小麦5—氨基酮戊酸脱水酶的纯化及部分性质研究

以３０％～６０％硫酸铵饱和度分级沉淀、ＤＥＡＥ ＳepharoseＣＬ－６Ｂ、ＳephadexＧ－２００、Ｐhenyl ＳepharoseＣＬ－４Ｂ和羟基磷灰石层析纯化了小麦５－氨基酮戊酸脱水酶（ＡＬＡＤ）,其在pＨ８．５时比活为３１Ｕ．mg＾－１蛋白;酶纯化了９１倍,得率５％,酶亚基分子质量约５２ku,全酶分子质量约３３０ku,表明酶由６个亚基组成;酶的等电点为４．８,在４００nm有吸收峰,最适反应温度４５℃,Ｍg＾３＋激活酶,Ｚn＾     

辣根过氧化物酶的分离制备和纯化

从辣根块茎分离和纯化了辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）,纯化程度包括匀浆、加热、硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和ＣＭ－２３阴离子交换层析。纯化的ＨＲＰ的Ｋ４值为２．５×１０＾５,ＲＺ值值３．００,酶的比活４０６Ｕ／ｍｇ蛋白。它的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条带,酶亚基分子量为４０ＫＤ,等电聚焦电泳呈现三条带,酶不舔生染色呈现多条带,表明有同工酶存在。对酶的分离纯化作了一些改进,如加氨水保持ＰＨ值,加入５ｍｍｏｌ／     

不同方法提取鸡血清IgG及纯度鉴定

本文用Ｎａ_２ＳＯ_４和（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４两种盐沉淀鸡血清ｒ－球蛋白，再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００柱和ＤＥＡＥ－３２柱进一步纯化，将获得的ＩｇＧ利用免疫电泳和聚丙烯酰胺凝胶（ＰＡＧＥ）电泳进行纯度鉴定，结果表明：在本试验条件下，盐析方法获得的ｒ－球蛋白经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００柱分离获得高纯度的鸡ＩｇＧ，ＤＥＡＥ－３２柱经０．１ＭＰＢＳ（ＰＨ７．４）洗脱，２ＭＮａＣｌ解离获得的ＩｇＧ纯度较差。     

兔出血症病毒主要结构多肽的纯化及免疫保护性试验

人工感染ＲＨＤＶ－ＮＪ株病死兔肝经－５０℃反复冻融,氯仿处理,ＰＥＧ沉淀、差速离心,Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ柱层析得纯化病毒,纯化ＲＨＤＶ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＣｕＣｌ２负染色后,切取主要结构多肽ＶＰ１（６４．５ＫＤ）凝胶带,除去ＣｕＣｌ２和ＳＤＳ获得ＶＰ１,高效液相色谱鉴定只有一个蛋白峰,Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,ＨＡ和ＨＩ结果显示纯化ＶＰ１具有良好的抗原表位稳定性。无母源抗体的３月龄兔１     

小麦5-氨基酮戊酸脱水酶的纯化及部分性质研究

以３０％ ～６０％ 硫酸铵饱和度分级沉淀、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００、Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂ 和羟基磷灰石层析纯化了小麦５－氨基酮戊酸脱水酶（ＡＬＡＤ）,其在ｐＨ ８．５ 时比活为３１ Ｕ·ｍ ｇ－ １蛋白;酶纯化了９１ 倍,得率５％ ,酶亚基分子质量约５２ ｋｕ,全酶分子质量约３３０ ｋｕ,表明酶由６ 个亚基组成;酶的等电点为４．８,在４００ ｎｍ有吸收峰,最适反应温度４５℃,Ｍｇ２＋ 激活酶,Ｚｎ２＋ 和磷酸吡哆醛抑制酶。纯化的ＡＬＡＤ浓缩后,－ ２０℃下在０．１ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １,ｐＨ ８．５ 的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ,内含５０％ 的甘油,５ ｍ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １的巯基乙醇和ＭｇＣｌ２ 中黑暗贮藏３０ ｄ 酶活不损失     

人红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶分离纯化方法的改进

葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ－６－ＰＤ）是磷酸戊糖途径的限速酶。传统的以ＮＡＤＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ作为亲和吸附剂的纯化方法由于较昂贵的ＮＡＤＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ用量多,且耗时长,为此,作者对此传统方法进行了改进。报道如下：１材料与方法１．１...     

