猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)对猪小肠黏膜上皮细胞活性的影响

观察猪传染性胃肠炎病毒对猪小肠黏膜上皮细胞Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,细胞增殖和凋亡的影响。将猪传染性胃肠炎病毒接种于体外培养猪小肠黏膜上皮细胞24、48和72 h后,检测细胞的ATP酶(Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪测定细胞周期,PI染色法检测细胞凋亡。与空白组相比较,试验组小肠黏膜上皮细胞的Na+-K+-ATP酶活性降低(P<0.05),Ca2+-Mg2+-ATP酶活性降低(P>0.05),细胞增殖能力降低,S期细胞比例降低,细胞凋亡明显。猪传染性胃肠炎病毒可以降低猪小肠黏膜上皮细胞的Na+-K+-ATP酶活性、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,减弱细胞的增殖能力并引起细胞凋亡。     

超高压对单核细胞增生李斯特氏菌细胞膜损伤 及其氧化磷酸化的影响

 【目的】研究超高压作用对单核细胞增生李斯特氏菌(LM 54004)细胞膜、氧化磷酸化和F0F1-ATP酶的影响。【方法】用原子吸收法测定LM 54004经超高压作用后细胞内金属离子(K+、Mg2+)的泄漏;以亲脂性阳离子四苯基溴化膦 ([3H]-TPP+) 作为放射性探针标记LM 54004细胞膜,测定经超高压作用后细胞膜电位的变化;用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯 (cFSE)为荧光探针测定经超高压作用后细胞内pH的变化;用比色法测定超高压对LM 54004 F0F1-ATP酶活性的影响。【结果】150—300 MPa作用10 min,随着压力的增大LM 54004菌落数显著降低,细胞内K+和Mg2+没有泄漏到细胞外,膜电势、跨膜H+浓度梯度和质子动力势大小基本保持不变,F1F0-ATP酶活性降低显著;300 MPa作用10 min,尽管LM 54004菌落数低于检测限,F0F1-ATP酶活性降到0,但细胞膜完整无损,其质子动力势仍然达到最大值。【结论】超高压作用下LM 54004的灭活与F0F1-ATP酶活性的降低之间相关性较好。LM 54004的细胞膜上参与呼吸链有关的酶和电子载体较F0F1-ATP酶耐压,F0F1-ATP酶对超高压敏感,超高压作用下F0F1-ATP酶的失活是超高压灭活的重要原因。     

铝胁迫下钙对小麦根系细胞质膜ATP酶活性和膜脂组成的效应

 比较了在铝胁迫条件下钙对耐铝性不同的2个小麦品种Altas66、Scout66根细胞质膜ATP酶活性、膜脂和脂肪酸组成的影响。结果表明,铝胁迫下增加营养液中的钙浓度,可提高质膜H~+-ATP酶活性和磷脂含量,降低Ca~(2+)-ATP酶活性和糖脂含量;Altas66的亚麻酸含量下降,其它组分略有上升,不饱和指数和双键指数下降;Scout66的亚麻酸含量明显上升,棕榈酸则下降明显,其它组分也略有降低,不饱和指数和双键指数明显上升。     

植物N_a~+-K~+ATP酶的组织和细胞定位

Na~+-K~+ATP酶控制着细胞内外的Na~+、K~+分布,其组织和细胞定位技术在动物上已有数篇报道。在植物上Mg~(2+)-ATP酶的细胞定位研究较多,Na~+-K~+ATP酶的组织和细胞定位尚未见报道。本文参照动物的Na~+-K~+ATP酶定位程序并加以修改,用于几     

