链霉菌分解角蛋白的生化机制研究 Ⅱ角蛋白分解过程中含硫化合物变化规律的初步探讨

弗氏链霉菌Ｓ－２２１变种在分解利用羽毛角蛋白过程中产生角蛋白酶,使角蛋白不断地降解成多肽或游离氨基酸的同时,角蛋白中的硫也随之转化成巯基化合物、Ｈ２Ｓ和硫酸盐３种含硫化合物形式存在于分解产物中,并对３种含硫化合物形成过程进行了初步探讨。     

链霉菌分解角蛋白的生化机制研究

对弗氏链霉菌Ｓ－２２１变种分解角蛋白的生化机制进行了初步研究。该菌在角蛋白底物作用下诱导产生胞外角蛋白酶。它是一种复合蛋白酶,含有二硫键还原酶和多肽水解酶等多种酶活性组分,其中,二硫键还原酶是分解角蛋白的关键酶,二硫键还原酶首先作用于角蛋白中的二硫键,使角蛋白高级结构解体形成变性角蛋白,然后变性角蛋白在多肽水解酶的共同作用下逐步水解成多肽,寡肽和游离氨基酸,使角蛋白彻底分解。在角蛋白分解过程中,角蛋白中的硫也随之转化成巯基化合物,Ｈ２Ｓ和硫酸盐３种含硫化合物存在于分解产物中。     

—株分解羽毛角蛋白的弗氏链霉菌变种的初步鉴定

自土壤中分离到链霉菌Ｓ－２２１菌株，该菌株对羽毛角蛋白有较强的分解利用能力。通过对该菌的培养特征、形态特征和生理生化特性测定，结果与已知的弗氏链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｒａｄｉ－ａｅ）形态特征和生理生化特性上基本相似，但在培养特征和分解利用羽毛角蛋白的特性方面有较大的差异。因此Ｓ－２２１菌株初步鉴定为弗氏链霉菌的一个变种，定名为弗氏链霉菌Ｓ－２２１变种（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｒａｄｉａｅｖａｒ．Ｓ－２２１Ｔｕ，１９９３）。     

4种含硫化合物对链霉菌B221固体发酵羽毛角蛋白过程的影响

利用自行分离得到的链霉菌B221固体发酵羽毛角蛋白,设置硫酸钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠和二硫苏糖醇4种含硫化合物添加组,分析发酵后7 d的发酵物中角蛋白酶活力、可溶性蛋白含量以及各种含硫化合物的消长变化规律。结果表明添加的4种含硫化合物对角蛋白酶都具有激活作用,但没有显著增加发酵产物中可溶性蛋白的含量;亚硫酸盐含量、二硫键化合物含量和S-磺酸半胱氨酸类物质含量之间存在着密切的相关性,B221固体发酵角蛋白过程中存在着亚硫酸盐解作用;硫代硫酸盐含量、二硫键化合物含量、S-磺酸半胱氨酸类物质含量、巯基化合物含量之间存在着密切的相关性,B221固体发酵角蛋白过程中存在着另一种降解机制——硫代硫酸盐解作用。     

链霉菌分解角蛋白的生化机制研究 Ⅲ含硫化合物对角蛋白酶作用机理和角蛋白降解的生化机制初步研究

硫酸钠、亚硫酸钠和巯基乙醇对角蛋白酶具有强烈的激活作用,使角蛋白酶活力分别依次提高了４,７和２０多倍,其主要表现作用于角蛋白酶中的二硫键还原酶。亚硫酸钠在０．０１ｍｏｌ／Ｌ浓度下不仅作用于二硫键还原酶,而且还作用于多肽水解酶。硫代硫酸钠对二硫键还原酶有强烈的抑制作用。角蛋白酶降解羽毛角蛋白首先是角蛋白酶中的二硫键还原酶使角蛋白中二硫键裂解产生变性角蛋白,然后在多肽水解酶的共同作用下,将变性角蛋白逐渐分解成多肽、寡肽和游离氨基酸,使角蛋白彻底分解。角蛋白酶中的二硫键还原酶是降解角蛋白的关键酶。     

羽毛角蛋白分解菌的富集培养和分离筛选

以羽毛角蛋白为唯一氮源，采用观察培养物中完整羽毛的腐烂程度和培养液的双缩脲反应，从６０多个土样的富集培养物上分离到７０００余个菌株，初筛得到具有一定分解利用羽毛角蛋白能力的６００余个菌株。通过进一步摇瓶复筛，获得了分解利用羽毛角蛋白能力很强的一株放线茵Ｓ－２２１和一株真菌ｎｆ－８２。它们在含有８％羽毛粉发酵基质中，３４℃摇瓶发酵９６ｈ，使发酵液的可溶性蛋白达４～５ｇ／１００ｍＬ，蛋溶指数达０．５以上。     