小麦胆色素原脱氨酶的联合酶活法测定

本实验以小麦匀浆液中δ－的氨基酮戊酸脱水酶（ＡＬＡＤ（催化δ－氨基酮戊酸（ＡＬＡ）生成胆色素原（ＰＢＧ）,并以ＰＢＧ作为底物测定胆色素原脱氨酶（ＰＢＧＤ）的酶活,的结果表明：将ＡＬＡ缓冲液与粗ＡＬＡＤ酶液１：２混合,２５℃,黑暗反应４ｈ,可获得最大量的ＰＢＧ,加入部分纯化的ＰＢＧＤ,３７℃反应１ｈ后,测得底物ＰＢＧ减少,产物原尿卟啉原Ｉ增加,该联合酶活测定法以ＰＢＧ减少来直接确定加热处理后的凝胶过     

烟叶超氧物歧化酶的研究

从烟叶中提取的超氧物歧化酶（ＳＯＤ），经ＰＡＧＥ垂直板电泳后，用氮蓝四唑（ＮＢＴ）法活性染色，并经凝胶薄层扫描（λ＝５９５ｎｍ），结果显示粗酶液有６条同工酶谱带，经纯化后的酶只有一条谱带。此纯酶液置冰箱３６ｈ后，可获得长方形结晶。结晶酶液用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析（１．５ｃｍ×１００ｃｍ）和ＳＤＳ－和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其分子量分别为２４８３０和２８９００。用等电聚焦电泳测得该酶等电点为６．８０。该酶在ｐＨ５～９范围内活性较稳定，在７５℃保温１５ｍｉｎ活性尚保留５４％。此酶对ＫＣＮ、氯仿－乙醇不敏感，但受到ＥＤＴＡ，Ｈ_２Ｏ_２的强烈抑制，表明烟叶中分离纯化得到的ＳＯＤ为酶分子中结合Ｆｅ的Ｆｅ－ＳＯＤ。     

牛冠状病毒4H12/1D4单链基因片段在大肠杆菌中的表达

用ＥｃｏＲＩ酶切ＰＲ５Ｂ４质粒，采用“Ｖ”字形内槽电洗脱法回收约０．８０４Ｋｂ牛冠状病毒基因工程抗体４Ｈ１２／１Ｄ４单链基因片段，并将其插入载体质粒ＰＥＴ－１７ｂ的ＥｃｏＲＩ位点构成重组质粒ＰＥＴ－Ｄ４，将重组质粒转化ＤＨ５α感受态细胞，在ＩＰＴＧ的诱导下表达，细菌裂解物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳筛选，发现含ＰＥＴ－Ｄ４细菌经诱导新增一条约２８ＫＤα蛋白带，该蛋白带与设计基因工程抗体的大小相符，经光密度扫描，表达量约占菌体总蛋白的１４％     

水稻Rubisco活化酶的提取和纯化

利用３５％饱和硫酸铵分部沉淀、ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ、ＭｏｎｏＱ柱层析等步骤从水稻叶片纯化了Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示水稻Ｒｕｂｉｓｃｏ活化酶由４５ｋＤ和ｋＤ两个亚基组成,ＡＴＰ是该酶活化Ｒｕｂｉｓｃｏ的必需成分。     

青海云杉遗传结构研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳实验对青海云杉的3个天然群体(甘肃祁连山,青海大通,甘肃甘南州)的12个基因位点表达的8种同工酶的遗传变异模式进行了研究。结果表明:群体平均45.83%的位点是多态的,平均期望杂和度为:0.2101;群体平均分化系数为:0.0643,即群体内变异占总变异的93.57%,说明只有6.43%的变异存在于群体间。而且,群体的遗传距离与空间距离不存在相关性。     

PAGE法鉴定西瓜杂交种研究初报

本研究利用种子蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）等多种电泳技术对供试西瓜杂交种及其亲本种子进行了鉴定，结果表明干种子蛋白质ＰＡＧＥ法在分离胶Ｔ＝１４％，Ｃ＝０．３５％，ｐＨ５．８；浓缩胶Ｔ＝４．０％，Ｃ＝０．３３％，ｐＨ等于５条件下可将供试西瓜杂交种与其亲本种子明显区分开，因此，这种方法可以作为该组合种子真实性鉴定的手段，作为纯度鉴定方法还需进一步研究。     