干旱胁迫对油松和柴松钾钙离子流的影响

【目的】比较干旱胁迫下,油松与柴松幼苗根、叶对K~+、Ca~(2+)的积累规律及其根尖表皮细胞对K~+、Ca~(2+)的跨膜转运模式,从K~+、Ca~(2+)平衡的角度揭示2种松树幼苗对干旱胁迫的响应差异。【方法】以培育5个月的油松和柴松幼苗为试验材料,对其分别进行短期(连续7d不浇水)和长期(连续21d不浇水)干旱胁迫处理,以每周浇2次水的幼苗为对照,于干旱胁迫结束时采用原子吸收法测定2种松树根、叶中K~+、Ca~(2+)含量,采用非损伤微测技术检测根尖离子流速;同时在干旱胁迫结束后,对油松和柴松根尖分别采用500μmol/L质膜H~+-ATP酶抑制剂原钒酸钠(sodium orthovanadate,Vanadate)预处理50min、采用20mmol/L质膜K~+通道抑制剂氯化四乙胺(tetraethylammonium,TEA)预处理30min、采用1mmol/L质膜Ca~(2+)通道抑制剂三氯化钆(Gadolinium chloride,GdCl3)预处理1h、采用5μmol/L质膜Ca~(2+)-ATP酶抑制剂Eosin yellow(Eosin-Y)预处理1h,然后检测根尖K~+流与Ca~(2+)流。【结果】与对照相比,短期干旱胁迫对2种松树根、叶组织中K~+、Ca~(2+)含量影响不显著,但长期干旱胁迫下2种松树根、叶组织中K~+、Ca~(2+)含量显著减少,其中油松对K~+、Ca~(2+)的积累大于柴松。短期干旱胁迫诱导油松根尖K~+从对照的轻微外排转为内流,长期干旱胁迫则增强K~+外排流速;与对照相比,柴松在短期与长期干旱胁迫下K~+外排均加强;对照条件下油松Ca~(2+)内、外流基本平衡,短期胁迫下Ca~(2+)内流加强,长期胁迫下在根尖伸长区Ca~(2+)外排加强;柴松在短期与长期干旱胁迫下较对照不同程度地加强了Ca~(2+)外排;油松根尖表皮细胞的K~+和Ca~(2+)内流速度均大于柴松。TEA显著抑制2种松树K~+外流,但Vanadate显著促进2种松树K~+外流,且其对柴松的影响没有油松显著;Eosin-Y可有效抑制2种松树Ca~(2+)外排,但GdCl3仅显著抑制油松Ca~(2+)内流,对柴松Ca~(2+)外流无效。【结论】油松通过较高的H+-ATP酶活性调控依赖去极化激活的离子通道限制K~+外流,同时通过Ca~(2+)-ATP酶与Ca~(2+)通道调控细胞Ca~(2+)跨膜转运,在组织与根尖表皮细胞上减少K~+流失并维持Ca~(2+)平衡,因而较柴松抗旱性强。     

海藻酸钠寡糖对菜心类囊体膜组成及特性的影响

采用溶液培养,研究海藻酸钠寡糖对菜心(Brassica chinensis L.)类囊体膜组成和特性的影响。结果表明:海藻酸钠寡糖处理可不同程度提高细胞色素b559、细胞色素b563和光系统Ⅱ浓度,从而提高光合电子传递效率。海藻酸钠寡糖处理还可提高亚油酸(C18∶2)含量,降低棕榈酸(C16∶1)和硬脂酸(C18∶0)含量,从而增加膜脂的不饱和度,有利于维持类囊体膜的流动性和稳定性。此外,海藻酸钠寡糖处理的菜心希尔反应活力在第2、4、6和8天时,分别为对照的2.91、3.88、2.48和2.18倍。Mg2+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性也有不同程度的提高。海藻酸钠寡糖提高植物光合效率可能归因于其对类囊体膜结构的改变和功能的改善。     

