影响农杆菌介导的河北杨遗传转化的因素

从预培养时间、侵染菌液浓度、侵染时间、共培养时间及添加AS（乙酰丁香酮）5个方面,以卡那霉素抗性芽频率作为衡量指标,研究了各因素对河北杨遗传转化率的影响。优化筛选的最适转化系统为预培养2 d,农杆菌活化菌液1/2MS稀释10倍,侵染5 min,共培养4 d。按此方法河北杨叶盘转化率可达35%。西北林学院学报21卷第5期贾小明等影响农杆菌介导的河北杨遗传转化的因素     

鄂马铃薯3号遗传转化体系的构建与表达

以鄂马铃薯（Solanum tuberosum L.）3号为试验材料，将含有来源于黄芪的硒代半胱氨酸甲基转移酶基因（AbSMT）的质粒pBinAr进行PCR扩增以及酶切连接构建重组转化子pBI121-AbSMT，运用农杆菌转化法，设置农杆菌菌液浓度梯度、侵染时间以及共培养时间组合进行遗传转化，并且通过PCR鉴定以及GUS组织化学染色进行基因表达验证。结果表明，筛选抗生素是50.00 mg/L的Kan，农杆菌菌液浓度为0.50(OD600 nm)，侵染时间为8 min，共培养时间为3 d，能够实现鄂马铃薯3号高效遗传转化，同时成功构建了AbSMT基因转化的鄂马铃薯3号。     

芥菜农杆菌高效遗传转化体系初步建立

采用农杆菌导入法，探讨了影响芥菜农杆菌遗传转化效率的因素，优化了参数，初步建立了以MS 6-BA(2．0mg/L) NAA(0．2mg/L)为分化培养基，预培养时间3或4d，共培养时间4d，农杆菌浓度D600nm为O．5，浸菌时间10min，筛选压Kan为25mg/L的遗传转化体系。     

根癌农杆菌法转化康乃馨的条件探索

[目的]为构建高效的康乃馨遗传转化体系奠定基础。[方法]以康乃馨叶片为受体材料,通过抗G418筛选,探讨预培养时间、根癌农杆菌菌液浓度、共培养时间等因素对根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的影响。[结果]20 mg/ml G418是康乃馨叶片转化的适宜浓度。随着预培养时间的增加,康乃馨叶片的存活率降低,预培养2~3 d时抗性芽分化率较高。当根癌农杆菌OD600为0.5~0.8时,抗性芽分化率较高,适合康乃馨转化。共培养2~3 d时,康乃馨叶片生长状态好,抗性芽分化率最高。[结论]预培养、共培养各2~3 d,菌液浓度OD600为0.5~0.8是根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的适宜条件。     

影响农杆菌介导的花生遗传转化条件的研究

 利用花生幼叶高效再生体系，对影响农杆菌介导的花生遗传转化条件，抗生素（Km）筛选压、预培养时间、共培养时间进行了研究。最后确立的转化条件为：Km筛选压为100mg/L，预培养时间为1~2d，共培养时间为3d。并对得到的再生植株进行了PCR检测，初步证实了目的基因转到了花生基因组中。     

农杆菌介导的抗菌肽基因SPCEMA对马铃薯的遗传转化

为了得到马铃薯抗病材料,本研究利用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404转化马铃薯栽培品种“台湾红”,建立了优良的遗传转化系统:根癌农杆菌浓度以D600nm=0.5￣0.8为宜,感染时间以5min为宜;茎段和叶盘的预培养时间分别以4d和8d为宜,共培养时间皆以3d为宜。通过PCR和Sourhernblotting检测证明抗菌肽基因SPCEMA已成功导入其中。其茎段和叶片为的转化频率分别为10%和5.79%。     

