不同海拔高度的藏獒肺动脉血管特性及结构

[目的]探讨藏獒肺动脉血管的结构及对高海拔低氧的适应特性。[方法]通过光镜观察及形态学测量对来自青海和甘肃两地藏獒的肺动脉血管的特性及结构进行研究。[结果]藏獒肺动脉分为弹性动脉、肌性动脉和微动脉。肌性动脉又分为中动脉和小动脉。研究表明藏獒肺动脉平滑肌含量并没有随海拔而明显变化。2组藏獒在肺血管平滑肌含量方面差异不显著（P〉0.05）,但均高于牦牛和驼马。藏獒肺胸膜较厚,胸膜内有大量的胶原纤维和弹性纤维,肺脏表面有许多高低不平的皱襞,而且藏獒相邻肺泡间的肺泡隔内有丰富的毛细血管和大量红细胞。[结论]藏獒肺组织结构是其对高原低氧环境的一种遗传适应,与海拔高度无关。     

牦牛肺脏的适应性结构

应用光镜和电镜技术，对牦牛肺脏的微细结构进行了系统观测，分析其结构特性与高原低氧环境适应性的关系。结果表明，牦牛肺小叶结构明显，肺泡I型上皮菲薄，构成肺泡壁的绝大部分。与其它动物不同，牦牛I型肺泡上皮见有间断处，为非连续型上皮。气－血屏障的算术平均厚度和调和平均厚度分别为0.53±0.10µm和0.44±0.07µm，明显比体格较小的其它家畜还要薄，这有利于气体交换时增加氧的弥散量。肺脏微动脉中膜的肌层厚度与血管外径的百分比为5.00±0.93%，与高原驼马的比值近似，而比奶牛和公牛的要小，可减少牦牛肺动脉高压的发病几率。肺胸膜、小叶间隔、肺泡隔、各级支气管管壁和血管壁内都有丰富的弹性纤维分布，并相互联系，构成一个完整的弹性系统，维持肺脏良好的扩张和回缩状态。杯状细胞不仅大量分布于各级支气管，细支气管粘膜上皮中也出现杯状细胞，其分泌的粘液有助于牦牛在干旱环境下保护呼吸道的通气量。这些结构特点是牦牛世代生活于高原低氧环境下所获得的适应性变化。     

藏猪内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因的表达与低氧适应分析

为了解内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在动物体内催化产生一氧化氮(NO),对动物低氧适应的重要作用,选取饲养在西藏林芝地区(海拔约3 000m)的藏猪、大约克猪(高原大约克猪)和饲养在北京(海拔约100m)的大约克猪(低地大约克猪),屠宰并采集心肌、肝脏和肺脏组织,采用荧光定量PCR技术测定eNOS基因的表达量。结果发现,高原藏猪、大约克猪和低地大约克猪在肝脏和肺脏中eNOS的总体表达量分别比心脏中要高1 000和400倍;在心脏中,高原藏猪和高原大约克猪eNOS基因的表达量均高于低地大约克猪的4.0和2.6倍(P<0.01),但是在肝脏和肺脏中的表达量却相反。大约克猪从低地移居高原,心肌组织eNOS表达量增加了2.6倍,但肝脏和肺脏组织中eNOS表达量分别下降了1.6和1.1倍。结果表明,藏猪eNOS基因表达量与低地大约克猪和移居高原的大约克猪存在差异,且在心肌、肝脏和肺脏组织表现不同,可能对其低氧适应起不同的调节作用。     

猪ARID5B基因多态性及其与脂肪沉积性状的相关性分析

为探究猪ARID5B基因多态性及其与脂肪沉积性状的相关性,在DNA水平上对藏猪、大白猪ARID5B(AT-rich interaction domain 5B)基因5′侧翼区进行了单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点筛选;在mRNA水平上对两猪种的肝脏、背脂和背最长肌组织中的ARID5B基因表达量进行了RT-qPCR检测;并对两猪种的背膘厚和背最长肌组织中IMF(Intramuscular fat)含量进行测定。结果表明:在ARID5B基因5’侧翼区,存在T-2 216C和In-2 029Del缺失2个连锁突变位点,藏猪与大白猪呈极显著差异(P0.01);在相同组织不同品种间,ARID5B基因在肝脏、背脂和背最长肌中mRNA相对表达量趋势完全一致,且藏猪ARID5B基因表达量均极显著低于大白猪(P0.01);藏猪背膘厚和IMF含量均极显著高于大白猪(P0.01);经DNA、mRNA水平、背膘厚和IMF含量相关性分析发现,ARID5B基因mRNA相对表达量与背膘厚和IMF含量呈显著负相关(P0.05)。     