内毒素诱导的山羊红细胞膜和肝线粒体膜Ca2+-ATP酶活性的改变及654-2的保护作用

 通过静脉注射的方法研究了大肠杆菌内毒素(ET)对山羊红细胞膜和肝粒体膜损伤的膜Ca²⁺-ATP酶活性的变化及654-2(山莨菪碱)的保护效应。结果表明,ET处理组(ⅱ组)在1h,3h红细胞膜Ca²⁺-ATP酶活性高于对照组(iv组)(p<0.05),5h有下降趋势且持续到9h.12h开始回升并低于iv组(p<0.01,p<0.05).654-2处理组(ⅲ组),Ca²⁺-ATP酶活性除在9h、12h与iv组,在3h与ⅱ组差异不显着(p>0.05)外,均高于iv组和ⅱ组(p<0.01,p<0.05).在肝线粒体中,ⅱ组Ca²⁺-ATP酶活性在5h、12h均低于iv组和ⅱ组(p<0.05,p<0.01),ⅲ组Ca²⁺-ATP酶活性均高于iv组,但12h与iv组差异不显着(p>0.05).结果提示,ET具有诱导膜Ca²⁺-ATP酶活性先激活后顿抑的效应,而654-2有明显保护膜Ca²⁺-ATP酶活性的作用。     

菜豆细胞膜系统上Mg2+-ATP酶热稳定性的细胞化学研究

本实验选用耐性菜豆85CT-49762为实验材料,运用膜 Mg~(2+)-ATP 酶电镜细胞化学方法,研究了细胞热锻炼前后膜系统热损伤的特点。结果表明:①细胞质的热凝固可能是膜热破坏的原因之一;②液泡膜比质膜对热更加敏感;③细胞膜系统上 ATP 酶失活不是导致膜热破损的主要原因。     

柠檬烯转化酶的提取条件优化及酶学性质研究

以指状青霉(Penicillium digitatum) DSM62840为研究对象,采用高压细胞破碎法破碎菌体,对其转化柠檬烯生成α-松油醇过程中的相关酶的提取条件进行优化。以柠檬烯转化酶活性为指标,在单因素试验的基础上结合响应面试验法,确定最佳提取条件;同时,对柠檬烯转化酶的酶学性质进行了初步探索。结果显示,最佳提取条件为:破碎压力100 MPa、破碎6次、液料比15∶1 (mL/g),在此条件下,α-松油醇的质量浓度为855.75 mg/L,酶活力达到71.31 U。柠檬烯转化酶最佳转化时间为4 h,在磷酸盐缓冲液中获得的酶活性最高;该酶可能为细胞色素P450,且不同的金属离子对酶活性的影响不同:Fe~(2+)对酶有轻微的抑制作用,而Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)、Co~(2+)、Ba~(2+)、Na~+、K~+、Fe~(3+)、Ni~(2+)则对酶有不同程度的激活作用。粗酶液SDS-PAGE电泳结果表明优化后的提取工艺效果较好。     

不同冷敏感型甘蔗茎尖Ca2+和Ca2+-ATP酶活性对低温的响应

为了探明不同冷敏感型甘蔗品种茎尖Ca2+和Ca2+-ATP酶活性对低温胁迫的响应机制,本研究利用植物组织化学技术结合电子显微镜观察了2个不同冷敏感型甘蔗品种茎尖在低温胁迫前后Ca2+和Ca2+-ATP酶的变化规律.供试品种为桂糖28号(抗冷型)和园林6号(冷敏感型),在0℃条件下,分别处理0、2、4和6 d后切取茎尖进行组织化学定位,获得如下结果:1)低温胁迫前后桂糖28号形态和细胞结构变化不明显,但园林6号发生质壁分离现象,线粒体空泡化,细胞崩溃,组织水溃状明显;2)低温胁迫开始,2个甘蔗品种细胞质和细胞核Ca2+沉淀颗粒均增多,但随着低温胁迫时间的延长桂糖28号细胞质和细胞核Ca2+沉淀颗粒减少,并维持在一个低稳态水平,而园林6号细胞质和细胞核一直维持在高Ca2+浓度水平;3)低温对桂糖28号Ca2+-ATP酶活性与分布影响不大,其活性一直维持在较高水平,而园林6号Ca2+-ATP酶活性随着低温胁迫时间的延长而变弱.结果说明,低温条件下细胞质和细胞核Ca2+浓度增高是导致甘蔗茎尖细胞受伤害的重要原因,维持较高Ca2+-ATP酶活性有助于避免Ca2+-中毒.     

