糖尿病足患者铜绿假单胞菌的耐药性及产超广谱β-内酰胺酶检测

目的 探讨感染糖尿病足(DF)患者铜绿假单胞菌的耐药情况和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况.方法 采用全自动微生物分析仪鉴定铜绿假单胞菌,琼脂稀释法检测抗菌药物敏感性,双纸片协同法检测铜绿假单胞菌产ESBLs情况,分析浅部与深部溃疡的铜绿假单胞菌产ESBLs及耐药性.结果 80株铜绿假单胞菌中,33株(41.25％)是多重耐药菌,30株(37.50％)是产ESBLs,在产ESBLs铜绿假单胞菌中90.0％(27/30)为多重耐药菌.头孢他啶、环丙沙星和阿奇霉素在多重耐药组的耐药率明显高于耐药组(P＜0.05);头孢他啶、环丙沙星和复方新诺明在ESBLs阳性组的耐药率明显高于ESBLs阴性组(P＜0.05);深部溃疡的多重耐药菌比率、产ESBLs比率和既是产ESBLs菌又是多重耐药菌比率均明显高于浅部溃疡(P＜0.05).结论 感染DF患者铜绿假单胞菌的耐药形势不容乐观,其中产ESBLs和来源于深部溃疡铜绿假单胞菌的耐药形势更加严峻.     

基层医院外科病房610例患者感染细菌分析

目的了解基层医院外科不同性质疾病感染病原菌的不同及耐药性差异,为临床用药治疗提供依据.方法常规分离、培养鉴定细菌,K-B法进行药敏试验,分析其临床分布及耐药性.结果 610份阳性标本中,分离率较高的常见菌主要为：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌等.其中内脏器官感染组和软组织感染组分离...     

铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶LysYH6的表达与活性

以耐药性铜绿假单胞菌为宿主菌分离并筛选出1株烈性噬菌体YH6,根据电镜下的形态特征,YH6为短尾噬菌体家族的成员。通过对YH6的全基因组序列测定和分析,确定了其裂解酶基因,并通过原核表达获得了噬菌体的裂解酶Lys YH6。菌落计数及浊度下降法表明:该裂解酶在EDTA(25 mmol/L)存在的条件下对铜绿假单胞菌表现出了显著的抑菌活性。具有抑菌活性裂解酶Lys YH6的获得为治疗和预防耐药性铜绿假单胞菌引起的感染开辟了新思路。     

水貂肺炎二联苗制备及免疫效果评价

目前水貂肺炎主要以铜绿假单胞菌、克雷伯氏菌为主,常于水貂换毛期时暴发性流行,且多呈混合感染。本文针对水貂肺炎面临的突出问题,根据国内外肺炎疫苗的研究进展与市面疫苗对水貂的保护情况,探索克雷伯荚膜多糖作为佐剂及其与铜绿假单胞菌制备二联苗对水貂保护。通过免疫小鼠产生抗体水平与特异性分泌细胞评价结果表明,荚膜多糖对铜绿假单胞菌抗原具有良好佐剂效用,但效果低于氢氧化铝佐剂。荚膜多糖是肺炎克雷伯良好抗原,能产生较高抗体。铜绿假单胞菌菌体疫苗与铜绿假单胞菌上清液疫苗抗体水平无显著差异。     

重组铜绿假单胞菌外毒素A的原核表达和多克隆抗体制备及免疫保护功能分析

为探索铜绿假单胞菌ETA蛋白的免疫保护功能,采用分子克隆方法获得铜绿假单胞菌ETA表达菌株;利用切胶纯化获得ETA蛋白并免疫小鼠,制备ETA蛋白多克隆抗体;用ELISA方法,检测出ETA抗血清滴度达1∶8 000;蛋白质印迹分析结果表明,抗血清具有很好的特异性;小鼠免疫保护试验结果表明,ETA对铜绿假单胞菌感染的保护率达50%,显著高于对照组的免疫保护率。用DNAman软件对ETA序列同源性进行分析,发现革兰氏阴性菌的同源性高于革兰氏阳性菌,铜绿假单胞菌种间的同源性高于其他种类细菌的同源性;用MEGA软件对ETA的进化分析结果表明,不同血清型铜绿假单胞菌的亲缘关系高于其他细菌,据此可推测ETA免疫动物产生的特异性抗体可能为不同种类铜绿假单胞菌的感染提供交叉免疫保护。     

