动物组织中β-兴奋剂类药物多残留酶联免疫检测方法的建立

应用直接竞争酶联免疫吸附技术,建立了一种快速检测动物组织中β-兴奋剂类药物多残留的方法,并对其技术性能进行了评价。结果表明,该方法的IC50浮动范围为0.4～0.7μg/L,对组织样本的检测限为0.5μg/kg;样本添加回收率为72.9%～103.5%,变异系数为5.8%～14.1%;可用于检测克仑特罗、沙丁胺醇、塞布特罗、妥布特罗、克仑潘特、溴布特罗、溴氯布特罗、马喷特罗。     

液相色谱-串联质谱法快速检测猪肉中25种β-受体激动剂

[目的]建立液相色谱-串联质谱法快速同时测定猪肉中克伦特罗、西马特罗、溴代克伦特罗、马布特罗、羟甲基克伦特罗、溴布特罗、福莫特罗、马贲特罗、苯氧丙酚胺、拉贝特罗、氯丙那林、沙丁胺醇、苯乙醇胺A、妥布特罗、特布他林、莱克多巴胺、菲诺特罗、克伦塞罗、齐帕特罗、克伦潘特、克伦特罗、西布特罗、班布特罗、丙卡特罗、沙美特罗25种β-受体激动剂的分析方法。[方法]样品经0.2 mol/L磷酸-甲醇(1∶1)提取,Bond Elut Plexa PCX小柱净化,Thermo Accucore Phenyl Hexyl(2.6μm,100 mm×2.1 mm)色谱柱分离,电喷雾正离子模式测定,内标法定量。[结果]25种β-受体激动剂在2.5~100.0μg/L呈良好线性关系,决定系数R2均大于0.990,在猪肉中的检出限为0.2~1.2μg/kg,在2.5、5.0和10.0μg/kg 3个加标水平下的回收率为83.70%~112.20%,RSD为0.18%~10.10%。[结论]该方法前处理简单、灵敏度高、适用性好,可用于批量猪肉中25种β-受体激动剂的快速确证分析。     

超高效液相色谱串联质谱法同时测定沼液中9种β-受体激动剂残留量

本文应用固相萃取及超高效液相色谱-串联质谱技术,建立了沼液中特步他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗和喷布特罗等9种β-受体激动剂残留的检测方法。样品经酶解、提取后,用MCX固相萃取小柱净化。采用0．1％甲酸水溶液与甲醇作为流动相进行梯度洗脱,经BHEC18色谱柱分离,通过多反应监测模式进行测定。9种β-受体激动剂在0．5～20ngmL。的范围内线性关系良好,相关系数（r）均大于0．999。沼液中添加回收率为75．2％～99．2％,批内RSD为1．8％～8．3％。批间RSD为2．1％～8．9％,检测限均为0．1ngg^-1。该方法能简单、快速、准确测定沼液中的9种β-受体激动剂。     

β2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立

【目的】建立β_2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法,为动物食源性β_2-受体激动剂类药物残留的快速检测提供技术支持。【方法】以沙丁胺醇多克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA的检测条件,建立一种快速检测猪尿中沙丁胺醇、卡布特罗、西布特罗、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、克伦潘特、可尔特罗、吡布特罗、马喷特罗、比托特罗与妥布特罗等12种β_2-受体激动剂类药物的间接竞争ELISA检测方法。【结果】建立的β_2-受体激动剂类药物间接竞争ELISA检测方法的最佳反应条件为:37℃,抗原以1∶10 000倍包被1 h,抗体以1∶40 000稀释作用40 min,酶标抗体以1∶20 000稀释作用40 min。采用建立的间接竞争ELISA最佳反应条件对猪尿中的β_2-受体激动剂类药物残留进行检测,结果表明12种β_2-受体激动剂类药物在0.1～20μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.952;检出限为0.15μg/L,定量限为0.5μg/L;在0.5与1.0μg/L的添加浓度下,回收率为68.4%～114.2%,批内、批间RSD分别为0.4%～10.1%和0.4%～12.5%。【结论】所建立的β_2-受体激动剂类药物残留ELISA检测方法操作简单、快速,灵敏度高,适用于猪尿中β_2-受体激动剂药物的筛选与检测。     

沙丁胺醇、溴化异丙托品联合普米克令舒雾化吸入治疗儿童哮喘急性发作疗效观察

目的:观察沙丁胺醇、溴化异丙托品联合普米克令舒雾化吸入治疗中、重度儿童哮喘急性发作的临床效果。方法:将中、重度哮喘急性发作患儿115例随机分为2组,对照组常规予以沙丁胺醇与溴化异丙托品雾化吸入,实验组在对照组基础联合普米克令舒雾化吸入。观察2组患儿咳嗽、喘息及肺部哮鸣音等临床表现在雾化吸入治疗前、治疗后15、30min和60min时改善状况。结果:实验组患儿治疗后咳嗽、喘息及肺部哮鸣音改善明显,与对照组相比有统计学差异(P0.05)。结论:沙丁胺醇与澳化异丙托品联合普米克令舒雾化吸入治疗儿童哮喘急性发作,疗效明显优于沙丁胺醇与溴化异丙托品。     

