水貂肺炎二联苗制备及免疫效果评价

目前水貂肺炎主要以铜绿假单胞菌、克雷伯氏菌为主,常于水貂换毛期时暴发性流行,且多呈混合感染。本文针对水貂肺炎面临的突出问题,根据国内外肺炎疫苗的研究进展与市面疫苗对水貂的保护情况,探索克雷伯荚膜多糖作为佐剂及其与铜绿假单胞菌制备二联苗对水貂保护。通过免疫小鼠产生抗体水平与特异性分泌细胞评价结果表明,荚膜多糖对铜绿假单胞菌抗原具有良好佐剂效用,但效果低于氢氧化铝佐剂。荚膜多糖是肺炎克雷伯良好抗原,能产生较高抗体。铜绿假单胞菌菌体疫苗与铜绿假单胞菌上清液疫苗抗体水平无显著差异。     

重组铜绿假单胞菌外膜蛋白D的原核表达与多克隆抗体制备研究

为获得铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD并研究其分子功能。本研究采用分子克隆构建OprD蛋白重组表达菌株,用正交试验设计方法获得OprD菌株的最优表达条件和培养条件,通过SDS-PAGE切胶的方法纯化OprD蛋白,小鼠免疫制备OprD多克隆抗血清,蛋白质印迹法检测抗血清的特异性。使用DNAMan和MEGA软件对OprD蛋白进行同源性和系统发生分析。结果表明,OprD重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果、OprD蛋白表达与纯化条带大小分别与预测相符。正交试验获得OprD菌株的最优培养条件为:葡萄糖浓度为0,转速230r/min,装液量为50mL;最优表达条件为:菌液OD600=0.8时加入终浓度为0.3mmol/L的异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),37℃诱导12h。SDS-PAGE电泳切胶纯化获得纯度较高的OprD蛋白。蛋白质印迹法证实OprD蛋白抗血清具有较好的特异性。OprD蛋白序列系统发生分析发现,同菌属细菌存在较高的同源性,并且亲缘关系较近的细菌中OprD蛋白可能具有相似的分子功能。     

鱼类致病荧光假单胞菌外膜蛋白LolB多克隆抗体制备、鉴定与免疫活性分析

以荧光假单胞菌的外膜蛋白LolB为研究对象,评价其免疫学功能。生物信息学分析各菌株间LolB的亲缘关系;分子克隆构建LolB蛋白的表达菌株并确定最佳诱导表达条件;SDS-PAGE切胶纯化LolB蛋白并免疫红鲫;Western blotting检测红鲫LolB血清的特异性与效价,ELISA体外模拟红鲫LolB血清与荧光假单胞菌的相互识别作用,免疫因子(ACP、AKP、LZM、IgM)与细胞吞噬作用测定,抗氧化因子(CAT、SOD、MDA、GSH-Px)、炎症因子(IL-1β、TNF-α)表达分析及组织病理学探究LolB蛋白的免疫保护作用。结果显示,LolB在假单胞菌属间同源性和亲缘性更近,LolB抗血清可能提供交叉免疫保护作用。原核表达纯化LolB蛋白,获得最佳诱导表达条件。红鲫LolB抗血清具有较好特异性,效价达1∶200;且抗血清与荧光假单胞菌在体外存在相互识别作用;免疫因子以及细胞吞噬作用均呈上升趋势,表明LolB激活红鲫的非特异性免疫。红鲫免疫LolB蛋白攻毒荧光假单胞菌后,抗氧化因子以及炎症因子呈下降趋势,表明LolB蛋白具有抗氧化和消炎作用;组织病理学切片显示LolB蛋白保护...     

大肠杆菌外膜蛋白F的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析

为获得大肠杆菌外膜蛋白OmpF并对其耐药性功能进行研究,通过分子克隆技术构建OmpF蛋白重组表达菌株,利用正交试验法获得OmpF菌株的最佳培养条件和表达条件,采用SDS-PAGE电泳切胶纯化方法获得OmpF蛋白,免疫小鼠获得OmpF蛋白多克隆抗体,Western blotting方法检测多克隆抗体的特异性,使用DNAMAN 8.0与MEGA 5.0软件对OmpF蛋白进行同源性和系统发生分析。结果显示,PCR扩增获得1 089 bp的ompF基因,成功构建pET-32a-ompF载体,其诱导表达产物分子质量为38 ku,与预期大小一致。正交试验获得OmpF菌株的最佳培养条件为葡萄糖浓度为0,转速为230 r/min,装液量为50 mL;最佳表达条件为诱导时菌液OD_(600)为0.5,IPTG终浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为8 h,温度为28℃。SDS-PAGE切胶纯化获得高纯度的OmpF蛋白后,利用Western blotting证实OmpF蛋白抗血清具有较好的特异性。OmpF蛋白序列系统发生分析发现,OmpF蛋白在不同种类的细菌中具有较高的同源性,OmpF蛋白产生的抗体可能为不同种细菌的感染提供交叉免疫保护作用,并且不同种类细菌中OmpF蛋白可能具有相似的分子功能。     