景天三七对多重耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用

目的研究景天三七醇提物和水提物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抗菌作用。方法采用试管稀释法测定景天三七醇提物和水提物对20株临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果景天三七醇提物和水提物对20株临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌有不同程度的抗菌作用,醇提物对铜绿假单胞菌的MIC50为0.125g.mL-1,水提物对铜绿假单胞菌的MIC50大于0.5g.mL-1。结论景天三七醇提物体外对铜绿假单胞菌有较强的抗菌作用。     

下呼吸道铜绿假单胞菌感染细胞的耐药性监测

铜绿假单胞菌已成为下呼吸道感染的重要病原菌之一,且耐药性逐年增高,已引起人们的重视。本文对下呼吸道感染患者痰培养中分离出的33株铜绿假单胞菌进行耐药性分析。1　材料与方法1.1　病原菌分离与检测选择本院1997年7月至1999年7月住院确诊为下呼吸道感染的患者329例,所有患者住院后第2天早晨(未使用抗生素),用生理盐水漱口,用力咳嗽,从呼吸道深部咳出新鲜痰于无菌痰杯,即送实验室检查,痰直接涂片光镜检查评价痰标本质量,合格痰标本接种培养基,置37℃温箱孵育24～48h,阳性标本进行微生物鉴定。1.2　病原菌药敏试验用纸片扩散法,按照美国临…     

貂源铜绿假单胞菌耐药性及生物学特性

为了解貂源铜绿假单胞菌流行株基本特性,对分离的20株铜绿假单胞菌进行药物敏感性试验、血清型鉴定、ToxA基因检测、强毒株筛选及绝对致死量(LD_(100))测定。结果表明,铜绿假单胞菌分离株耐药现象比较严重,对氨苄西林、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻吩、头孢噻肟、头孢西丁、头孢唑林和四环素不敏感,对妥布霉素敏感率为95%;铜绿假单胞菌分离株的血清型为G型和B型,分别占85%和15%;20株铜绿假单胞菌均能检测出毒素基因ToxA;小鼠致死性试验表明,铜绿假单胞菌分离株之间毒力差异很大,少数菌株如ZHDL9、ZHDL6等均表现出较强的毒力。以菌株ZHDL9为代表株建立小鼠鼻腔感染模型,采用建立的感染模型测定得菌株ZHDL9对小鼠的LD_(100)为5×10~7 cfu。由此可见,分离的20株铜绿假单胞菌对临床常用抗生素耐药严重,对妥布霉素的敏感率为95%,提示该种抗生素可用于临床治疗水貂出血性肺炎,而菌株ZHDL9可作为生物制品研发的候选菌株。     

草鱼铜绿假单胞菌的鉴定及药物敏感性分析

从患病草鱼C tenopharyngodon idella体表病灶上分离到一株优势菌,经分离纯化培养制成细菌悬液,分别以腹腔注射和浸泡两种方式感染草鱼。结果表明：该菌株能感染草鱼,且具较强毒力,腹腔注射0.2mL该菌液（3×109cfu/mL）,可导致受试草鱼100%死亡;创伤浸泡感染（3×108cfu/mL）,死亡率也达100%,受感染鱼出现与自然感染相似的类似赤皮病症状。对该病菌进行形态特征观察和主要理化特性分析,初步鉴定为铜绿假单胞菌Pseudom onas aeruginosa。进一步对该菌进行分子鉴定,共选用16S rRNA、RNA聚合酶β亚单位（rpoB）和促旋酶亚单位蛋白（gyrB）3个基因进行鉴定分析。序列克隆与BLAST分析结果显示,这3个基因均与GenBank上登录的铜绿假单胞菌的相应序列具有很高的同源性,16S rRNA、rpoB和gyrB基因与已知铜绿假单胞菌相应序列的同源性分别在99%、98%和93%以上。综合生理生化与分子鉴定结果,可判定所分离的菌株为铜绿假单胞菌。药敏试验结果显示：该菌对阿米卡星、菌必治、氟哌酸和妥布霉素等11种药物高度敏感,对链霉素和庆大霉素中度敏感,对罗红霉素、红霉素、四环素、苯唑青霉素、新霉素和头孢氨苄等16种药物具有耐药性。     

