一种适于黄瓜不同组织总RNA提取的方法

在比较了Trizol试剂盒法、异硫氰酸胍法和改良CTAB法用于黄瓜总RNA的提取效果后,表明改良的热CTAB/酸酚法较其他两种方法能更有效地提取黄瓜总RNA,该方法能有效提取黄瓜不同器官,包括根、茎、叶、花、幼嫩果实的总RNA。该方法简单经济,能有效去除黄瓜植株不同部位的多糖和多酚类等次生物质,获得完整的总RNA。经紫外分光光度计分析,A260 nm/A280 nm比值在1.9~2.0之间,提取率在80~100μg/100mg左右。利用该法所提取的总RNA成功地对ACC合酶基因(CS-ACS1)片段进行了反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)。     

甘蓝型油菜籽粒RNA提取方法的探讨

用CTAB法、SDS法、上海华瞬植物叶RNA抽提试剂盒分别提取甘蓝型油菜花后40 d的籽粒RNA.用电泳法和A260/A280与A260/A280的比值比较提取RNA的质量.结果发现:用SDS法、上海华瞬植物叶RNA抽提试剂盒都没有成功提取RNA,只有CTAB法成功地提取出了完整的甘蓝型油菜籽粒RNA.用CTAB法提取的总RNA的A260/A230与A260/A280的值分别为2.06和1.94,说明采用该方法提取的RNA污染小,纯度较高,获得的RNA产量也较高.通过逆转录实验和基因片段的克隆也证明获得的RNA质量比较高,可以直接满足一般的分子实验.     

Trizol法提取厚皮甜瓜果实RNA条件的筛选

采用改良的Trizol法提取厚皮甜瓜‘银帝’果实中的RNA.利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和RT-PCR法进行纯度、浓度和RNA完整性检测.结果表明:1 mL Trizol用于提取200 mg甜瓜果实量时,得到的RNA产量最大,氯仿抽提2次时提取到的RNA的A260/A280在1.9~2.0之间,所提取的RNA无蛋白质和DNA污染,室温沉淀和低温沉淀对RNA的产量无明显影响.将提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段,扩增的条带与设计大小一致,验证了该方法提取的RNA可用于RT-PCR.     

杉木总RNA 3种提取方法的比较研究

通过3种杉木总RNA提取方法的比较试验,找到了一种适用于杉木总RNA提取的新方法.用该方法提取杉木幼茎总RNA具有正常的光谱吸收,D_(260nm)/D_(280nm)比值为1.90～2.03,D_(260nm)/D_(280nm)比值为2.84～4.04,经琼脂糖电泳后,28S和18s RNA条带清晰,提取的RNA可用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA文库的构建,同时该方法还适用于青蒿总RNA的提取.     

油松成熟胚总RNA的提取方法

[目的]对油松成熟胚总RNA的提取方法进行比较,以期得到完整的高质量油松成熟胚RNA。[方法]以油松成熟胚为材料,用SDS法、Trizol法和CTAB法及改良的SDS法对油松成熟胚总RNA进行提取,以紫外分光光度计测OD值,并用琼脂糖凝胶电泳检验提取效果。[结果]改良SDS法提取的RNA产率高,完整性好,A260/A280为1.97,A260/A230为2.08,28 S、18 S、5 S条带清晰且28 S亮度是18 S的2倍。通过RT-PCR检测,ds cDNA片段的弥散带分布范围在0.3～3.0 kb,进一步验证改良的SDS法可获得高质量的RNA,用于后续的分子生物学研究。[结论]改良SDS法成本低,操作简单,提取时间短,RNA质量好,是多酚多糖植物总RNA提取比较有效的方法。     