水杨酸对镉胁迫下葡萄根系质膜ATPase和自由基的影响

【目的】研究水杨酸对镉胁迫下葡萄根系特性的影响,探讨缓解葡萄镉伤害的途径。【方法】以‘泽香’葡萄扦插苗为试材,在水培条件下,研究水杨酸预处理对氯化镉胁迫下葡萄根系活力、质膜H+-ATPase和Ca2+-ATPase活性以及活性氧和一氧化氮(NO)生成的影响。【结果】0.10mmol·L-1氯化镉能够提高根系活力和质膜Ca2+-ATPase活性;1.0mmol·L-1氯化镉明显促进根系超氧阴离子()、H2O2和NO的生成,显著抑制根系活力及质膜H+-ATPase和Ca2+-ATPase活性。50μmol·L-1水杨酸显著降低1.0mmol·L-1氯化镉处理下根系、H2O2和NO的生成,阻止根系活力及质膜H+-ATPase和Ca2+-ATPase活性下降,而随着浓度升高至200μmol·L-1,水杨酸的这种作用减弱。【结论】水杨酸缓解葡萄根系镉伤害的适宜浓度为50μmol·L-1;在该浓度下,水杨酸通过降低镉胁迫下自由基的产生而减轻镉对葡萄根系活力和质膜ATPase的损伤。     

不同浓度鸡粪嫌气发酵液对万寿菊生长和代谢的影响

每天用不同浓度的鸡粪嫌气发酵液（ＡＤＣＭＥ）处理种在温室中的万寿菊植株。结果,用１．６８％～３．３６％ＡＤＣＭＥ处理的植株地上部鲜重最高,开花最多,但用０．５６％浓度处理的根鲜重最高。收获时取植株中部叶片和根作为样品进行生理生化分析,发现叶片和根中细胞膜相对透性和Ｐｉ含量,过氧化物酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性以及根中蛋白质、ｐＨ和多酚氧化酶活性在一定范围内随着ＡＤＣＭＥ处理浓度的提高而提高。地上部鲜重较高、开花较多的处理,植株叶片中的叶绿素、类胡萝卜素和Ｐｉ含量,根中的多酚氧化酶活性以及根、叶中过氧化物酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性也较高。出现盐中毒症状的处理,植株根中的细胞膜相对透性和过氧化酶活性以及叶片中的Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性显著高于其它处     

硝酸镧对人工接种vMDV雏鸡红细胞膜ATPase活性的影响

对1日龄雏鸡人工感染马立克氏病毒,观察不同剂量的硝酸镧对SPF雏鸡红细胞膜ATPase活性的影响。结果表明,硝酸镧对红细胞膜Na+,K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase活性均有增强作用。表明硝酸镧可通过改变细胞膜上ATPase活性发挥抑制鸡MD肿瘤的作用。     

SDS,Cu2+污染对蟾蜍蝌蚪的急性毒性及肝脏Na+-K+-ATPase活性的影响

以中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)蝌蚪为试验材料,采用联合指数相加法,研究了阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)、重金属Cu²⁺对蟾蜍蝌蚪的急性毒性和联合毒性效应;并在急性毒性试验的基础上,研究了亚急性条件下SDS,Cu²⁺及其复合污染对蝌蚪肝脏Na⁺-K⁺-ATPase活性的影响。试验结果表明,SDS对蝌蚪的48,72,96 h的半致死浓度(LC₅₀)分别为27.38,26.45,25.57 mg/L;Cu²⁺对蝌蚪的48,72,96 h的半致死浓度(LC₅₀)分别为0.475,0.323,0.285 mg/L。SDS,Cu²⁺对蝌蚪的联合毒性作用48 h内表现为毒性增强的协同效应,96 h后表现为拮抗作用。蝌蚪在亚急性浓度的SDS,Cu²⁺条件下暴露4 d后,SDS,Cu²⁺及复合污染均对蝌蚪肝脏的Na⁺-K⁺-ATPase活性产生明显影响,SDS,Cu²⁺复合污染在Na⁺-K⁺-ATPase水平上表现为一定的协同作用。     