七彩山鸡养殖场铜绿假单胞菌的耐药性、多位点序列分型及遗传进化分析

【目的】探究广东省七彩山鸡养殖场中铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa的流行特点、耐药性、多位点序列分型(Multi-locus sequence typing,MLST)及遗传进化背景,为临床合理用药提供参考。【方法】从广东省3个规模化七彩山鸡养殖场收集孵化死胚及周围环境样本进行铜绿假单胞菌的分离鉴定,采用K-B纸片扩散法测试其对22种抗菌药物的敏感性,利用MLST分析铜绿假单胞菌分离株的分子流行特点。将各ST型的7个管家基因序列按顺序拼接,用MEGA7软件对拼接好的序列进行遗传进化分析。【结果】在采集的514份样本(死胚样本405份、环境样本109份)中共分离到铜绿假单胞菌145株(分离率28.2%),其中,24株来源于环境样本(分离率22.0%,24/109),121株来源于死胚样本(分离率29.9%,121/405)。145株铜绿假单胞菌除对氨苄西林、卡那霉素和萘啶酸天然耐药外,对复方新诺明、氯霉素和四环素的耐药性较强,耐药率分别为100%、80.0%和77.2%,其次为头孢噻肟(耐药率23.4%)。除天然耐药外,多重耐药的铜绿假单胞菌占比达73.1%(10...     

慢性阻塞性肺疾病急性加重患者痰病原菌分布及耐药性分析

目的 分析本院慢性阻塞性肺疾病急性加重期（acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD）患者痰菌分布及耐药特点,更好的指导早期临床用药。方法 采集2014年8月到2016年7月本院呼吸病房的613例行痰培养的AECOPD患者的临床资料及痰培养结果,分析其痰菌分布及耐药特点。结果 送检痰标本共检出病菌406株,其中革兰阴性菌、真菌、革兰阳性菌各247株（60.8%）、103株（25.4%）、56株（13.8%）,常见的病菌包括铜绿假单胞菌（17.0%）、白假丝酵母菌（12.8%）、金黄色葡萄球菌（9.9%）、鲍氏/溶血不动杆菌（8.1%）、肺炎克雷伯菌（7.9%）、大肠埃希氏菌（6.9%）、嗜麦芽窄食单胞菌（6.9%）。大肠埃希菌及肺炎克雷伯杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）阳性率分别为71.4%和34.4%,二者对大部分抗生素有不同程度耐药,铜绿假单胞菌、鲍氏/溶血不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌耐药率均较高。结论 革兰阴性杆菌为AECOPD患者痰培养的主要菌群,总体耐药性高,结合当地病菌分布及耐药特点选用抗菌药物尤为重要。     

生姜活性提取物对铜绿假单胞菌的抑制机理研究

[目的]探究生姜的活性提取物对铜绿假单胞菌抑制作用的机理。[方法]采用有机溶剂浸提法提取生姜中的活性物质,探讨生姜在不同条件下的活性提取物对铜绿假单胞菌的抑制效果及抑菌机理。[结果]生姜提取物对铜绿假单胞菌有明显的抑制作用,且生姜提取物的稳定性较好,不同因素处理下仍具有较强的抑菌性。通过对微生物的生长曲线和电导率的测定,进一步证明生姜的活性提取物抑制了铜绿假单胞菌的生长。[结论]生姜的活性提取物对铜绿假单胞菌有较好的抑制作用。     