根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化的一些影响因素

对根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化过程中涉及的外植体选择、预培养、共培养时间等因素进行优化。结果表明,马铃薯的茎段和叶片均能诱导出愈伤组织并分化成苗;在转化前对外植体预培养2d,再用OD600为0.5的农杆菌菌液侵染10min,共培养3d,转化效率较高。利用优化的农杆菌介导法进行转化,对再生苗进行PCR检测,结果表明,特异切割马铃薯纺锤块茎类病毒的核酶基因已导入了马铃薯。     

影响农杆菌介导朝仓花椒遗传转化因素研究

为建立农杆菌介导的朝仓花椒遗传转化体系,以朝仓花椒叶柄及茎段为转化受体,研究了预培养时间、侵染菌液浓度、侵染时间、共培养时间等因素对转化效率的影响。获得转化体系如下：外植体预培养3d,在OD600为0.5～0.8菌液侵染10min,共培养3d,延迟7d筛选,以30和50mg/L卡那霉素（Kan）进行梯度筛选。结果表明：...     

农杆菌介导的莴笋遗传转化体系初步研究

为了研究农杆菌介导的莴笋遗传转化的影响因素,建立莴笋高效遗传转化体系,通过设置不同预培养、共培养时间,探讨其对外植体芽分化率的影响;设置不同农杆菌菌液浸染浓度及浸染时间,探讨其对外植体致死率的影响。试验结果表明,对莴笋外植体预培养2d,外植体芽分化率最高;共培养0、1、2d,外植体芽分化率差别不大;当农杆菌菌液OD600值为0.3、0.5,分别侵染1、3、5min,外植体致死率相差不大。因此,在莴笋遗传转化中,采用外植体预培养2d、共培养2d,农杆菌菌液OD600值为0.5、侵染时间5min的遗传转化体系能提高莴笋的遗传转化率。     

根癌农杆菌介导山葡萄VaCBF3基因转化欧美杨111的研究

以欧美杨111为受体材料,利用农杆菌介导的叶盘法进行了山葡萄VaCBF3基因的遗传转化,分析了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间对转化效率的影响,并对获得抗性植株进行PCR检测。结果表明:欧美杨111遗传转化过程中适宜的预培养时间为3 d,适宜菌液浓度为OD600为0.3～0.4,适宜侵染时间为2～4 min,适宜共培养时间为3 d。经过对转化子的PCR鉴定,获得4株阳性转基因植株,初步说明外源山葡萄CBF3基因已导入至欧美杨111号中,转化体系已成功建立。     

农杆菌介导马铃薯转化体系的优化及转基因马铃薯的耐盐性研究

通过农杆菌介导的方式将獐茅液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因(AlNHX)表达在马铃薯中,并对影响马铃薯转化的几种因素(抗生素浓度、农杆菌菌液浓度、共培养时间等)进行优化。结果表明:最适农杆菌菌液浓度是OD600=0.6,最适侵染时间是5min,最适共培养时间是2d,马铃薯转化中最适头孢霉素浓度是400mg/L;经PCR检测确认的转基因马铃薯植株在含0.7%NaCl的培养基中可以生长,而野生型马铃薯无法在此培养基中正常生长。在盐胁迫条件下,转基因马铃薯的Na~+、K~+含量及K~+/Na~+的比值均高于野生型马铃薯。研究证实马铃薯植物的的耐盐性可以通过农杆菌转化导入獐茅液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因而得到提高。     

农杆菌介导的甘蔗遗传转化研究

选用在组织培养过程中能够产生分泌较多酚类物质的甘蔗基因型福农８６／１７为材料．以幼叶切段为外植体，采用叶盘法与土壤根癌农杆菌菌珠ＬＢＡ４４０４（ｐＡＬ４４０４：：ＰＴＤ１）菌液并培养。外植体设预培养１天、３天、５天、７天和１０天五种时间，农杆菌设稀释１０倍和２０倍两种浓度，共１０种处理组合，共培养４８小时。结果预培养５天，农杆菌稀释１０倍和２０倍两种处理组合的外植体．在含卡那霉素３００ｍｇ／Ｌ的选择诱导和选择继代培养基中诱导并形成抗性愈伤组织。     