嗜水气单胞菌外膜蛋白AH6169的生物信息学分析及其原核表达

为嗜水气单胞菌外膜蛋白AH6169亚单位疫苗的研究奠定理论基础,采用生物信息学方法分析了AH6169的理化性质、结构与功能;分子克隆构建AH6169表达菌株,正交试验筛选其最佳诱导表达条件;通过包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化AH6169蛋白;小鼠免疫蛋白制备多克隆抗血清;Western blotting鉴定抗血清特异性与效价;酶联免疫法体外模拟AH6169抗血清与重要水产病原菌的相互识别作用。结果表明,AH6169属跨膜蛋白,无规则卷曲占全序列46.79%,延伸25.49%,α-螺旋22.69%;不同种类的气单胞菌AH6169蛋白保守性较高;成功构建AH6169表达菌株,最佳表达条件为诱导时菌液浓度OD_(600)=0.8,IPTG浓度0.1 mmol·L~(-1),32℃诱导8 h;纯化获得AH6169蛋白,制备的AH6169小鼠抗血清具有较好的特异性,且效价达到1∶1 600;AH6169蛋白抗血清与嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌和溶藻弧菌存在相互识别作用。说明AH6169蛋白有较好的抗原性,AH6169可为不同种类的气单胞菌提供交叉免疫保护作用,并且其细胞表位较为丰富,可能是一种潜在的疫苗候选成分。     

黄连提取物对五种致病菌腹腔感染小鼠血清TNF-α和IL-6含量的影响

考察黄连(Coptis chinensis Franch)提取物灌胃对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌和肺炎克雷伯氏菌5种常见细菌所致体内急性腹腔感染小鼠血清TNF-α和IL-6含量的影响。结果表明,黄连提取物高、中、低剂量组对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯氏菌所致的腹腔感染小鼠有保护作用,可使小鼠血清中TNF-α和IL-6含量显著减少;黄连提取物有一定抗菌作用,其机制与TNF-α和IL-6有关。     

马腺疫链球菌GAPDH重组蛋白的表达及其免疫保护效果的研究

为制备马腺疫链球菌(Streptococcus equi subspecies equi)GAPDH蛋白的多克隆抗体,研究其免疫保护作用。以S.equi分离株为研究对象,利用PCR技术扩增其GAPDH基因并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌。诱导表达重组蛋白,对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting分析。以纯化后的GAPDH重组蛋白免疫小鼠,用酶联免疫吸附法、攻击保护试验检测其免疫效果。结果显示,成功构建了pET-28a-GAPDH原核表达载体,纯化获得30 kDa重组蛋白。该蛋白质能特异性识别该菌抗血清,诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体IgG,在初次免疫后第45天,抗体水平效价可达1∶24 300,攻击保护率可达87.5%。该GAPDH重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫保护效果。     

猪丹毒丝菌C43150株表面保护性抗原A的免疫功能区分析

[目的]确定丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性抗原A(SpaA)中起免疫保护作用的主要区段.[方法]PCR扩增SpaA氨基端(spaA-N)和羧基端(spaA-C)基因片段,测序鉴定正确后,克隆至pGEX4T-1原核表达载体,以IPTG诱导表达重组蛋白r-SpaA-N及r-SpaA-C,表达产物经亲和层析柱纯化后,免疫小鼠制备抗血清,Western Blot及ELISA检测重组蛋白的免疫反应性,最后分别从主动和被动免疫两方面分析r-SpaA-N及r-SpaA-C对小鼠的免疫保护活性.[结果] Western Blot结果表明抗r-SpaA-N及r-SpaA-C小鼠血清均能与天然的SpaA在64 kDa处特异性结合,ELISA检测也表明重组表达和纯化的融合蛋白都具有免疫原性,但小鼠免疫保护实验显示只有r-SpaA-N对攻毒小鼠保护作用显著(P<0.01).[结论]丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性蛋白A起主要保护功能的核心区段为氨基端,且是由抗体介导的免疫保护.     