链霉菌(Streptomyces spp·)对几种蔬菜病原菌的拮抗作用

测定了２６株链霉菌对番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、甘蓝黑腐病菌、白菜软腐病菌和大肠杆菌这５种病原菌的抑菌作用。结果发现：在供试的２６株链霉菌中,菌株Ｍｅｎ－ｍｙｃｏ－９３－６３、６３、Ｍｙｃｏｓｔｏｐ、ＧＳ－９３－１０、ＧＳ－９３－３和ＧＳ－９３－２３对番茄早疫病菌,菌株１５、６３、ＧＳ－９３－１０、９３和Ｍｙｃｏｓｔｏｐ对番茄灰霉病菌,菌株３２、ＧＳ－９３－２、ＧＳ－９３－３、ＧＳ－９３－２３和９３对甘蓝黑腐病菌,菌株ＧＳ－９３－３、ＧＳ－９３－２３１、ＧＳ－９３－１０和Ｍｅｎ－ｍｙｃｏ－９３－３８对大肠杆菌抑菌作用较强,它们的抑菌活性明显高于对照化学药剂,白菜软腐无抑菌活性强的菌株,只有菌株ＧＳ－９３－１０和ＧＳ－９３－２３１抑菌活性中等。     

农用抗生素S—921有效组分的分离纯化及部分理化性质研究

通过酸性Ａｌ２Ｏ３柱层析将Ｓ－９２１抗生素的有效组分从该菌株发酵液中分离出，并经甲醇－乙醚溶剂系统纯化，获得晶品。对期部分理化性质研究的结果表明：该抗生素有效组分溶于水，微溶于甲醇，不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂，１４０℃开始分解，其水溶液的ＰＨ为４．７，其水溶液在１００℃以内处理５ｍｉｎ，活性基本无变化，用１２１℃处理５ｍｉｎ，活性下降１／２，在水溶液中其紫外最大吸收在２９０ｎｍ、３０４ｎｍ及３１８     

耐热链霉菌B221产生角蛋白酶的液体发酵条件研究

以羽毛粉为底物,采用链霉菌(Streptomycessp.)B221液体发酵生产角蛋白酶,考察了温度、pH值、氮源、碳源以及接种菌量对角蛋白酶生成的影响。结果表明,该菌能够分解羽毛角蛋白,产生角蛋白酶,且在40℃、pH值为9.0、接种量为5%时酶活力最强。与培养基中只含有羽毛的发酵过程相比,添加蔗糖更有利于提高角蛋白酶的活性,而葡萄糖和可溶性淀粉对酶的活性则有不同程度的抑制作用;添加NH4C l和KNO3对角蛋白酶活性均有一定的促进作用,而尿素和蛋白胨则对角蛋白酶活性有抑制作用。本试验研究结果为进一步利用微生物技术手段开发羽毛角蛋白资源奠定了基础。     

丁草胺和杀草丹对稻田土壤放线菌及其白色链霉菌的影响

丁草胺和杀草丹对稻田土壤放线菌及其白色链霉菌的影响＊余柳青１徐福强２俞圣康３李扬汉４应存山１（１中国水稻研究所，杭州３１０００６；２浙江省湖州市农业科学研究所；３浙江省海宁市植保站；４南京农业大学）ＴｈｅＥｆｅｃｔｏｆＢｕｔａｃｈｌｏｒａｎｄＳａｔｕ...     

树脂法提取农抗S—921研究

本文研究了不同树脂对Ｓ－９２１抗生素的吸附性能，并对吸附性能优良的树脂进行了洗脱性能比较，结果为：Ｚ１树脂对Ｓ－９２１抗生素具有较好的吸附及洗脱性能，对发酵液中Ｓ－９２１抗生素的吸附最量大为８．９×１０＾４μｇ／ｍｌ，Ｚ１树脂最佳的洗脱剂为洗脱剂７，以洗脱剂７进行动态洗脱，流速为４．４ｍｌ．ｃｍ＾－２．ｍｉｎ＾－１，洗脱液浓度最高达８×１０＾４μｇ／ｍｌ，洗脱液体积为树脂用量的３倍，其洗脱率达９８     

链霉菌B221的角蛋白降解机制初探

利用本实验室自行分离得到的链霉菌B221液体发酵分解羽毛角蛋白,在第2d到第3d角蛋白降解最为迅速,5d后角蛋白降解率达到82.7%。发酵液的无细胞上清液中检测到角蛋白酶活,最大酶活出现在第4d。在角蛋白降解率与角蛋白酶活之间的不完全对应,揭示可能还存在非酶降解途径。硫酸盐是角蛋白降解过程中硫元素的主要转化形式。同时在发酵液中检测到亚硫酸盐,其含量变化与酶活、降解率、可溶性蛋白、巯基化合物的变化存在很强的相关性,表明亚硫酸盐在角蛋白降解中可能起到非常关键的作用。链霉菌B221降解角蛋白的过程中不但存在角蛋白酶降解途径,而且存在非酶降解途径—亚硫酸分解作用。     