番木瓜果肉RNA提取方法的比较

为了从成熟末期的番木瓜果肉中提取纯净完整的RNA,本试验采用了TRIzol试剂盒、改良TRIzol、SDS法、CTAB法等4种方法从番木瓜果实中提取总RNA。从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这几种方法进行比较和评价,结果表明,采用改良TRIzol所得RNA完整性较其他方法好,条带清晰无明显降解,28S和18S RNA的亮度比约为2∶1,D260/D280达1.9且得率较高,为380.5μg.g-1,经RT-PCR后得到一特异条带表明该RNA可用于后续分子生物学操作。     

番木瓜果实总RNA提取方法比较

通过吸光比值分析和非变性胶电泳,对番木瓜果实RNA不同提取方法进行了比较研究,结果表明,Trizol试剂法提取番木瓜果实RNA的OD260/OD230值在1.63～1.97、OD260/OD280值在1.79～2.00之间,具有方便快捷、完整性好、受多糖多酚影响较少以及无DNA和蛋白质污染等优点,对类似番木瓜果实成分的其他作物的RNA提取具有一定的借鉴意义.     

改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA

为了从成熟的肥城桃果实中提取纯净完整的RNA,本试验在原CTAB法的基础上进行了改进,并对RNA的完整性、产率和纯度等方面进行评价。结果表明,采用改良CTAB法所得RNA完整性好,条带清晰,无明显降解,28S和18S rRNA的亮度比约为2：1,A260／A280达1．89,且产率较高,为356．21ug/g,经RT—PCR后得到一特异条带,表明该RNA可用于后续分子生物学操作。     

2种方法从大鼠晶状体中提取总RNA及评测

[目的]测评2种方法从大鼠晶体中提取总RNA的效果[方法]采用2种方法从大鼠晶状体中提取总RNA,通过测定总RNA的浓度以及A260/A280、A260/A230、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR方法对其进行评价。[结果]使用柱式法从大鼠晶状体中提取总RNA,其28S、18S亚基清晰可见,Nano Drop2000测定显示A260/A280、A260/A230均在1.8~2.0,可用于反转录聚合酶链反应等下游试验。Trizol法提取结果显示总RNA降解较多,不适合进行下游试验。[结论]柱式法操作简便,全程可在常温下进行,总RNA质量高,适宜于实验教学及科研。Trizol法提取总RNA操作要求相对较高,且易受到苯酚污染及乙醇残留,但适合抽提大量样本的总RNA,对于实验教学有一定难度。     

番茄叶片总RNA提取方法的比较

番茄叶片富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质,用普通方法提取番茄叶片总RNA时很难将其去除,试验比较研究了RNA plant Reagent、UNIQ-10柱总RNA抽提试剂盒和改进Trizol三种方法的提取效果。结果表明,改进的Trizol法能从番茄叶片中提取纯度较高的RNA,凝胶电泳显示条带清晰完整,分光光度计检测A260/A280比值为1.88。用该方法提取的番茄叶片总RNA可以用于逆转录、RT-PCR、Northern blot等分子生物学研究。     

适宜西瓜mRNA差异显示分析的几种总RNA提取方法的比较

以西瓜花蕾为材料,初步建立了mRNA差异显示技术体系。利用改进的SDS/酚法、改进的异硫氰酸胍法和BIOZOL试剂提取法提取西瓜花蕾总RNA,比较RNA产率、纯度和电泳图谱等分析来确立适于西瓜花蕾RNA分离的方法。研究结果表明,改进的异硫氰酸胍法提取的RNA呈现28S rRNA,18S rRNA和5S rRNA 3条较清晰的条带,其A260/A280值可达1.944,具有很高的纯度。用异硫氰酸胍法提取的总RNA进行差异显示分析表明,可得到理想的扩增片段。     