光照长度和光质对农垦58S叶绿体Ca~(2+)-ATP酶活性的影响

盆栽农垦58S及农垦58原种.幼苗6叶期经不同光照长度和光质处理。结果表明,在幼穗发育的第Ⅳ期到第Ⅴ期,农垦58S叶片中叶绿体Ca~(2+)-ATP酶在长日处理和红光间断暗期处理下活性下降,在短日处理和红光/远红光间断暗期处理下活性升高。该酶的活性变化可能与农垦58S的育性转换有关。     

Ca2+和Ca2+-ATPase在小麦颖果筛分子分化中的动态变化

 【目的】探讨Ca2+ 和Ca2+-ATPase在小麦颖果筛分子（sieve elements,SEs）分化过程中的动态变化及其在SEs的细胞程序性死亡（programmed cell death,PCD）中的作用。【方法】用透射电子显微术观察小麦颖果韧皮部分化过程中的超微结构变化;用Ca2+特异性荧光染色法和焦锑酸钾沉淀法,对小麦颖果韧皮部分化过程中的Ca2+进行组织和亚细胞水平的定位;同时用铅盐沉淀法对Ca2+-ATPase进行定位。【结果】超微结构观察发现,在SEs发育初期,细胞壁逐渐加厚,且内壁呈突起状,随着分化的进行,SEs细胞壁较以前明显变薄且平滑。Ca2+荧光试验表明,花后6～10 d,SEs细胞壁中有Ca2+的积累,其中花后9 d,SEs细胞壁Ca2+浓度最高;到花后14 d,细胞壁Ca2+浓度下降至对照水平。Ca2+亚细胞定位表明,在SEs中,花后1～2 d Ca2+主要分布在细胞膜上和细胞核中;花后4 d,SEs细胞质中Ca2+浓度增加,并且线粒体中也出现Ca2+颗粒;但到花后5～8 d,Ca2+主要分布在SEs细胞壁中,此时线粒体中未发现Ca2+颗粒;在花后10～18 d,Ca2+再次从细胞壁转移到胞内;花后20 d,SEs中Ca2+消失。在中间细胞（intermediary cells,ICs）中,花后1～18 d始终都有Ca2+颗粒,主要分布在细胞内壁上和液泡中。在SEs发育过程中,Ca2+-ATPase的活性发生显著变化。花后3 d时,SEs中的Ca2+-ATPase活性最弱;花后4～14 d SEs有较强的Ca2+-ATPase活性,且主要分布在SEs的细胞壁、细胞膜、胞间连丝等部位和线粒体、细胞核等细胞器上。【结论】Ca2+和Ca2+-ATPase在小麦颖果SEs的分化过程中呈动态变化,Ca2+可能参与介导了SEs的PCD过程。此外,Ca2+和Ca2+-ATPase可能对SEs细胞壁的加厚和SEs的功能实施有一定调控作用。     

低温对不同冷敏感型甘蔗品种根系一些生理指标的影响

为了探明低温对不同冷敏感型甘蔗品种根系一些生理指标的影响,本研究以不同冷敏感型甘蔗桂糖28号(抗冷型)和园林6号(冷敏感型)为供试材料,研究低温胁迫后根部的根系活力、Ca2+-ATP酶活性、电导率以及丙二醛、脯氨酸含量等生理指标.结果表明:随低温胁迫时间的延长,2个品种根系活力都呈现下降趋势,桂糖28号的根系活力均显著大于园林6号;低温胁迫后2个品种相对电导率都呈现上升趋势,但桂糖28号上升较平缓,而园林6号电导率上升速度较快,园林6号电导率均大于桂糖28号;低温胁迫后2个品种丙二醛含量都呈现上升趋势,园林6号丙二醛含量显著大于桂糖28号;低温胁迫后2个品种的脯氨酸含量都呈现上升趋势,桂糖28号脯氨酸含量均显著高于园林6号;低温胁迫后,桂糖28号Ca2+-ATP酶活性呈先上升再下降趋势,而园林6号Ca2+-ATP酶活性一直呈下降趋势,桂糖28号Ca2+-ATP酶活性均显著高于园林6号.可见,在低温胁迫下,具较高的根系活力、Ca2+-ATP酶活性及脯氨酸含量可能是耐冷型甘蔗品种桂糖28号具有更强抵御低温胁迫能力的生理基础.     