羽毛角蛋白电泳谱型的分析

本文用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳（ＳＤＳ—ＰＡＧＧＥ）对鸡羽毛角蛋白进行分离，结果证实，鸡羽毛样品有３～４个区带，主要分布在低分子量区域（＜１７０００道尔顿），绒羽和副羽角蛋白主要分布在１００００和６０００道尔顿区带，正羽羽片和羽茎的角蛋白主要分布在１４５００和１００００道尔顿区带．     

高温纤维素分解菌的分离、筛选及鉴定

［目的］为研制堆肥高温菌剂和生产高温纤维素酶奠定基础。［方法］从牛粪自然堆肥中分离出高温纤维素分解纤维素菌,并测定其外切纤维素酶活（C1酶）、羧甲基纤维素酶活（CMCase）、FPA酶活（FPase）。［结果］从5种高温纤维素分解菌中,筛选出分解纤维素较强的高温细菌HB4和高温霉菌HM。［结论］高温细菌HB4的C1酶、CMCase、最高,分别为0.016 1 IU/ml、0.923 8 IU/ml;高温霉菌HM的FPA酶活最高,为1.053 5 IU/ml。经初步鉴定HB4为热酸菌属（Acidothermus）,HM为链孢霉菌属（Neurospora）。     

角蛋白酶的提取和理化性质的初步研究

用弗氏链霉菌Ｓ－２２１变种的羽毛粉发酵液离心后上清液经８０％浓度乙醇沉淀离心提取的角蛋白酶，酶比活力１２４．８ｕ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ，纯化倍数３．６，酶活力回收率５８．８％．酶解羽毛粉的最适ｐＨ值９．０，在ｐＨ６～９范围处理３０ｍｉｎ酶活性稳定；最适温度５０℃，在７０℃以内处理３０ｍｉｎ活性稳定．酶能被巯基乙醇激活，被ＭｇＳＯ４，ＣａＣｌ２，ＨｇＣｌ２抑制。     

龟裂链霉菌（Streptomycesrimosus）原生质体制导与再生条？…

报道了龟裂链霉菌原生质体制备与再生最佳条件和该原生质体对抗生素的抗性结果。在Ｓ生长培养其中加入φ＝１％甘氨酸进行菌丝体培养２４ｈ,原生质体制制备最佳条件为：溶菌酶浓度φ＝３％、     

龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)原生质体制备与再生条件研究

报道了龟裂链霉菌（ Ｓｔｒｅｐｔｏｍ ｙｃｅｓ ｒｉｍｏｓｕｓ） 原生质体制备与再生最佳条件和该原生质体对抗生素的抗性结果。在 Ｓ生长培养基中加入φ＝ １ ％ 甘氨酸进行菌丝体培养２４ ｈ ,原生质体制备最佳条件为：溶菌酶浓度φ＝ ３ ％ 、酶解温度２８ ℃、酶解时间９０ ｍｉｎ ,其制备的原生质体数达到６ ．０ 亿个／ ｍ Ｌ 以上;原生质体最佳再生培养基为 Ｒ５ 再生培养,其再生率达到４６ ％ 。     

几种放线菌处理猪粪效果的试验与分析

采用室内培养方法,研究评估了细黄链霉菌(Streptomycesmicroflavus)、抗生链霉菌(Streptomycesantibioticus)、灰色链霉菌(Streptomycesgriseus)及其组合对猪粪恶臭化合物排放、pH值、养分含量和主要菌群的影响。结果表明,接菌处理后,降低了NH3、H2S的挥发,减少了戊酸(3.44%￣41.56%)、异戊酸(9.64%￣42.77%)等挥发性脂肪酸含量及其产生菌梭菌(3.88%￣29.81%)和优杆菌(3.40%￣29.50%)数量,而增加了猪粪中全N、NO-3-N、全P、速效P、速效K等养分含量。在这3种放线菌及其组合中,无论是在提高猪粪养分含量还是降低恶臭气体及其产生菌(梭菌、优杆菌)方面,单独添加细黄链霉菌都表现了最优的生产性能。     

产几丁质酶链霉菌SO1菌株的筛选及培养条件

从土样中分离获得的链霉菌ＳＯ１菌株在产酶培养基中，２８℃振荡培养７天，其胞外几丁质酶活力可达１８０９ｕ／ｍｌ。实验表明，不同碳、氮源及诱导物对ＳＯ１菌株产几丁质酶有不同的影响，以酵母粉对产酶的促进作用最为明显，比对照提高了７５．２％。部分脱乙酰几丁质、胶体几丁质及几丁质均可作为ＳＯ１菌株产几丁质酶的诱导物，其中以几丁质诱导产酶的效果最好。     

链霉菌的抗药性和营养缺陷型标记研究

对吸水链霉菌应城变种和泾阳链霉菌进行了抗药性和营养缺陷型突变株标记。２种链霉菌对ＮＴＧ的诱变反应基本相似，在ＮＴＧ用量为３ｍｇ／ｍＬ、诱变致死率达９９％时，营养缺陷型突变频率较高，富集培养能提高营养缺陷型检出频率，所获营养缺陷型菌株以氨基酸缺陷型为主。