几种因素对芹菜CELⅠ核酸酶提取的影响

为有效提取芹菜CEL Ⅰ核酸酶和进一步利用它建立点突变检测技术,分析了品种、器官、发育时期和提取液pH值对其提取量的影响,并以含有单个错配的DNA异质双链为底物鉴定其对错配切剖的酶学活性.结果表明:不同芹菜品种和器官间CEL Ⅰ提取量的差异分别达到显著和极显著水平,在比较的3个不同品种(‘雪白’、‘文图拉’和‘泰国黄心芹’)中,以品种‘泰国黄心芹’的CEL Ⅰ提取量最高;而在测定的3种不同器官中,叶片的CEL Ⅰ提取量远远高于茎秆和根;以‘上海黄心芹’为材料比较发育时期对提取量的影响表明,生殖生长期的CEL Ⅰ提取量明显高于营养生长期;缓冲液pH值对CEL Ⅰ提取量也有重要影响,pH 7.5缓冲液的CEL Ⅰ核酸酶提取量高于pH5.5和pH9.5;酶学活性鉴定显示,CEL Ⅰ核酸酶粗提物能有效地识别和切割DNA异质双链中的碱基错配.     

芹菜韧皮部蛋白质AgPP2-2基因的克隆与表达

以地域来源不同和性状特性差异较大的3种芹菜(六合黄心芹、津南实芹和美国西芹)为试验材料,分别克隆芹菜韧皮部蛋白质基因AgPP2-2。序列分析结果表明,3个芹菜品种的韧皮部蛋白质基因AgPP2-2均含有1个540 bp的开放阅读框及196 bp和167 bp的2个内含子。3种芹菜中的韧皮部蛋白质基因AgPP2-2分别编码179个氨基酸,在核苷酸水平上有4个碱基的不同,编码的氨基酸有3个位点的差异。3个芹菜品种的韧皮部蛋白质AgPP2-2与忽地笑等植物的韧皮部蛋白质相似度较高,具有PP2超家族保守结构域。这些AgPP2-2蛋白质氨基酸组成与理化性质差异较小,都属于疏水性蛋白质,二级结构非常相似,其中卷曲和折叠结构都是主要的组成部分。不同品种芹菜的不同组织表达分析结果显示,3种芹菜中,AgPP2-2基因在茎中的表达量最高,根和叶中其次,花中表达量最低,具有明显的组织特异性。不同逆境处理表达分析结果初步显示,干旱、盐碱、低温、高温胁迫导致芹菜中AgPP2-2基因表达量均有不同程度的下降,高温胁迫大于低温胁迫,干旱胁迫大于盐碱胁迫,这为阐明AgPP2-2基因在芹菜逆境调控中的作用提供了依据。     

芹菜中核酸内切酶CEL I的提取和应用概述

CEL I是从芹菜中分离出来的一种单链特异性核酸酶,属于S1核酸内切酶家族中的一种,能准确切割异源双链DNA错配位点。概述了CEL I酶的分离技术及其在发现单核甘酸多态性(SNP)方面的应用,为从事动、植物及人类遗传研究的科技工作者提供参考。     

几个甘蔗品种的过氧化物酶活性及其同工酶多样性的比较研究

在粤农７６／１６９,Ｑ７５,桂糖１号,福蔗７７／３００３,印度ＣＯ３３１和ＰＯＪ２８７８等６个品种甘蔗中,同一品种不同器官的过氧化物酶活性有较大的差别;不同品种同一器官过氧化物酶活性也不同,各品种的叶片,叶鞘,茎尖,成熟茎和根的过氧化物酶同工酶数量差异较大,同一品种各器官中以代谢旺盛的叶片和叶鞘的同工酶数较多,不同品种的同一器官中同工酶数也有较大的变化。     

湖南地方芹菜品种总黄酮含量的分析研究

采用Al(NO3)3分光光度法测量湖南地方芹菜茎叶的总黄酮含量。结果表明,湖南14个地方芹菜品种中,芹菜黄酮含量差异很大,并且同一产地不同品种的芹菜黄酮含量差异也很大。张家界市野芹菜中叶黄酮含量最高,为20.350 mg/g,邵阳实心芹菜叶中的黄酮含量最低,为1.541 mg/g。芹菜叶黄酮的含量远远高于芹菜茎黄酮的含量。     