研究超高效液相串联质谱法检测β兴奋剂类快速前处理方法

本试验主要是采用内标法比较2种不同的前处理方法效果,液相色谱质谱法检测莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、西马特罗、氯丙那林、妥布特罗、特布他林等7种β-兴奋剂类药物在猪肝和牛肉基质上的加标回收情况,结果显示,在低(0.5μg/kg)、中(1μg/kg)、高(2μg/kg)3种添加浓度水平下,方法 1前处理平均回收率为76.32%~119.05%,RSD在1.57%~14.15%;方法 2前处理法平均回收率为80.23%~117.00%之间,RSD在0.85%~13.27%,2种方法均符合相关技术规范要求且相对稳定,但两者相比较,方法 2前处理相对简单快速。     

气相色谱-串联质谱法测定动物组织中6种β-受体激动剂残留量研究

建立了气相色谱-串联质谱同时测定动物组织中6种β-受体激动剂(克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、莱克多巴胺、特布他林、沙丁胺醇)残留量的检测方法。样品经乙酸乙酯提取,SCX小柱提取净化后,用BSTFA:TMCS衍生,再进行气相色谱-串联质谱测定,在子离子扫描模式下优化不同β-受体激动剂的碰撞能量。结果表明:该方法的相关系数为0.994~0.998,定量限为0.24~0.30μg/kg,检出限为0.08~0.10μg/kg,克伦特罗的线性范围为0.005~2.500μg/mL,溴布特罗的线性范围为0.002~3.000μg/mL,马布特罗、莱克多巴胺、特布他林的线性范围均为0.005~3.000μg/mL,沙丁胺醇的线性范围为0.010~2.000μg/mL。6种β-受体激动剂的回收率为79.7%~100.3%,精密度为1.2%~3.3%。     

布地奈德混悬液联合沙丁胺醇、溴化异丙托品雾化吸入治疗儿童哮喘

目的：观察布地奈德混悬液联合沙丁胺醇、溴化异丙托品雾化吸入治疗哮喘的效果。方法：急诊哮喘患儿88例随机分为2组，布地奈德混悬液联合沙丁胺醇、溴化异丙托品雾化吸入组(A组)46例，沙丁胺醇、溴化异丙托品联合吸入组(B组)42例。2组均用单剂量空气压缩泵雾化吸入。记录吸药前后喘息、哮鸣音记分和呼气峰流速(PEF)的变化。结果：A组患儿喘息及哮鸣音记分别于吸药后90min开始低于B组，而PEF在吸药后90min开始高于B组。结论：布地奈德混悬液联合沙丁胺醇、溴化异丙托品雾化吸入治疗急性哮喘的效果优于沙丁胺醇联合溴化异丙托品吸入治疗。     

西马特罗单克隆抗体的制备及胶体金快速检测卡的研发

在国家粮食安全战略下,瘦肉精对人们健康造成很大威胁和冲击,目前市面上三联卡较多,对于盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇3种类型的瘦肉精研究较多。通过制备西马特罗单克隆抗体,优化胶体金标记及C、T线包被条件,制备能够快速检测猪肉中的西马特罗残留量的胶体金快速检测卡。结果表明,单克隆抗体的免疫球蛋白亚类为IgG1,分子量为148.5 ku,染色体数目为83～91条,亲和常数为2.51×10⁸ mol/L,最适pH值为7.5,最佳抗体标记量为6μL/mL,最佳离心条件为8 000 r/min, T线最适包被浓度为1.0 mg/mL,C线包被浓度为0.5 mg/mL,对西马特罗的检测限（灵敏度）为10 ng/mL,与盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗无交叉反应,特异性好。与酶联免疫吸附法的20份样品符合率良好,提示新研发的检测卡检测结果准确、灵敏度高,可在屠宰、养殖环节中完成猪肉西马特罗的现场检测。     

β-激动剂多组分残留的酶免疫分析方法

制备并筛选能和多种β-激动剂反应的簇特异性抗体,建立能同时检测多种药物的酶免疫分析方法,为研制多组分残留检测试剂盒奠定基础。选取沙丁胺醇、克伦特罗和多巴胺3种代表性β-受体激动剂,分别与钥孔血蓝蛋白（KLH）偶联作为免疫抗原,与牛血清白蛋白（BSA）偶联作为检测抗原,免疫家兔获取抗血清,ELISA检测抗血清交叉反应率,筛选交叉反应性最大的抗体作为簇特异性抗体,用于建立ELISA方法并制作标准曲线。经测定获得的3种抗血清,其中的抗沙丁胺醇抗血清除对沙丁胺醇具有100%的反应之外,还对克伦特罗具有128%的交叉反应性,具有部分簇特异性。用沙丁胺醇抗血清建立了同时适用于沙丁胺醇和克伦特罗的ELISA分析方法,为多组分残留检测试剂盒的研制奠定了基础。