AcrAB Efflux Pump in Fluoroquinolone Resistant Salmonella gallinarum Induced by Ciprofloxacin Selective Pressure

Salmonella gallinarum has shown multiple drug resistance (MDR),especially high level fluoroquinolone (FQ) resistance in recent years.To determine whether the active efflux system was responsible for high-level FQ resistance,this research studied AcrAB efflux pump in Salmonella gallinarum on molecular level.The resistant strains were induced by standard strain C79-13 with ciprofloxacin in vitro.With carbonylcyanide-p-chlorophenyl hydrazone (CCCP) as an energy inhibitor,efflux inhibition test initially showed the potential impact of efflux pump on drug resistance.Sequence analysis of acrA gene indicated that gene mutation of AcrAB efflux pump was not definitely associated with MDR and drug resistance level of Salmonella gallinarum.Detected by competitive RT-PCR,the mRNA expression of acrA and acrB genes in the resistant strains significantly increased (p0.01) compared with that of the control strain C79-13.The mRNA expression level of acrB gene (increased from 1.6-to 2.9-folds) was consistent with that of acrA gene (increased from 1.6-to 2.8-folds),which increased with the drug resistance level.However,gene mutation of acrA gene showed no correlation with its mRNA expression level,indicating that gene mutation did not affect the expression of AcrAB pump itself.The results suggested that the overexpression rather than the gene mutation of AcrAB efflux pump was an important factor causing the high level drug resistance of Salmonella gallinarum.     

Specific lipopolysaccharide found in cystic fibrosis airway Pseudomonas aeruginosa

Cystic fibrosis (CF) patients develop chronic airway infections with Pseudomonas aeruginosa (PA). Pseudomonas aeruginosa synthesized lipopolysaccharide (LPS) with a variety of penta- and hexa-acylated lipid A structures under different environmental conditions. CF patient PA synthesized LPS with specific lipid A structures indicating unique recognition of the CF airway environment. CF-specific lipid A forms containing palmitate and aminoarabinose were associated with resistance to cationic antimicrobial peptides and increased inflammatory responses, indicating that they are likely to be involved in airway disease.     

养殖鱼塘中铜绿假单胞菌致病性及耐药相关基因的研究

旨在分析养殖鱼塘水体中铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)分离菌株的致病性、耐药性及其可能机制,为保障水产食品的安全提供科学依据。使用美国临床与实验室标准研究所的标准纸片扩散法,以及聚合酶链反应技术对PA分离菌株进行了抗菌素耐药性,以及毒性、固有和获得性耐药相关基因的检测与分析。结果显示,受试PA分离菌株的50%为exoS+/exoU-侵染型分子型,无临床分离菌株的exoS-/exoU+的细胞毒型分子型。PA菌株对6大类9种抗菌素的耐药性存在明显差异,其中甲氧胺苄嘧啶和利福平的耐药率最高为100%,其次是氨苄西林、卡那霉素和四环素,分别为90%、90%和80%,庆大霉素的耐药率最低为10%。多药抗性PA菌株均含有MexAB-OprM、MexXY-OprM和MexVW-OprM外排泵系统,其中20%菌株检测为β-内酰胺酶基因(ampC)阳性;而MexEF-OprN、MexJK-OprM、MexCD-OprJ和MexGHI-OpmD外排泵基因全部或部分缺失。此外,在PA菌株中均未检测到Ⅰ～Ⅲ类整合子的整合酶基因(comINT),但是整合接合元件(ICEs)保守模块功能基因(ICEint、soj、pilS2、pilD)均检测为阳性,提示PA菌株携带的ICEs具有潜在的转移活性,为进一步探讨PA多药抗性的散播奠定了基础。     