芹菜核酸内切酶CELI基因的克隆及其表达分析

CELI是一种单链特异性核酸酶(singlestrand specific nuclease),主要应用于清除DNA或RNA双链分子存在的单链。测定不同品种芹菜中CELI基因非生物胁迫诱导表达情况,以进一步研究芹菜中核酸内切酶的功能及应用。以芹菜(Apium graveolens L.)为试验材料,分别从‘六合黄心芹’和‘文图拉’中克隆出核酸内切酶CELI基因序列。通过生物信息学的方法对所得序列进行分析,通过实时定量PCR方法进行该基因在芹菜中表达分析。结果表明:来源于2种芹菜的CELI基因核苷酸序列高度保守,基因全长均为891 bp,分别编码296个氨基酸。2种芹菜的CELI基因核苷酸序列之间共有20个位点不同,导致3个氨基酸位点发生改变。2种芹菜该酶的蛋白质相对分子质量分别为33.88×103和33.92×103,pI值分别为6.51和6.37。进化分析显示,芹菜中的CELI与同属于伞形科的欧芹进化关系最近,伞形科CELI进化上更接近于菊科。实时定量PCR分析表明,芹菜中CELI基因在根、茎、叶、花不同组织及不同品种之间的表达量有明显差异。对2种芹菜分别进行4℃、38℃、0.2 mol·L-1NaCl、200 g·L-1PEG处理2 h,表达分析显示,4种处理条件下芹菜中CELI基因表达量有明显差异,其中PEG处理表达量呈明显下降趋势。结论:通过逆境处理后的基因表达分析发现,芹菜中CELI基因对非生物胁迫有响应,‘六合黄心芹’中CELI基因的诱导表达量大于‘文图拉’。     

芥蓝主要营养成分与活性氧代谢的研究

以迟花芥蓝品种为材料,对芥蓝不同器官以及同一器官不同部位的营养成分和活性氧代谢进行研究。结果表明:芥蓝的不同器官及同一器官不同部位的营养成分和活性氧代谢水平存在着明显差异。同一器官不同部位的可溶性糖、还原糖、果糖、蔗糖和游离氨基酸含量从上部到下部逐渐下降;不同器官的可溶性糖、还原糖、果糖、蔗糖和游离氨基酸含量以薹茎最高,叶柄次之,叶片最低。同一器官不同部位的硝酸盐和亚硝酸盐含量从上部到下部逐渐增加;不同器官的亚硝酸盐含量以薹茎最低,而叶片和叶柄则较高。同一器官不同部位的SOD、POD、CAT活性从上部到下部逐渐降低,MDA含量逐渐增加;不同器官中以薹茎的SOD、POD活性最高,叶片最低,而CAT活性和MDA含量以叶片最高。可见,芥蓝上部器官以及薹茎的营养成分含量最高,食用安全性最好,随着植株生理年龄的延长,活性氧的清除能力逐渐降低,膜脂过氧化水平逐渐加强,不同器官中以薹茎的活性氧清除能力最高,而叶片最低。     

大樱桃基因组DNA提取及RAPD分析

以大樱桃8个品种为研究对象,利用改进CTAB法进行DNA提取,使用10碱基随机引物,通过PCR进行RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)扩增,建立了鉴定大樱桃品种的分子鉴定图谱。结果表明:较高质量的DNA和理想的RAPD反应体系能够保证RAPD技术具有较好的稳定性;筛选出的不同引物的RAPD扩增谱带组合可用于大樱桃栽培品种的分子鉴定,具有在生产应用的潜在性。     

柠条幼苗发育中苯丙氨酸解氨酶活性

对柠条苗期中7个生长阶段、3种器官中的PAL粗酶进行提取,并测定了相关样品的活性和比活性。结果表明:在柠条干种子中PAL活性较低;浸泡至硬化期,柠条根、茎、叶中的PAL活性和比活性均呈抛物线变化;柠条根中PAL活性和比活性以真叶期最高,其茎和叶中PAL活性和比活性以速生期最高。     