铜绿假单胞菌脂肪酶Lipase基因的原核表达

[目的]对铜绿假单胞菌脂肪酶Lipase基因进行原核表达。[方法]利用PCR方法从铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增得到脂肪酶基因,测定其核苷酸序列,利用基因重组技术构建脂肪酶基因的原核表达载体,加IPTG至终浓度为1.0 mmol/L诱导蛋白表达4 h,并进行SDS-PAGE电泳。[结果]从铜绿假单胞菌中克隆的脂肪酶基因成熟肽的序列,与NCBI上所递交的铜绿假单胞菌脂肪酶序列同源性很高,达99.36%。成功构建了脂肪酶基因的原核表达载体pET32a-Lip,进一步SDS-PAGE电泳结果显示目的基因得到高效表达。[结论]克隆的铜绿假单胞菌脂肪酶带有自身的信号肽,也可以在大肠杆菌中正常表达,可以用于进一步的研究。     

草鱼铜绿假单胞菌的鉴定及药物敏感性分析

从患病草鱼C tenopharyngodon idella体表病灶上分离到一株优势菌,经分离纯化培养制成细菌悬液,分别以腹腔注射和浸泡两种方式感染草鱼。结果表明：该菌株能感染草鱼,且具较强毒力,腹腔注射0.2mL该菌液（3×109cfu/mL）,可导致受试草鱼100%死亡;创伤浸泡感染（3×108cfu/mL）,死亡率也达100%,受感染鱼出现与自然感染相似的类似赤皮病症状。对该病菌进行形态特征观察和主要理化特性分析,初步鉴定为铜绿假单胞菌Pseudom onas aeruginosa。进一步对该菌进行分子鉴定,共选用16S rRNA、RNA聚合酶β亚单位（rpoB）和促旋酶亚单位蛋白（gyrB）3个基因进行鉴定分析。序列克隆与BLAST分析结果显示,这3个基因均与GenBank上登录的铜绿假单胞菌的相应序列具有很高的同源性,16S rRNA、rpoB和gyrB基因与已知铜绿假单胞菌相应序列的同源性分别在99%、98%和93%以上。综合生理生化与分子鉴定结果,可判定所分离的菌株为铜绿假单胞菌。药敏试验结果显示：该菌对阿米卡星、菌必治、氟哌酸和妥布霉素等11种药物高度敏感,对链霉素和庆大霉素中度敏感,对罗红霉素、红霉素、四环素、苯唑青霉素、新霉素和头孢氨苄等16种药物具有耐药性。     

框架理论视角下的体育教师媒介形象建构

以框架理论的视角,对“人民网”和“网易网”近5年来关于体育教师的新闻进行梳理。结果显示：网络新闻主要从建构正面典型、呈现负面形象、反映生存现状和体现制度改革等4个方面对体育教师进行报道,主要运用弱势群体、模范典型、娱乐新闻和违法犯罪4个新闻框架建构体育教师的媒介形象,致使体育教师媒介形象呈负面化。针对这一现状,从社会环境、新闻媒介和体育教师群体三个层面进行了分析并提出相应的对策。     

理雅各英译《易经》及其易学思想述评

理雅各对《易经》的翻译及其研究问世以来便引起各界的广泛关注和评论。在《易经》西传史上，理氏的《易经》英译及其对《易经》的研究是里程碑式的，对后来从事典籍研究和翻译的中外学者有着多方面的启示。理氏《易经》英译本主要包括理氏英译《易经》的学术准备、英译包括《易经》在内的《中国经典》之动机、英译《易经》的底本及其相关参考书考辨、关于理氏《易经》英译的评析、理氏《易经》英译本的体例、译本特点，旨在探析其易学思想。     

《论语》是儒家集团的共同纲领

《论语》之所以从战国与汉初流行的众多孔子语录中脱颖而出,除了因为在流传过程中不断朝着官方需要的方向进行修订外,更重要的是,《论语》在修订中调和了儒家集团的内部思想分歧,并对儒家学说进行了纲领性的总结,使孝道和名教成为《论语》的灵魂。而孔子在《论语》中实际上沦为编者的工具。     