犬皮肤化脓性病灶中主要致病菌的调查及药物敏感实验

采集了30份患皮肤化脓病的犬的化脓灶分泌物进行细菌的分离培养和药敏实验。结果分离出溶血性链球菌11株、金黄色葡萄球菌16株、化脓性棒状杆菌1株和绿脓杆菌5株。药敏实验表明:链球菌的敏感药物为卡那霉素等,金黄色葡萄球菌的敏感药物为庆大霉素等,化脓性棒状杆菌的敏感药物为呋喃妥因等,绿脓杆菌的敏感药物为链霉素等。     

High frequency of hypermutable Pseudomonas aeruginosa in cystic fibrosis lung infection

The lungs of cystic fibrosis (CF) patients are chronically infected for years by one or a few lineages of Pseudomonas aeruginosa. These bacterial populations adapt to the highly compartmentalized and anatomically deteriorating lung environment of CF patients, as well as to the challenges of the immune defenses and antibiotic therapy. These selective conditions are precisely those that recent theoretical studies predict for the evolution of mechanisms that augment the rate of variation. Determination of spontaneous mutation rates in 128 P. aeruginosa isolates from 30 CF patients revealed that 36% of the patients were colonized by a hypermutable (mutator) strain that persisted for years in most patients. Mutator strains were not found in 75 non-CF patients acutely infected with P. aeruginosa. This investigation also reveals a link between high mutation rates in vivo and the evolution of antibiotic resistance.     

铜绿假单胞菌呼吸机相关肺炎的临床特点与防治对策

目的：探讨铜绿假单胞菌(PA)呼吸机相关肺炎(VAP)的临床特点与防治对策。方法：对36例由PA所致VAP的患者进行回顾性分析。结果：PA—VAP的临床特点与其它肺炎相似，但病情较重，并发症多，易发生多器官功能衰竭(MSOF)．病死率高。PA对多种抗生素产生耐药，而对泰能、舒普深、头孢他啶仍有较高的敏感性。治疗好转率52．8％，病死率41．7％。结论：PA耐药菌株多，合理使用抗生素及加强各环节的严格消毒，对PA—VAP的防治十分有益。     

致病菌分离及其耐药性和敏感性试验

本试验对兰州大学第一医院从2006年1月到2007年12月期间临床患者所送检的全部咽拭子、痰和血液进行细菌分离培养,并用常用抗菌素进行了耐药率和敏感率试验.结果显示:从咽拭子中分离出了49种171株以流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌和大肠埃希氏菌为主的细菌;从痰中分离出了123种2406株以大肠埃希氏菌、流感嗜血杆菌和鲍曼不动杆菌为主的细菌;从血液中分离出了56种211株以大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌为主的细菌.咽拭子、痰和血液中分离出的细菌都以杆菌为主,球菌和真菌次之,其中,杆菌、球菌和真菌分别占检出细菌总数的55.1%~68.6%,8.6%~26.4%和17.5%~22.8%.耐药率最高的药物为红霉素、青霉素和复方新诺明;敏感率最高的药物是万古霉素和亚胺培南.     

猪源绿脓杆菌的分离鉴定及16S rRNA基因同源性分析

从解剖病变为心包炎、纤维素性肺炎、肺脓肿的病死仔猪体内分离到1株细菌,通过形态特征观察、生化试验,将分离菌株初步鉴定为绿脓杆菌。动物致病性试验结果显示,分离菌株对小鼠具有很强的致病性。药敏试验结果显示,分离菌株对氧氟沙星、恩诺沙星高度敏感,对头孢噻肟、庆大霉素中度敏感,对青霉素、氟苯尼考、氨苄西林、阿莫西林、强力霉素、卡那霉素等耐药。将分离菌株的16S rRNA基因序列与Gen Bank中发表的绿脓杆菌序列进行Blast比对,结果表明,分离菌株与绿脓杆菌不同菌株的同源性高达99%以上,进一步确定分离菌株为绿脓杆菌。基于16S rRNA基因序列,使用MEGA 5.05软件,构建系统进化树,结果表明,分离菌株与病人痰液和腹泻婴儿分离菌株的同源性最高,与未加工水果分离菌株同源性最低。