苹果黑星病菌DNA提取方法研究

采用CTAB法、SDS法、Parker法及改进的SDS法提取苹果黑星病菌的DNA,经紫外分光光度计测定,改进SDS法提取的DNA得率较其他3种方法高,约为Parker法的2倍。改进SDS法提取的DNAA260nm/A280nm值为1.700～1.900,DNA纯度较高,而其他3种方法提取的DNAA260nm/A280nm值均高于1.900,DNA中所含RNA的量较高。4种方法提取的DNA在230nm波长处的吸收值分别为0.658,0.257,0.926和0.208,说明DNA不同程度地被酚类物质所污染,但改进的SDS法提取的DNA受污染程度最小。     

适合核桃AFLP分析用的DNA提取方法研究

为从核桃叶片中提取高质量的基因组总DNA,比较了9种DNA提取方法。结果表明,改良的CTAB法9提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8~2.0,用0.8%琼脂糖胶电泳,为一条清晰的带,蛋白、多糖、酚类物质、RNA等去除较彻底,DNA无降解现象,该DNA能够适应AFLP分析的要求。     

狗牙根基因组DNA提取方法的比较

以狗牙根的嫩叶为材料,在传统CTAB法的基础上加以改良,建立了狗牙根基因组DNA的CTAB提取方法.得到的DNA经核酸蛋白质分析仪测得A_(260)/A_(280)值处于1.69～2.02之间、A_(260)/A_(230)集中处于1.82～2.08之间,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条明亮主带并无拖尾现象,经ISSR-PCR检测出现清晰稳定的条带,说明改良CTAB法提取得到的DNA完整性好,纯度高,适用于分子标记等分子生物学的研究.     

豚鼠牙齿组织总RNA的提取研究

[目的]研究对RNA丰度值低、硬度大、处理困难的牙齿组织总RNA的提取和纯化技术。[方法]采集10只Hartley豚鼠的切齿和臼齿,分别对其进行了总RNA的提取和纯化,对所提纯的总RNA进行了琼脂糖凝胶电泳鉴定,以及浓度和纯度的测定。[结果]切齿和臼齿总RNA均可见明显的28S、18S和5S三条带,RNA浓度均大于100 ng/μl,A260/A280值均在1.7～2.0之间,A260/A230值在0.1～0.7之间,总RNA的提纯效果较好。[结论]为动物硬组织总RNA的提取提供了技术参考。     

一种快速高效适于柑桔AFLP分析的DNA提取方法

利用改进的CTAB法提取了柑类、桔类、橙类及部分柑桔杂交实生后代等120多个品种的基因组,结果表明:该方法提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8～1.9,1%琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象,DNA的纯度和质量能满足AFLP分析要求.     

菠萝果实不同部位总RNA提取方法比较

以不同发育时期和不同部位的菠萝果实为材料,比较了改良SDS法、改良CTAB法和Trizol试剂盒法提取RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA差异明显,其中改良SDS法的效果最佳,其提取的RNA质量较好,无DNA污染,OD260/OD280和OD260/OD230接近2.0,产量达到464.3μg/g.FW以上,该方法提取的RNA能满足RT-PCR、Northern blot和cDNA文库建立等分子生物学研究的需要。     

部分枣属植物硅胶干燥叶片DNA提取方法的比较

以硅胶干燥15 D和半年的3种野生枣属植物叶片为试材,分别采用简易CTAB法、高盐沉淀法和高盐低PH法3种方法提取基因组总DNA,通过A260/A280、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增分析对提取的基因组DNA进行了鉴定。半年内不同保存时期的材料对于DNA提取没有明显差异;高盐沉淀法所得DNA纯度最高。     

人参根组织RNA提取方法的研究与优化

针对人参根组织中多酚和多糖类物质含量较高的特点,比较了CTAB-LiCl法、pBIOZOL植物提取试剂法、植物RNAout法和优化的Trizol法4种RNA分离提取方法。结果表明:4种方法均能从新鲜的多年生人参根组织中分离提取到总RNA。其中优化的Trizol法能有效地抑制多酚和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的根组织中获得完整性好的总RNA,每克人参根组织RNA产量为100～120μg,OD260/OD280为1.8～2.0,OD260/OD230为2.0～2.3。