吴汝纶与桐城派在清末民初的演变——以《汉魏六朝百三家集选》及其刊刻为考察中心

《汉魏六朝百三家集选》是晚清吴汝纶据明张溥《汉魏六朝百三家集》删选而成的一部大型诗文选本。该书的编选与刊刻均有着特殊的时代意义和理论价值：该书于其任教直隶保定莲池书院期间编选而成,编选动机源自维新变法前后吴汝纶对中学存亡的深刻思考。该书在民国初期的刊刻出版与桐城末派大护法徐树铮对自我权力的维护有直接关系。该书在校勘、圈点、评注等诗文评点中,体现出编选、刊刻者强烈的流派意识,显示出桐城派传统的传承性。该书对汉魏六朝诗文的认可、推尊,一定程度上突破了桐城派固守唐宋八大家的古文体系。该书吸收曾国藩、方东树二人的诗学观念,以气势、情韵论诗与文,发掘汉魏六朝诗文的劲健、华妙之美,呈现出晚清桐城派独特的“六朝想象”。     

范仲淹与宋代新儒学

首先论述范仲淹与"宋初三先生"的关系,其次,在庆历新政时期,由于范仲淹和"宋初三先生"的共同努力,确立了"明体达用之学",此为道学之先驱。从庆历新政到道学,其间经过了王安石的熙宁变法,道学是在庆历新政与熙宁变法的正、反两方面作用下形成的。第三,范仲淹"泛通六经,长于《易》",并重视《中庸》和《春秋》,这对于道学的发展有重要影响;范仲淹与道学在思想上的联系,更主要者是他首先在宋儒中提出了"孔颜乐处"的问题;宋学精神之所寄在书院,范仲淹的重视教育,大力兴办学校,对于宋代书院的兴起有开创奠基之功。     

小尾寒羊MyoG外显子2和MyoD 5'侧翼区的多态性研究

采用PCR-SSCP技术分析了小尾寒羊肌细胞生成素Myo G基因外显子2和生肌决定基因Myo D 5'侧翼区的多态性,结果表明:Myo D 5'侧翼区在小尾寒羊中检测到2种基因型(BB、AB),BB和AB基因型频率分别为0.975 0和0.025 0,A和B等位基因频率分别为0.012 5和0.987 5;小尾寒羊的Myo G外显子2不存在多态性。对Myo D 5'侧翼区的BB基因型测序分析发现,其与牛的Myo D1基因序列(XM_592330.2)相比,发生了2处突变,分别是第960位发生了T→C突变、第972位发生了C→A突变。     

校园绿地使用特征与环境恢复性知觉关系

为了探讨自评恢复量表的有效性和人们日常行为与日常环境恢复性感知的关系,以福州市8所大学的学生为被测试对象,在压力缓解理论(SRT)和注意力恢复理论(ART)的基础上,通过Han编制的"自评恢复量表"(self-rating restoration scale,SRRS)来测定环境的恢复性知觉,研究学生使用绿地的特征与环境恢复性感知之间的关系。结果表明,自评恢复量表各项指标信效度都符合要求,学生个人特征中年级、专业类型、月消费水平对环境恢复性感知有显著影响,月使用绿地频次、每次使用绿地的时间、使用绿地的目的3个使用绿地特征对环境的恢复性感知有显著影响。因此在校园恢复性环境设计中,应该着重考虑绿地使用频次、时间和目的,使校园绿地的恢复性知觉达到最佳。     

王夫之经学的基本特征

王夫之经学汉宋兼采，古今文兼治，集经学方法之大成。相对于古文经学和今文经学，王夫之经学属于今文经学；相对于汉学考据和宋学义理，王夫之经学属于宋学义理；相对于今文经学和经学义理学，其本质特征是经学义理学。     

王阳明哲学体系的理论建构和学说特征

王阳明通过建构“心”本体，使天道、天理真正贯通在人心，使人作为万物之灵的主体价值得以彰显，最终为以“人”为中心，以“伦理”为本位的儒学人文信仰的建构和完成奠定了理论基础。王阳明心学既是一种哲学体系，也是一种伦理体系，是一种哲学与伦理相融一体的思想体系，这一特点是中国哲学的基本特征，也表现了中国伦理史发展以伦理为出发点和以哲学为论证工具的典型学说特征。     

湖湘岳阳张氏正骨流派源流及学术思想简析

湖湘岳阳张氏正骨是一个理论体系完整、学术内涵和诊疗经验丰富的中医骨伤科学术流派。岳阳张氏正骨第四代传人黄会保先生将岳阳张氏正骨前人的学术思想和宝贵经验,归纳总结为以“和”为核心,强调“去瘀生新,气血相和”“筋骨并重、内外调和”“正骨理筋,君臣相和”,以气血学说为立论依据,强调内外兼治,筋骨并重,并独创君臣佐使的正骨理筋手法使用原则,构建了岳阳张氏正骨独特的湖湘中医学术体系。