肉鸡肺动脉高压综合征自然病例肺血管重构的形态学研究

抽取 2 0羽与缺氧有关的肺动脉高压综合征 (Pulmonary Hypertension Syndrome,PHS)自然病鸡和与之相对应的 2 0羽同种、同龄健康 AA肉鸡 ,以腹腔存有大量腹水和右心室 (Rightventricle,RV )与全心室 (Total ventricle,TV )的重量比 (RV/ TV)作为判定肺动脉高压的主要临床指标 ,用组织形态学方法建立肉鸡肺细小动脉血管肌化的分型标准 ,并对患PHS肉鸡和健康肉鸡肺细小动脉结构变化进行定量检测和比较分析。结果显示 :患 PHS肉鸡的血管肌化百分率、RV/ TV均极显著性高于健康肉鸡 (P<0 .0 1) ;血管非肌化百分率和血管密度则极显著性降低 (P<0 .0 1) ;图片显示 ,血管内膜及中膜细胞增生肥厚。从而揭示了缺氧性肺动脉高压肉鸡肺血管已发生了以非肌性动脉肌型化 ,肌性动脉管壁增生肥厚为主要特征的血管重构现象。     

引入猪种与合作藏猪mtDNA D-loop的遗传多样性

测定并分析了杜洛克猪、长白猪和大白猪3个引入猪种及合作藏猪共178个个体的线粒体DNA D环(mt DNA D-loop)高变区核苷酸序列,研究引入猪种对合作藏猪遗传资源的影响.结果表明:合作藏猪核苷酸多样度和平均核苷酸差异系数均低于杜洛克猪和大白猪,仅高于长白猪,而其单倍型多样度高于3个引入猪种.单倍型分析结果表明:合作藏猪仅分布在亚洲单倍类,杜洛克猪和大白猪同时具有亚洲和欧洲两个单倍类,欧洲起源猪种没有入侵到合作藏猪母系.     

藏獒肺组织对高原低氧环境的适应特性

通过光镜观察了青海省果洛藏族自治州达日县8只藏獒肺脏的组织结构,并对其高原低氧环境的适应性进行了研究.结果表明:藏獒肺胸膜较厚,其中富含大量胶原纤维和弹性纤维;支气管、细支气管管壁较厚,固有层与外膜有较多弹性纤维;肺呼吸部肺泡管的数量多,每支呼吸性细支气管分出多条宽大的肺泡管;许多肺泡常呈现半充满状态的小囊,分布在肺泡管周围;肺泡隔内毛细血管丰富,并呈扩张状态,管腔内红细胞数量较多.     

基于全基因组重测序分析藏猪骨骼肌发育相关基因

为从全基因组水平探索影响藏猪骨骼肌发育的遗传变异，本研究对5头迪庆藏猪进行全基因组重测序，并合并NCBI数据库中来自3个省的藏猪、与藏猪同样小体型及生长慢的巴马香猪、及体型大且生长快速的杜洛克和大白猪共70个猪只的全基因组重测序数据进行整合分析，获得全基因组SNP后结合选择信号检测与等位基因频率(AF)分析鉴定藏猪-香猪与杜洛克-大白猪的遗传差异；利用GO和KEGG功能富集分析藏猪骨骼肌转录组与蛋白组相关基因。结果发现:1)2 211个基因在藏猪-香猪与杜洛克-大白猪2个比较组中存在遗传差异，138个基因富集到骨骼肌发育相关的GO功能集及KEGG通路；2)9个基因(UCHL3、POSTN、COL12A1、PGK1、JPH1、GPT2、RBFOX1、FLNB和DCX)已报道参与藏猪60 d胚胎背最长肌发育调控，1个(CKM)参与6月龄藏猪背最长肌发育调控；3)10个基因共包含936个SNP，其中655个SNP位于基因间区，255个是内含子变异，少量SNP是外显子及调控区变异。本研究从全基因组水平鉴定了与藏猪骨骼肌发育相关基因及其遗传变异，为以后持续深入解析藏猪骨骼肌发育的遗传机制提供参考。     

高钠饲料引起的肉鸡腹水、右心衰竭、肺动脉高压和肺小动脉肌型化研究

随机抽取30羽饲料钠离子过量所致的腹水综合征(AS)自然患鸡和30羽同种、同龄健康AA肉鸡,用生理学和组织形态学方法对患AS肉鸡和健康肉鸡肺动脉压和肺微细动脉结构变化进行定量检测和比较分析,结果显示:饲料钠离子过量显著增加了肉鸡AS的发病率、右心室与全心室重量比(RV/TV)、平均肺动脉压(mPAP)、肺末梢厚壁血管百分率(%TWPV)和肺微细动脉管壁平均中膜厚度(mMTPA)(P<0.05).从而揭示了饲料钠离子过量性AS患鸡发生了以肺微细动脉管壁增生肥厚为主要特征的肌型化和肺动脉高压.     