影响复合针介导的大豆子叶节遗传转化的主要因素的研究

以萌动1d的半片大豆种子为试验材料,用复合针针刺2次,农杆菌LBA4404/pCAMBIA1201侵染,共培养3d,GUS染色检测瞬时表达效率。结果表明:不同基因型和乙酰丁香酮(As)浓度对转化效率有显著影响,As浓度为100或200μmol/L时,转化效率显著提高,其中以合丰25的转化效率最高,平均为8.6个蓝色斑点;农杆菌的侵染时间以30 min为宜;农杆菌的侵染浓度以OD600为0.6时最佳,平均为9.8个蓝色斑点。     

影响农杆菌介导草菇遗传转化的因素研究

以草菇Volvariella volvacea菌株V51为受体材料,用农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导法转入抗冷冻蛋白基因(afp),探索不同的转化受体、农杆菌种类、乙酰丁香酮(AS)的浓度、共培养的温度、时间等因素对转化效率的影响,并采用PCR及Southern杂交检测afp基因是否整合到草菇的基因组中.结果表明:以D660 nm为0.15的EHA105为侵染的农杆菌菌株,加入200μmol/L AS进行预培养,侵染菌丝球后转入含有AS为200μmol/L的IMA培养基上,28℃,共培养60 h为最佳转化条件.PCR与Southern杂交结果证明afp基因已整合到草菇的基因组中.     

根癌农杆菌介导的苦瓜遗传转化

用含质粒载体pB I121的根癌农杆菌转化“南屿”苦瓜子叶节,通过对gus基因瞬时表达情况进行观测,对根癌农杆菌介导的苦瓜遗传转化体系相关因素进行研究.结果表明,苦瓜子叶节必须预培养3 d左右,用D600nm值为0.3-0.5之间的菌液浸泡,侵染时间为10 min,然后共培养3-4 d.再生植株经PCR检测初步证明gus基因已成功整合到苦瓜基因组中.     

百合遗传转化体系的建立

通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,建立了百合金黄精灵(ButterPixie)鳞茎的遗传转化体系。确定了适宜百合转化的筛选剂草甘磷的浓度:芽分化阶段为1.6mg.L-1,根分化阶段为0.8mg.L-1。除菌剂头孢的使用浓度为500mg.L-1。并且确定OD600=0.5的菌液浓度侵染20min,共培养pH5.2培养3d时对百合有最高转化效率。研究确定了预培养时间为4d,在共培养培养基中去除NH4NO3或加入阿魏酸均可提高转化效率。得到抗性植株12株,PCR初步检测发现其中7株为PCR阳性植株,转化效率为58.3%。     

番木瓜美中红品种体胚转化体系的建立

利用已构建的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)基因,通过农杆菌介导法,建立美中红番木瓜(Carica papaya L.)体胚的转化体系。结果表明:共培养时,当农杆菌EHA105携带pCAMBIA2300质粒时,农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.1,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素浓度应以750 mg/L为宜;当农杆菌EHA105携带pBI121质粒时,则农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.8,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素的浓度则为500 mg/L;加上滤纸处理,抗生素洗涤以及洗涤后的干燥处理,可完全抑制体胚表面的农杆菌生长。对再生的番木瓜体胚进行PCR检测,结果表明PRSV基因已转入体胚中,但还需要成苗后的进一步检测。     

处理时间对农杆菌介导甘蓝转化中抗性芽分化率的影响

以甘蓝下胚轴为材料,研究根癌农杆菌转化过程中预培养、感染、共培养各阶段中处理时间对出愈率和抗性芽分化率的影响。结果表明,不同阶段处理时间对甘蓝的出愈率和转化效率有明显的影响,甘蓝转化过程中预培养、感染、共培养的最佳处理时间分别为36h、5min、48h。