氯化镉胁迫下葡萄根系生理反应的品种差异

【目的】研究不同葡萄品种根系对镉胁迫的生理反应,探讨葡萄耐镉性的品种差异。【方法】以9个葡萄品种的扦插苗为试材,在水培条件下,研究了0.5 mmol.L-1氯化镉(CdCl2)处理后,葡萄根系活力、质膜H+-ATPase活性和丙二醛(MDA)含量的变化。【结果】正常情况下,9个葡萄品种的根系活力由高到低的顺序为玫瑰香巨峰瑰宝皇家秋天奥迪亚无核乍娜红地球泽香达米娜;经0.5 mmol.L-1氯化镉处理16 h后,葡萄各品种的根系活力均降低,下降幅度由大到小的顺序为巨峰皇家秋天玫瑰香瑰宝红地球乍娜达米娜泽香奥迪亚无核。氯化镉处理后,9个品种根系质膜H+-ATPase活性均降低,根系MDA含量均显著升高,其中巨峰葡萄H+-ATPase活性下降幅度最大,MDA含量升高幅度最大,奥迪亚无核葡萄根系MDA含量升高幅度最小。【结论】不同葡萄品种根系对镉胁迫的敏感性和耐受性存在显著差异;在所试9个品种中,巨峰葡萄的根系活力和H+-ATPase活性对镉胁迫最敏感,更易受到氯化镉伤害;奥迪亚无核葡萄的根系活力对镉胁迫有较强的耐性,对氯化镉处理最不敏感。     

Effects of Aluminum on ATPase Activity and Lipid Composition of Plasma Membranes from Wheat Roots

The effects of aluminum on ATPase activity and lipid composition of the plasma membranes isolated from root tips of Al-tolerant (Altas 66) or Al-sensitive (Scout 66) cultivar of Triticum aestivum L.was assayed. The results showed that both cultivars had similar changes in H+ -ATPase and Ca2+ -ATPase activities after aluminum treatment. Exposure of both cultivars to 20 and 100 (mol/L aluminum for 5 d significantly decreased the activities of Ca2+ -ATPase of plasma membranes. The activities of H+-ATPasc in plasma membrane increased under 20 μmol/L aluminum and decreased at 100 μmol/L aluminum. With aluminum treatment, the PL content of plasma membrane decreased, but GL content increased. The ratio of PL to GL decreased more distinctly in Scout 66 than that in Altas 66. Treated with 20 and 100 μmol/L aluminum, linolenic acid content and the index of unsaturated fatty acids decreaced greatly in Scout 66, but the index of unsaturated fatty acids in Altas 66 increased slightly.     

The Relationship Between Senescence and Ca2+-ATPase Activity of Microsomal Membrane and Lipid Peroxidation in Harvested Peach Fruit

Peach fruit easily soften and have a short storage time at normal temperature. In this study, peach fruit (Prunus persica sieb et Zucc cv. Yingqing) were picked and stored at 25 and 4℃ to investigate the senescence in correlation with Ca2+- ATPase activity of microsomal membrane and lipid peroxidation during ripening and senescence. In comparison with that stored at 25℃, the fruit stored at 4℃ exhibited a higher flesh firmness, lower respiration rate, and generated the late bigger peak value of Ca2+-ATPase activity as well as maintained the higher activity of the enzyme. Meanwhile, the lower levels of super oxygen radical (O2-) production and content of malondialdehyde (MDA), a product of membrane lipid peroxidation were observed. Sodium orthovanadate (SO) and erythrosin B (EB), as Ca2+-ATPase inhibitors, could stimulate the respiration rate. The results suggested that the slower senescence rate of peach fruit was closely related to the higher peak value and longer duration of Ca2+-ATPase activity in microsomal membrane, with the slighter membrane lipid peroxidation and lower O2(-) production rate.