基于RAPD分子标记芹菜品种亲缘关系分析研究

[目的]研究RAPD分子标记芹菜品种亲缘关系分析方法。[方法]以来自中国不同地区4JD种不同品种的芹菜为试材,对RAPD技术在鉴定芹菜品种中的科学性进行验证与分析。[结果]13种不同长度引物扩增的不同品种芹菜DNA的谱带清晰度以及数量等有明显区别,在相似系数为0．61时,可将所有测试芹菜品种划分为4类。[结论]RAPD技术是适用于分析芹菜品种亲缘关系的简易与理想的DNA分子标记技术。能很好的区分芹菜品种间亲缘关系的远近。     

关于低硝酸盐莴笋品种筛选技术的研究

本文对１５个离笋品种进行了成株期食用茎、功能叶、苗期功能叶硝酸盐累积量的测定研究。结果表明硝酸盐的累积量在品种间存在较大差异，成株期食用茎最大差异达７１％；成株期功能叶最大差异达７９％；苗期功能叶的最大差异达６２％；同一品种不同生育期硝酸盐累积量以幼苗期为高，苗期功能叶与成株期功能叶之间的差异可达４６％～７８％；同一品种不同器官硝酸盐含量也存有差异，茎的含量一般大于叶片的含量，差异可达１６％～２１％；食用茎和功能叶的硝酸盐累积量的相关性达极显著水平（ｒ＝０．７９３６）。     

RAPD法鉴定紫花苜蓿品种的条件优化

以阿尔冈金等6个地方主栽的紫花苜蓿品种为材料,对随机扩增多态性DNA标记(random amplified polymorphic DNA,RAPD)法鉴定不同紫花苜蓿品种的试验条件进行了优化。结果表明,使用改良的CTAB法提取紫花苜蓿基因组DNA蛋白较少,质量较高;PCR扩增反应体系中使用1 U/μL的TaqDNA聚合酶、10 ng/μL的DNA模板和300μmol/L的dNTP,扩增的条带较多,且较清晰,适宜于后续RAPD法鉴定;从100条10个碱基的随机引物中筛选出S37与S140两条引物,适用于6个不同苜蓿品种的鉴定。     

不同马铃薯品种对镉的富集特性研究

对11个马铃薯品种不同器官中重金属镉元素的吸收富集特性进行研究,结果表明:参试马铃薯品种的根、茎、叶中镉含量差异较大,其平均值根最高(1.3045 mg/kg),其次为茎(0.8253mg/kg)、叶(0.5533 mg/kg),薯肉含量最低(0.0519 mg/kg);不同马铃薯品种根、茎、叶的镉富集系数均较高。种植中薯3号、N108、紫花851等品种能降低镉污染。     

毛竹、杭白菊粗提物对桃蚜和小菜蛾的生物活性测定

室内测定了毛竹叶片和杭白菊根、茎、叶的粗提物对桃蚜和小菜蛾的生物活性.结果表明,在以甲醇、石油醚、苯、乙醚和水为溶剂提取的竹叶和菊叶的粗提物中,甲醇粗提物对桃蚜的触杀效果最好,在100g干叶/L生药质量浓度下,桃蚜两天后的死亡率达到85%以上.以甲醇为溶剂提取的竹叶和杭白菊根、茎、叶的粗提物对小菜蛾成虫有明显产卵忌避作用,小菜蛾成虫的产卵忌避率为65%～94%.其中,竹叶和菊叶的甲醇粗提物对小菜蛾的拒食活性也较好,在48h后小菜蛾二龄幼虫的拒食率分别为95.1%和87.3%;而菊茎和菊根对小菜蛾的拒食活性较差,在48 h后小菜蛾的拒食率低于50%.     

柠檬马鞭草在不同生长期精油含有率及组分变化的研究

本实验是为摸索柠檬马鞭草在上海地区的生长规律及不同生长时期精油含有率和成分的变化，以找到最佳收获时间和收获器官而设计此方案。测定了株高变化，用水蒸汽蒸馏装置提取精油，用气相色谱仪(GC)和气相色谱质谱联用仪(GC-MS)分析了不同时期精油含有率与成分的变化，对比不同器官(叶和茎)、不同部位和不同采样时间的精油含有率的差异。实验结果表明：柠檬马鞭草四月到六月株高增长速度较快，其精油主要成分为柠檬醛、柠檬烯和姜黄烯，在整个生长季节中六月中旬精油含有率达到最高，一天中精油含有率在中午12：00时达到最高，叶片精油含有率高于茎，枝条上部鲜叶精油含有率要高于下部。     