藏猪和大约克猪FBXO32基因多态性及表达差异分析

为明确FBXO32基因在高原藏猪与大约克猪肌肉中的表达差异性，选取这2个猪种作为试验动物，采用双脱氧测序技术对藏猪(33头)、大约克猪(32头)FBXO32基因的5′UTR启动子区进行单核苷酸多态性(SNPs)筛选，利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测FBXO32基因在藏猪、大约克猪腿肌及背最长肌组织中mRNA的相对表达量。研究结果表明，在FBXO32基因的5′UTR启动子区筛选到了G-257A和A-556G这2个SNPs位点，且SNPs位点在2个猪种群体间的基因型频率有着显著性差异(P<0.05);通过转录因子预测，发现这2个SNPs位点与肌细胞的更新、分化和增殖相关，推测FBXO32基因的SNPs位点是调控肌肉生长的关键位点；藏猪腿肌、背最长肌组织中FBXO32基因的mRNA相对表达量都显著高于大约克猪(P<0.05),由此推测FBXO32基因可以负向调控肌肉生长，这可能是导致高原藏猪生长速度慢的主要原因之一。本研究结果为进一步探究FBXO32基因在猪肌肉生长相关的调控机制提供了必要的理论依据。     

富集环境对育肥猪生产性能及胴体肉品质影响

为了解富集环境对育肥猪生产性能、胴体品质和肉质影响,将杜长大(杜洛克×长白×大白n=60)、大杜民(大白×杜洛克×民猪n=60)和杜长民(杜洛克×长白×民猪n=60)育肥猪分别饲养在富集和贫瘠环境圈舍,测定其生产性能,胴体品质及肉质。结果表明,畜舍环境对育肥猪生产性能和胴体品质无显著影响(P0.05),但富集环境中育肥猪屠宰后24 h肌肉p H(p H24)显著高于贫瘠环境(P0.05);与大杜民和杜长民相比,杜长大生长至100 kg时间短(P0.001),日增重和胴体眼肌面积较大(P0.05),胴体平均背膘厚较小(P0.05);大杜民和杜长民p H24显著高于杜长大(P0.05)、肉色亮度(L*)显著低于杜长大(P0.05)。富集环境对育肥猪生产性能和胴体品质无显著影响,但有助于改善肉质。民猪杂交育肥猪生产性能稍差,胴体脂肪比例偏高,肉多汁性较好。     

Determination and Difference Analysis of DNA Methylation Content Both in Blood and Muscle Tissue of Pigs

In this experiment, DNA samples from parental lines Large White, Landrace, and Meishan pigs, and their hybrids Large White × Landrace, Landrace × Large White, Large White × Meishan, and Meishan × Large White pigs were used for the determination of DNA methylation content in both blood and muscle tissue. The differences about DNA methylation content between parental lines and their hybrids were analyzed. These will offer theoretical support from molecular level for heterosis. High performance liquid chromatography （HPLC） was firstly used to detect DNA methylation content. The average DNA methylation content in 163 DNA samples of muscle tissue was 16.92%, whereas, the average DNA methylation content in 182 samples of blood was 6.49%, the difference between which was especially prominent （P 〈 0.01）. In blood, the methylation content was lower than 10%, with the highest level of 9.93% in Landrace x Large White and the lowest of 2.97% in Landrace. The difference between Large White and Landrace was highly significant （P 〈 0.01）, but not significant between Large White and Meishan; and the differences between reciprocal cross hybrids in both hybrid systems were significant （P 〈 0.05）. In muscle tissue, the differences in methylation content among three parents were not significant （P 〉0.05）; and the differences between reciprocal cross hybrids in both hybrid systems were not significant （P 〉 0.05）, but between different hybrid systems, the hybrids had a significant difference （P 〈0.05）. The average methylation content in muscle samples was higher than that in blood samples, and the methylation in different tissues was different.     