杏RAPD两种凝胶电泳指纹特点及PCR扩增片段的序列分析

为更好地将RAPD技术应用于杏品种资源鉴定及遗传基础的研究,文章首次在选用11碱基长度引物的优化技术体系基础上,分别使用两种凝胶对16个杏品种RAPD的PCR扩增产物进行电泳检测与DNA指纹比较。结果表明,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测出的谱带总数量以及多态性谱带的数量均高于琼脂糖凝胶,前者不存在或很少存在共迁移性的现象。根据两种电泳系统获得的标记信息对16个杏品种的遗传关系的分析发现,两者聚类结果存在一定差异。以此,提出了科学利用两种电泳的RAPD标记技术的策略。对随机挑选的24个片段进行克隆与测序,结果发现24个片段都是对应引物的RAPD扩增产物。在不同的11条序列中有3条是编码蛋白的基因片段,说明了RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,同时可以扩增编码蛋白的基因片段,能够较全面客观地反映不同杏品种间遗传上的差异。     

密穗小麦高分子量谷蛋白亚基组成分析密穗小麦高分子量谷蛋白亚基组成分析

采用十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS- PAGE)方法 ,分析了 32份密穗小麦的高分子量谷蛋白亚基 ( HMW- GS)组成。在 3个位点上一共检测到 12种不同的亚基类型。在 Glu- B1位点上 ,密穗小麦的高分子量谷蛋白亚基组成具有其明显的组成特点 ,表现为 2 1和 13+16亚基出现频率较高 ,分别为 34 .83%和 18.75% ,而这 2种亚基在普通小麦和斯卑尔脱小麦中为极稀有亚基 ;密穗小麦在 Glu- A1和 Glu- D1位点上的主要亚基变异形式与普通小麦相似 ,即以 null( Glu- A1)、2 +12和 5+10 ( Glu- D1)为其主要变异形式。另外 ,本研究还筛选出了 7份具有 5+10优质亚基的材料 ,这将为提高密穗小麦与普通小麦种间杂交种的品质杂种优势提供了材料基础。最后讨论了密穗小麦的起源     

小麦内生固氮菌分离及其ACC脱氨酶测定

【目的】了解小麦内生固氮菌数量,筛选具有ACC（1-aminocyclopropane-1-carboxylate, 1-氨基环丙烷-1-羧酸）脱氨酶活性的小麦内生固氮菌,确定筛选菌株的系统发育地位与分类地位,为微生物肥料生产收集菌种资源。【方法】样品表面灭菌后采用无氮培养法筛选内生固氮菌,乙炔还原法测定菌株固氮酶活性;采用ACC唯一氮源法筛选ACC脱氨酶阳性菌,比色法定量测定ACC脱氨酶活性;PCR扩增得到菌株16S rDNA,通过序列测定和相似性分析研究菌株的系统发育;通过形态、生理生化特征和16S rDNA序列比对鉴定菌种。【结果】小麦体内固氮菌数量为（0.2-17.8）×105 cfu•g-1鲜重;分离到小麦内生固氮菌60株,固氮酶活性在1-36 nmol C2H4/h•mg蛋白,其中9株具有ACC脱氨酶活性,活性在0.87-9.32 µmol α-丁酮酸/h•mg蛋白;新分离菌株9136固氮酶活性为1.82 nmol C2H4/h•mg蛋白,ACC脱氨酶活性为9.32 µmol α-丁酮酸/h•mg蛋白,初步鉴定为假单胞菌Pseudomonas sp.。【结论】 田间自然生长的小麦体内有大量固氮菌,数量在105 cfu•g-1鲜重,其中部分菌株具有ACC脱氨酶活性,个别菌株具有较高的ACC脱氨酶活性,可能对作物抵御不良环境具有作用。     

青稞高分子量麦谷蛋白亚基SDS PAGE分析

 对87份青稞和13份野生大麦进行SDS PAGE分析,结果发现,供试材料的HMW GS条带单一,大多只有1条带,个别材料有2条带,而且条带的位置也变化不大,仅有3种条带位置,且基本介于小麦HMW GS的7亚基至12亚基位置之间。因此,根据条带迁移位置的不同对参试材料的3种条带命名为A,B,C,分别对应着A,B,C亚基。87份青稞材料共出现了A,B,C,AC等4种带型,分别对应着56,1,27,3号青稞材料,各带型分别占64.4%,1.1%,31.0%,3.4%;其中A,B,C为单带带型,AC为双带带型;出现AC带型的原因是材料中同时存在A带型和C带型的种子。青稞和野生大麦高分子量麦谷蛋白亚基类型较单一,变异不丰富,多态性较低。本试验对青稞高分子量麦谷蛋白亚基多态性的研究可为其面粉加工利用和品质改良提供科学依据     

