mg／L培养基最好、愈伤组织诱导率和分化率分别达82．4％和40．2％;丛生芽诱导以MS＋2,4-D0．2MG/L＋NAA0．05mg／L＋BA3．0mg／L＋KT2．0mg／L培养基增殖效果最佳,增殖倍数迭9．72;生根诱导以1／2MS＋NAA3．0mg/L培养基诱导生根效果最好,平均每株生根12．12条。[结论]采用组织培养可有效去除病毒,增加繁殖系数。     

红掌工厂化育苗关键技术研究

[目的]研究红掌工厂化育苗的关键技术。[方法]以红掌盆花和切花品种的叶片、叶柄、花苞片和花苞柱头为外植体,进行组培快速繁殖技术研究,探讨外植体的选择和消毒条件以及不同培养基对红掌愈伤组织的诱导、增殖和生根影响。[结果]叶柄为最佳外植体,愈伤诱导率最高,达78.3%;外植体采用0.1%HgCl2消毒8min的效果最好;粉冠军和MIDORI的最佳愈伤组织诱导培养基为1/2MS＋6-BA1.50mg/L＋KT1.00mg/L＋2,4-D0.10mg/L;最佳愈伤组织继代培养基为MS＋6-BA0.50mg/L＋KT0.50mg/L＋NAA0.10mg/L,添加10%的椰子汁或香蕉浆有利于增殖和丛芽生长,增殖率最高达2.83倍;最佳生根培养基为1/2MS＋NAA0.10mg/L＋IAA0.10mg/L,生根率达100%。[结论]该结果为红掌工厂化育苗体系的建立奠定了基础,对确保红掌产业的发展具有重要意义。