藏猪和杜藏猪生长、肉质性状及脂肪沉积相关基因的表达差异分析

【目的】明确藏猪和杜藏猪(杜洛克父本与藏猪母本杂交F₁代)的生长和胴体性状及肉质指标等表型差异,并分析背最长肌中脂肪沉积相关基因的表达差异,为藏猪种质资源利用及猪脂肪沉积规律研究提供参考依据。【方法】以藏猪和杜藏猪为研究对象,分别测定其体长、体高和胸围等生长性状,屠宰率、背膘厚及眼肌面积等胴体性状,以及pH、肉色、蒸煮损失及肌内脂肪含量等肉质指标;并通过荧光实时定量PCR检测脂肪沉积相关基因在2种猪背最长肌中的表达情况。【结果】杜藏猪的左胴体重、右胴体重、屠宰前重、胴体长、体长、体高、管围和胸围均高于藏猪,且差异显著(P<0.05,下同),眼肌面积(33.00±3.84 cm2)也显著大于藏猪(16.83±1.81 cm2),背膘厚(13.15±2.48 mm)则显著低于藏猪(22.83±2.80 mm),藏猪与杜藏猪的皮厚、腹围和屠宰率无显著差异(P>0.05,下同);杜藏猪肌肉的pH-24 h、熟肉率、剪切力和含水率显著高于藏猪肌肉,而杜藏猪肉色的a-24 h值(10.30±1.06)和肌内脂肪含量[(2.48±1.44)%]显著低于藏猪。除GHR基因外,其他脂肪沉积相关基因的相对表达量均表现为杜藏猪低于藏猪,其中,ADIPOQ基因和FASN基因的相对表达量显著低于藏猪,IGF1基因、TNFa基因和Leptin基因的相对表达量极显著低于藏猪(P<0.01)。相关分析结果显示,GHR基因相对表达量与杜藏猪肌内脂肪含量呈显著正相关,FASN基因相对表达量与藏猪肌内脂肪含量呈显著正相关,IGF1基因相对表达量与藏猪背膘呈显著负相关。【结论】杜藏猪的肉质性状与藏猪相似,但杜藏猪具有更佳的生长性能,说明以杜洛克为父本与藏猪母本杂交得到的杜藏猪具有更优的生产效率。藏猪和杜藏猪的肌内脂肪含量差异与脂肪沉积相关基因的表达差异有关,即猪的肌内脂肪含量受多种脂肪沉积相关基因调控。     

Isolation,Identification and Tissue Expression Profile Analysis of One Novel Differentially Expressed Sequence Tag in the Longissimus dorsi Muscle from Meishan,Meishan × Large White Hybrid and Large White Pigs

In order to detect the molecular mechanism of heterosis in pigs, the mRNA differential display technique was performed to investigate the differences of gene expression in the Longissimus dorsi tissue from Meishan, Meishan × Large White hybrid and Large White pigs with nine 3'-end anchored primers in combination with ten 5'-end arbitrary primers and nearly 3 000 reproducible bands were examined. One novel expressed sequence tag (EST4,GenBank accession number: AY553914) that was differentially expressed in Meishan,Meishan × Large White hybrid and Large White pigs was isolated from the Longissimus dorsi muscle tissue and identified through semi-quantitative RT-PCR. BLAST analysis revealed that the 350 bp long EST (EST4) was not homologous to any of the known porcine genes.Tissue expression profile analyses showed that the EST4 was expressed in most of tissues.     

PLIN1第2、4外显子多态性与猪脂肪沉积性状的相关性分析

为探索编码脂滴包被蛋白的PLIN1基因对猪脂肪沉积的作用,随机选择190头杜×长×大三元商品杂交猪屠宰,采用常规方法测定部分脂肪沉积性状,同时采集样品提取DNA;运用PCR-SSCP技术对猪PLIN1基因第2、4外显子进行SNP筛查;采用一般线性模型分析所得基因型对各脂肪沉积性状的影响作用.在猪PLIN1基因第2、4外显子分别发现一处碱基替换突变.第2外显子的AA型背膘厚高于AB和BB型(P＜0.01),AA型剪切力值低于AB型和BB型(P＜0.01);第4外显子的CD型背膘厚高于CC型(P＜0.05),CD型肌内脂肪含量高于CC型(P＜0.01).结果表明,PLIN1基因的第2、4外显子SNP对猪脂肪沉积相关性状有显著作用.     

肉鸡肺动脉高压综合征自然病例肺微细动脉肌型化的观察

随机抽取12羽与缺氧有关的肺动脉高压\综合征（PHS）自然病鸡和12羽同种，同龄健康AA肉鸡，用组织形这方法对患PHS肉鸡和健康肉鸡肺细小动脉结构变化进行定量检测和比较分析，结果显示：患PHS肉鸡的肺细小动脉血管管壁面积与管总面积之比（WA／TA），中膜厚度与管外径之比均极显高于健康肉鸡（P＜0．01），以直径小于60um和直径小于200um的肺微细动脉 的末稍厚血管百分率和三型血管占位比例进行测定，结果患PHS肉鸡的肌化百分率也极显高于健康肉鸡（P＜0．01），组织病理学检查显示，血管内膜及中膜细胞增生，肥厚，揭示缺氧性肺动脉高压肉鸡的肺血管发生了以非肌性动脉肌型化，肌性动脉管壁增生，肥厚为主要特征的血管重构现象。