水稻CAS基因的克隆及分析

[目的]克隆并分析水稻OsCAS基因,研究其在水稻生长中的作用。[方法]以粳稻（Ooza sativa L．ssp．japonica）品种日本晴为材料进行总RNA提取并进行RT—PCR扩增,随后鉴定OsCAS在水稻不同组织中的表达。[结果]OsCAS基因包含1164个碱基对,编码387个氨基酸。实时定量PCR结果显示,OsCAS在水稻不同组织中的表达水平存在差异,叶片中表达量最高,茎中略低,根中的表达量最低。[结论]该研究可为水稻OsCAS基因在抗逆反应中的作用研究提供试验基础。     

菊花品种的过氧化物酶同功酶分析

试验对40多个菊花品种进行过氧化物酶同功酶分析的结果表明:1、酶谱表达具品种特征.品种间酶谱的差异程度与品种性状的差异程度表现一致;而且同品种植株在同一生育期内,叶、茎器官的酶谱均表现稳定,也不因年份或栽培条件而变化.2、同品种不同器官、生育期酶谱具特异性,叶、茎、花三器官之间存在酶谱差异.而且均随生育期的进展,谱带增多,活性加强.其中叶、茎为适宜取样器官,适宜取样时期为含苞待放期或花完全开放期.     

GC含量丰富的人Ⅰ型原胶原蛋白基因片段克隆及其序列分析

鉴于做转基因牛羊乳腺生物反应器的需要,根据GenBank中所公布的人Ⅰ型原胶原蛋白基因序列设计引物,利用健康人的胎盘中提取的基因组DNA为模板,通过优化的长距离PCR,成功地克隆出GC含量丰富的人Ⅰ型原胶原基因组DNA片段,序列测定与分析的结果显示中国人Ⅰ型原胶原蛋白基因组DNA片段与GenBank中所公布出来的序列所对应的部分有99.5%的同源性,其中外显子部分与GenBank中的对应部分完全一致;而在内含子中,本研究克隆到的基因与GenBank中公布出来的序列有不少差异,尤其表现在内含子1和2中,其中内含子2要比GenBank中公布的基因内含子2多出14个碱基,这14个碱基具体有什么作用尚需要进一步阐明,内含子间的差异凸显了东西方人种之间基因序列的多态性.     

甘肃瑞香提取物对菜粉蝶幼虫生物活性的影响

为探明甘肃瑞香(Daphne tangutica Maxim)对菜粉蝶幼虫的生物活性,以甘肃瑞香的全株、叶、茎皮、茎木质部、根皮和根木质部为研究对象,以甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、苯和石油醚为溶剂,采用索氏法提取其活性成分,明确其最佳的杀虫活性部位和提取溶剂.结果表明:在干粉100mg/mL的质量浓度下,各溶剂瑞香全株的提取物均对菜粉蝶幼虫表现出明显的拒食、胃毒和触杀作用,其中苯的提取效果最好,其粗提物对菜粉蝶5龄幼虫24h的拒食率为92.29%,胃毒作用的LD50为19.56μg/头,7d后触杀作用的LD50为52.56μg/头.甘肃瑞香不同部位的苯提取物对菜粉蝶5龄幼虫均表现出明显的拒食、胃毒和触杀作用,其活性部位表现为甘肃瑞香叶>根皮>茎皮>茎木质部>根木质部.甘肃瑞香叶粗提物杀虫活性最高,其粗提物对菜粉蝶5龄幼虫24h的拒食率为94.59%,胃毒作用的LD50为8.47μg/头;7d后触杀作用的LD50为50.41μg/头.     

不同小麦品种穗发芽特性的鉴定及TaRHA2b基因序列差异分析

为了开发新的抗穗发芽分子标记,以50个发芽指数具有显著差异的小麦品种为材料,进行穗发芽特性的鉴定,同时对这50个小麦品种的RING finger E3连接酶基因TaRHA2b的核苷酸序列进行测定,然后进行比对分析。结果表明,50个小麦品种的抗穗发芽能力有明显差异;不同小麦品种间TaRHA2b基因序列的长度变化不大,但是存在6个单核苷酸多态性位点,其中第47位碱基的差异造成EcoICRⅠ/Ecl136Ⅱ和SacⅠ/SstⅠ这2个酶切位点的差异。