德州驴血清LDH同工酶特性的研究

应用中心产区简单随机抽样方法采集73头山东省沾化县德州驴的血液,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术检测了LDH同工酶多型。结果表明,大部分个体都显示4条带,少数个体表现为5条活力带,个体间的差异很大。但整个群体LDH的变化特点为LDH3>LDH4>LDH1>LDH2>LDH5。     

Strand-biased spreading of mutations during somatic hypermutation

Somatic hypermutation (SHM) is a major means by which diversity is achieved in antibody genes, and it is initiated by the deamination of cytosines to uracils in DNA by activation-induced deaminase (AID). However, the process that leads from these initiating deamination events to mutations at other residues remains poorly understood. We demonstrate that a single cytosine on the top (nontemplate) strand is sufficient to recruit AID and lead to mutations of upstream and downstream A/T residues. In contrast, the targeting of cytosines on the bottom strand by AID does not lead to substantial mutation of neighboring residues. This strand asymmetry is eliminated in mice deficient in mismatch repair, indicating that the error-prone mismatch repair machinery preferentially targets top-strand uracils in a way that promotes SHM during the antibody response.     

盐穗木根际土壤产ACC脱氨酶细菌的筛选与鉴定

【目的】研究从新疆盐碱地的盐穗木根际土壤中筛选到产ACC脱氨酶活性较高的植物根际促生菌。为ACC脱氨酶活性菌株的植物促生作用的研究奠定基础。【方法】以新疆盐碱地的盐穗木根际土壤为样品源,ACC为唯一氮源,利用筛选培养基定向富集的方法,筛选产ACC脱氨酶活性菌株。通过扫描电镜进行形态学的观察;革兰氏染色、硝酸盐还原试验和柠檬酸盐利用等生理生化试验,用Biolog Gen III板微孔鉴定及16S rDNA序列同源性分析对分离的菌株鉴定。【结果】筛选了三株具有ACC脱氨酶活性的菌株,用扫描电镜可以清晰的观察到三株菌株均为短杆菌,革兰氏染色都为阴性,均有芽孢,硝酸盐还原试验均为阳性,都能利用柠檬酸盐。三株菌株分别为1# 、3# 和5#,三株菌株的ACC脱氨酶活性的比活力分别为0.012,0.012,0.014 U/mg;1# 和5#,3# 与5# 之间酶活力差异显著(P<0.05),1#和3#之间酶活力差异不显著(P<0.05),用Biolog Gen III板微孔和16S rDNA序列同源性分析对分离的菌株1#、3# 和5# 菌株分别鉴定为Klebsiella pneumoniae、Klebsiella pneumoniae、Klebsiella oxytoca。【结论】     

自然发酵豆豉曲中产AMP脱氨酶菌株的筛选及其产酶条件研究

[目的]筛选能高产AMP脱氨酶的野生菌株,并对该菌株进行菌种鉴定和发酵条件优化.[方法]通过大豆的自然发酵制备豆豉曲,并分别以PDA、MRS和YPD 3种培养基进行豆豉曲中微生物的分离纯化,将获得的分离菌株进行液体发酵培养,并检测发酵液的AMP脱氨酶活力.[结果]试验通过3种培养基分离纯化,获得纯种菌株51株.通过进一步的摇瓶发酵培养,检测到具有AMP脱氨酶活性的菌株为16株,选取活性最高的DCP-23菌株进行菌落形态和菌丝形态分析,初步鉴定该菌株为青霉菌属.通过摇瓶发酵条件优化,确定该菌株产酶的适宜发酵条件为：培养基初始pH为6.0,接种量为6％,30℃发酵60h.在上述发酵条件下,发酵液中的AMP脱氨酶可达到293.7 U/ml.[结论]试验获取了1株能产较高活性AMP脱氨酶的野生青霉菌株DCP-23,可为高产AMP脱氨酶的菌株研究提供参考.